Резистентность спермиев. Оценка качества спермы по микробной загрязнённости

R

Устойчивость половых клеток к воздействию 1% раствора хлорида натрия. Выражается количеством (мл) раствора хлорида натрия, которое требуется добавить к 1 мл свежей спермы, чтобы наступила некроспермия. Обеспечивается резистентность качеством липопротеидной оболочки. Приобретается в канале придатка (оболочка).

- устойчивость к неблагоприятным факторам внешней среды;

- предупреждение агглютинации;

- обусловливает отрицательный электрический заряд.

Выражается в условных единицах (например, 500).

Методы определения:

1. По Милованову;

2. По Короткову (ускоренный метод).

По Милованову

В течение первых 15-20 минут при температуре +20-25 ºС. С использованием теплого 1% раствора хлорида натрия (38-42 ̊С).

В теплую стеклянную колбу отмеривают 0,02 мл свежеполученной спермы, предварительно оцененной по активности. Из бюретки осторожно по стенке сосуда добавляют 5 мл 1% раствора натрия хлорида. Содержимое перемешиваю путем вращения в горизонтальной плоскости. С помощью стеклянной палочки наносят каплю разбавленной спермы на теплое предметное стекло, при малом увеличении определяют активность. Если хотя бы 1 клетка движется, то каждый последующий раз добавляют по 10 мл 1% раствора хлорида натрия по стенке сосуда. С каждым последующим исследованием объем капли должен быть больше. Суммируют количество мл.

R=V₁/V₂

V₁– количество раствора хлорида натрия,V₂– объем исследуемой спермы.

По Короткову

4 пронумерованных пенициллиновых флакона, чистых, теплых. Флакон № 1: 0,02 мл свежеполученной спермы, добавляют10 мл 1% теплого раствора хлорида натрия. Содержимое перемешивают, через 2 минуты определяют активность. Если активности нет, то резистентность = 500.

Если активность есть, то из 1го флакона переносят 0,5 мл смеси, добавляют 0,5 мл хлорида натрия. перемешивают, определяют активность через 2 минуты. Если наступает гибель половых клеток, резистентность= 1000. Если активность сохраняется, то из флакона №2 во флакон № 3 переносят четверть мл смеси, добавляют такое же количество хлорида натрия. Оценивают активность. Если активности нет, то R =2000. Если есть. То из флакона №4, где налито 10 мл хлорида натрия, в третий переносят по 0,5 мл. В конечном итоге R= 2*n+ 2000 (какая-то дебильная формула).

N– количество внесений из 4 флакона в 3, при этом каждое внесение = 2000, +2000 – уже имеющаяся резистентность.

В норме у качественной спермы, полученной от жвачных, резистентность = 10000-40000, у хряка 2-5тыс, у жеребца 500-1500.

Определение микробной загрязненности

Наряду с общеизвестными способами оценки спермы: определением густоты, активности, концентрации сперматозоидов, определением соотношения живых и мертвых форм спермиев, обязательным является и ветеринарно-санитарная оценка спермы. Несоблюдение этого условия может привести к распространению (через сперму) многих инфекционных болезней (бруцеллез, туберкулез, лептоспироз, трихомоноз, кампилобактериоз, ящур и др.), а также инфицированию половых органов самок условно-патогенной микрофлорой (стафилококки, стрептококки, синегнойная и кишечная палочки и др.).

Методика определения коли-титра (на среде Булиржа).

Сперму разводят многократно последовательно стерильным физ-раствором – 1:1, 1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000, 1:100000, 1:1000000 – и из каждого разведения делают высев на среду Булиржа.

Посевы выдерживают в термостате при температуре 37-37,5°С и через сутки проверяют рост. При наличии в сперме бактерий из группы коли изменяется цвет среды, а в газовых трубочках появляется газ. О показателе коли-титра судят (до 1:1000000) по степени разведения исследуемого материала и роста микробов в среде.

При хорошем ветеринарно-санитарном состоянии и соблюдении санитарно-гигиенических правил при получении спермы от производителей коли-титр не превышает 1:1 - 1:10.