2. Бактериологическое исследование. Методика бактериологического обнаружения туберкулезных микобактерии основана на их способности противостоять воздействию кислот и щелочей.

Туберкулезная бактерия после такой обработки остается вполне жизнеспособной, что позволяет еще до посева материала избавиться от находящихся в нем посторонних микробов. Ми-кобактерии туберкулеза характеризуются некоторыми основными свойствами, используемыми для их дифференцирования. Они неподвижны, растут только в животном организме или на питательных средах специального состава (обычно с глицерином и яичным желтком); на обычных питательных (МПА) средах не растут. Оптимальная температура, при которой растут туберкулезные бактерии, равна 37 °С, хотя возможен рост в пределах от 30 до 42 °С. Для размножения микробов требуется длительное время: на искусственных питательных средах рост появляется только через 10-30 дней. Колонии микобактерий туберкулеза имеют своеобразный вид, отличающийся шероховатостью (в виде плоских чешуек с возвышенным центром или розеток с углублением в центре), или же они могут быть гладкими блестящими, похожими на капли. На жидких питательных средах образуется толстая морщинистая пленка.

Обычно для посева наследуемого материала пользуются средами Любенац или Петракины. Посев выдерживают в термостате при температуре 37 °С в течение 3 мес, проверяя наличие роста каждую неделю. Наиболее часто рост наблюдается в сроки от

3 до 6 недель. Штаммы, выделенные от больных, леченных химиопрепаратами, вырастают в гораздо более поздние сроки (через 50—70—80 дней). В настоящее время предложены и испытаны ускоренные методы выращивания культур туберкулезных микробов на препаратах — мазках (по Прайсу) и на кровяной среде.

Серологические исследования имеют относительное значение.

3. Биологическая проба является по праву наиболее рациональным диагностическим приемом. Материал может быть введен под кожу или в полость живота морским свинкам. При наличии в материале вирулентных туберкулезных микобактерий обычно на 10-12-й день в месте его введения под кожей образуется уплотнение, переходящее в дальнейшем в незаживающую язву. Свинки погибают от генерализованного туберкулеза через 2—

4 мес. Ускоренная биологическая проба: через регионарный лимфатический узел морской свинки вводят несколько капель наследуемого материала. На 8—10-й день увеличенный лимфатический узел вырезают и исследуют бактериоскопически в препаратах-отпечатках на присутствие туберкулезных микобактерий.

66. ботулизм Материалом для исследования могут служить рвотные массы, промывные воды (50-

100 мл) желудка, испражнения, моча (5-60 мл), кровь (5-10 мл).

Исследование ведется в двух направлениях:

1. Обнаружение ботулинического токсина и определение его типа в опыте

нейтрализации на белых мышах.

2. Выделение возбудителя с использованием специальных методов

культивирования анаэробов.

Предварительный ответ (по результатам биопробы) через 4-6 часов.

Окончательный – на 6-8-й день.

67. 3. Лабораторная диагностика столбняка. Бактериологическое исследование: исследуется материал, взятый из раны:

• гной;

• кусочки тканей;

• инородные тела;

• обрывки одежды;

• тампоны, закладываемые в рану при перевязке;

• перевязочный материал, содержащий выделения из раны;

• в случаях столбняка после родов или аборта берут на исследование выделения из влагалища и матки;

• при подозрении на столбняк у новорожденного исследованию подвергают выделения из пуповины;

• при исследовании трупа также берут материал из раны, если она имеется, из различных воспалительных очагов и старых рубцов.

В некоторых случаях столбняка происходит генерализация инфекции, возбудитель может быть обнаружен во внутренних органах. Поэтому берут на исследование от трупа кровь, кусочки печени и селезенки. Исследование материала производится с целью обнаружения в нем столбнячного токсина и возбудителя столбняка.

Обнаружение столбнячного токсина: исследуемый материал растирают в стерильной ступке, добавляют двойной объем физиологического раствора. Часть материала засевают в 2 флакона с жидкой питательной средой. Для постановки реакции нейтрализации на животных экстракт исследуемого материала вводят внутримышечно 2 мышам по 0,5 мл экстракта, а еще 2 мышам — те же дозы с противостолбнячной сывороткой. В зависимости от количества токсина симптомы столбняка у животных развиваются на 1-е или 2-е сутки. У животных, получивших токсин с противостолбнячной сывороткой, симптомы не появляются, что свидетельствует о наличии в исследуемом материале столбнячного токсина.

Одновременно с постановкой реакции нейтрализации производят посев растертого материала в 2 флакона или 2 пробирки с питательной средой {бульон Мартена, бульон Вейнберга) под слоем вазелинового масла. Перед посевом из среды удаляют кислород путем кипячения 15 мин, а затем охлаждают до 40— 50 °С и в нее добавляют 0,5% глюкозы. После культивирования при температуре 35 «С на 2, 4, 6 и 10-е сутки микроскопируют мазки из посевов и исследуют культуральную жидкость на наличие столбнячного токсина. Для этого ставят реакцию нейтрализации с противостолбнячной сывороткой. При обнаружении в посеве столбнячного токсина и наличии грамположительных палочек с крупными спорами дают положительный ответ.