3.3.1. Техника приготовления нативного препарата, тонкого мазка, толстой капли, препаратов после обогащения

Приготовление мазков крови

Мазки крови приготовляют на чистых обезжиренных предметных стеклах, пользуясь шлифованными предметными или покровными стеклами. Край этих стекол должен быть уже поверхности предметного стекла, на котором готовят мазки. В случае необходимости углы шлифованных стекол надпиливают. Взять предметное стекло, с находящейся на расстоянии 1-1,5 см от края каплей крови, в левую руку, располагают его между 1 пальцем с одной стороны и II и III пальцами — с другой так, чтобы капля крови оказалась сверху и справа. Шлифованное предметное располагают слева от капли под углом 45°, держа его 1 и II пальцами правой руки так, чтобы кончики пальцев касались его длинных ребер (2). Продвигают стекло вправо до соприкосновения с каплей крови, и чтобы кровь растеклась по ребру шлифованного стекла. Потом достаточно быстро, спокойно и не надавливая продвигают стекло влево до тех пор, пока капля крови не будет исчерпана. Правильно сделанный мазок имеет равномерную толщину, желтоватый цвет, просвечивает и на конце заканчивается щеточкой; он занимает не более 3/4 и не менее 1/2 длины предметного стекла. Приготовленный мазок подсушивают на воздухе, после чего на его поверхности, ближе к началу мазка, углом предметного стекла или грифельным карандашом надписывают фамилию больного.

Приготовление толстой капли.

3 капли крови, нанесенные на предметное стекло на некотором расстоянии друг от друга, расширяют углом чистого предметного стекла до размера однокопеечной монеты. Маркируют препарат карандашом по стеклу или специальными чернилами. Затем препарат подсушивают на воздухе в течение 1-2 ч. Фиксация мазков крови, до окраски мазки крови необходимо зафиксировать.

Толстый мазок кала с целлофаном (метод Като). Яйца гельминтов обнаруживают в толстом мазке испражнений, просветленном глицерином и подкрашенном малахитовой зеленью. Предварительно гидрофильный целлофан, толщиной 22 мкм, нарезают пластинками с размером сторон 20x40 мм и погружают на сутки в раствор следующего состава: 6 мл 3% водного раствора малахитовой зелени, 500 мл глицерина и 500 мл 6% водного раствора фенола. 100 мг испражнений наносят на предметное стекло, покрывают обработанной пластинкой целлофана и придавливают резиновой пробкой так, чтобы испражнения не растекались из-под целлофана. Этим методом можно выявить яйца аскарид, власоглавов, лентецов, трематод, тениид. Однако для выявления яиц анкилостомид и карликового цепня метод Като мало эффективен.

Нативный мазок. Небольшое количество испражнений переносят палочкой на предметное стекло в каплю 50% водного раствора глицерина (для его получения смешивают равное количество дистиллированной воды и глицерина) и растирают до получения равномерного прозрачного мазка. На одном стекле готовят два мазка. При небольшом количестве яиц в испражнениях этим методом выявить их удается не всегда. Поэтому исследование испражнений на яйца гельминтов только этим методом не является полноценным и достоверным.

Нативный мазок мочи готовят из осадка мочи после центрифугирования. Надосадочную жидкость сливают, встряхивают осадок и наносят на предметное стекло и микроскопируют.

Метод обогащения.

При скудном содержании простейших в кале они могут быть не обнаружены при микроскопировании нативных мазков и мазков с раствором Люголя. В этих случаях рекомендуется применить формалин-эфирное обогащение. Для этого кусочек кала величиной с горошину тщательно эмульгируют деревянной палочкой в центрифужной пробирке в 6 мл 10% раствора формалина на изотоническом растворе. В пробирку добавляют 2 мл эфира, закрывают резиновой пробкой, энергично встряхивают в течение 1 мин, а затем центрифугируют 3 мин при 1500 об/мин или 1 мин при 2500 об/мин. После центрифугирования эмульсия разделяется на четыре слоя: окрашенный в желтый цвет верхний эфирный слой, слой фекалий (фекальная пробка), затем слой формалина и под ним осадок, в котором содержатся цисты простейших. Деревянной палочкой (отдельной для каждой пробы) слой фекалий отделяют от стенок пробирки и все содержимое ее, за исключением осадка, сливают. Наклонив пробирку отверстием книзу, быстро протирают ее стенки ватным или марлевым тампоном, стараясь удалить большее количество жидкости, но не затрагивая осадок. Переворачивают пробирку отверстием вверх, переносят отдельной пипеткой осадок на предметное стекло, эмульгируют его в капле раствора Люголя и исследуют по обычной методике.

Кроме метода мазков, применяют более сложные, но и более эффективные методы — методы обогащения, основанные на концентрации яиц в препаратах. Эти методы условно можно разделить на 2 большие группы:

1) концентрация яиц на поверхности жидкости (методы флотации, всплывания);

2) концентрации яиц в осадке (методы осаждения, седиментации).

Метод Калантарян (с флотационным раствором). Основан на том, что в жидкости с высокой относительной плотностью яйца гельминтов как более легкие всплывают на поверхность, где и концентрируются.

Для этого используется раствор Калантрян (1 кг нитрата натрия растворяют в 1 л воды; смесь кипятя до образования пленки, остужают; относительная плотность раствора 1,38). В химическом стакане тщательно размешивают стеклянной палочкой 5—10 г фекалий со 100-120 мл флотационного раствора. Сразу после размешивания удаляют всплывшие на поверхность крупные частицы. Стаканчик покрывают предметным стеклом так, чтобы оно соприкасалось с поверхностью жидкости. Если жидкости мало, ее следует долить до полного соприкосновения смеси с предметным стеклом. Оставляют для всплытия яиц на 20—30 мин, после чего предметное стекло снимают, кладут под микроскоп и просматривают без покровного стекла.

Хорошо всплывают все яйца, в том числе трематод, крупных цестод и неоплодотворенные яйца аскарид, яйца власоглава.

Метод Фюллеборна позволяет исследовать большое количество материала и широко используется. В небольшую баночку помещают 5 г фекалий и тщательно размешивают с 20-кратным количеством насыщенного раствора хлорида натрия, добавляя его при помешивании небольшими порциями. Всплывшие на поверхность крупные частицы удаляют, баночку до краев наполняют раствором хлорида натрия и покрывают предметным стеклом так, чтобы нижняя поверхность соприкасалась с жидкостью. Баночку оставляют стоять на 45—90 мин (в течение этого срока яйца всплывают и держатся на поверхности смеси), затем предметное стекло осторожно поднимают, быстро переворачивают и приставшую пленку микроскопируют под малым увеличением без покровного стекла

Методом Фюллеборна хорошо выявляются яйца цепня карликового и всех нематод, за исключением неоплодотворенных яиц аскарид. Так как яйца трематод, большинства цестод всплывают, нужно исследовать и осадок со дна баночки. Препараты из осадка мало прозрачны, поэтому для просветления можно добавить каплю глицерина.

Метод Красильникова (с применением детергентов). Под действием поверхностно-активных веществ, входящих в состав детергентов (стиральных порошков), яйца гельминтов освобождаются от фекальных масс и концентрируются в осадке.

Для этого используют 1%-ный раствор стирального порошка "Лотос".

В центрифужную пробирку помещают комочек кала и приливают раствор детергента. Соотношение кала к жидкости 1:10. Хорошо перемешивают их до образования суспензии. Через 30 мин содержимое пробирки встряхивают 1—2 мин и центрифугируют 5 мин при 1500 об./мин. Из осадка готовят 2 препарата на одном стекле.

Метод Бермана применяется для выявления личинок гельминтов (угрицы). Полученный от больного кал (лучше свежевыделенный) в количестве 5 г помещают на мелкую металлическую сетку в стеклянную воронку, закрепленную в штативе. На нижний конец воронки надевают резиновую трубку с зажимом (аппарат Бермана). Сетку приподнимают и в воронку наливают нагретую до 50 °С воду таким образом, чтобы нижняя часть сетки была погружена в воду. Личинки из кала в связи с термотропностью активно выползают в теплую воду и скопляются в нижней части воронки. Через 2—4 ч зажим открывают, жидкость выпускают в одну или две центрифужные пробирки. Цетрифугируют в течение 2—3 мин, после чего быстро сливают поверхностный слой, а осадок помещают на предметное стекло и исследуют под микроскопом.