Порядок оттаивания спермы, замороженной по разным технологиям, и её оценка на пункте ио Атрибуты

1. Наличие водяной бани.

2. Наличие корнцанга или пинцета.

3. Перчатки, очки.

4. Цитрат натрия.

5. Чистые пенициллиновые флаконы.

Оттаивание спермы, замороженной в виде соломинок

Соломинки бывают объемом 0,25 или 0,33 мл.

Правой рукой в перчатке открывают сосуд с жидким азотом, где хранится сперма. Левой рукой поднимают контейнер, в котором находится сперма. Поднимают крышку. В правую руку берут пинцет, бранши пинцета в течение 10 секунд охлаждают в парах жидкого азота (иначе соломинка приклеится). С помощью охлажденных браншей пинцета из пенала или алюминиевого пакета извлекают нужное количество соломинок. Их встряхивают, чтобы освободиться от излишнего количества азота. Немедленно переносят их для оттаивания в водяную баню. В том случае, если из жидкого азота по каким-то причинам извлекли соломинку со спермой другого быка, её уничтожают (обратно убирать нельзя).

Оттаивание спермы в соломинках проводят при 38 ̊С в течение 10 секунд. За это время сперма достигает температуры 0̊С. Соломинки вынимают, насухо протирают стерильной салфеткой. Одновременно можно оттаивать такое количество замороженной спермы (независимо от технологии), которое техник по ИО может использовать в течение 10 минут (обычно 1, иногда 2). Оттаивать лучше в горизонтальном положении, поэтому рабочие размеры водяной бани должны соответствовать длине соломинки (примерно 150 мм).

Оттаивание спермы в виде необлицованных гранул При объеме гранулы 0,1-0,2 мл.

Стерильный пенициллиновый флакон. Цитрат натрия (2,9%). Водяная баня ёмкостью на 1 литр. Пинцет.

Правой рукой снимают крышку, левой рукой канистру выдвигают до горловины, остужают бранши пинцета, марлевый мешочек (горловину) прижимают к стенке сосуда с жидким азотом. С помощью ножниц разрезают часть мешочка, остуженными браншами пинцета извлекают гранулу.

Гранулу помещают в пенициллиновый флакон с 1 мл цитрата натрия, прогретого до + 38-40 ̊С на водяной бане (1 минута). Оттаивание происходит при 38-40̊С, то есть его помещают на водяную баню (удерживают в руках, покачивая, в течение 8-10 секунд, пока не исчезнет стерженек льда).

При объеме гранулы 0,5 мл.

Пенициллиновый флакон (стерильный), водяная баня, пинцет.

Правой рукой убирают крышку, канистру поднимают к горловине, остужают пинцет, вскрывают марлевый мешочек, извлекают 2 гранулы,помещают в пенициллиновый флакон, прогретый в течение 1 минуты при 38-40 ̊С. оттаивание при той же температуре в течение 8-10 секунд (на водяной бане).

Оттаивание спермы, замороженной в виде облицованных гранул

Объем гранул 0,25 или 0,33 мл.

Водяная баня, пинцет.

Остужают бранши пинцета в парах жидкого азота, подтягивают пенал, извлекают 1 гранулу. Её помещают в водяную баню (просто в воду) при 38-40 ̊С на 8-10 секунд. Если оболочка прозрачная, то после извлечения гранулы видно исчезновение стерженька льда. От остатков воды гранулу освобождают марлевой салфеткой. Затем оценивают активность каждой гранулы. Если оболочка из темного стекла, то одна гранула вскрывается, содержимое выдавливают на предметное стекло, определяют активность.

Криогенное оборудование. Техника безопасности при работе с сосудами Дьюара. Транспортировка спермы

Сосуды для замораживания спермы.

Стационарное хранилище для хранения замороженной спермы: ХБ – 0,5 (хранилище биологическое – 0,5 тонны), ХСЖА (хранилище стационарное для жидкого азота, тонна и более), КВ 6202 (емкость такая же). Использование этих сосудов позволяет хранить замороженную сперму без подзарядки жидким азотом около 3 месяцев. Сосуды типа СДП-6 – СДП-90 предназначены для стационарного хранения и транспортировки жидкого азота. Сосуды типа СДСТ или СДС – с более широкой горловиной.

Контейнеров малой емкости: СДС–6 – СДС-10.

Для транспортировки: используют термосы, сосуды Дьюар, СДС и другие.

Замораживают сперму в стационарном хранилище типа КВ-6202 или ХБ-0,5 в газообразном азоте при температуре -150± 20°С, на щите из нержавеющего металла толщиной 1,5-2 мм. Одновременно замораживают до 750 спермодоз. Цикл замораживания продолжается 7минут.

Уровень жидкого азота при замораживании с обдувом необходимо поддерживать на расстоянии 6-8 см до щита замораживающего устройства. При замораживании спермы без обдува щит замораживающего устройства должен касаться поверхности жидкого азота. При этом штативы с соломинками располагают в один ряд. Изменение температуры спермы и испаряющегося газообразного азота контролируют самопишущим потенциометром КСП-4 с подключенными медно-константановыми термопарами.

После замораживания соломинки со спермой помещают в пластмассовые стаканы или тубы, предварительно наполненные жидким азотом. Для сбора соломинок используют специальный собиратель с деревянной рукояткой. Его металлическую часть охлаждают в жидком азоте, затем вставляют в штатив, осторожно проводят вдоль него, в результате чего все соломинки ссыпаются в собиратель. После этого соломинки поворачивают и перекладывают в пластмассовые стаканы для хранения в стационарном хранилище.

Хранят замороженную сперму в стационарных хранилищах типа КВ-6202, ХБ-0.5 или ХБ-0,2 в пластмассовых стаканах, полностью погруженных в жидкий азот. Канистры с поднимателем стаканов заранее должны быть помещены в хранилище.