Вопрос №28 «титр вирусов и принципы его определения в единицах 50%-ого инфекционного действия».

Титр – это количество вируса, содержащегося в единице объема материала. Из локальных повреждений, вызываемых вирусами, наиболее известны бляшки и оспины на ХАО КЭ. Если имеются данные обратные то инфекционная активность вируса может быть измерена в бляшкообразующих единицах (БОЕ) или оспообразующих единицах (ООЕ) 1БОЕ = дозе вируса, способной вызвать образование одной бляшки, а одна ООЕ – одной оспины. Методы: заражают несколько КК или КЭ на ХАО. Высчитывают среднеарифметическое количество оспин или бляшек. Оно = БОЕ или ООЕ вируса. Рассчитывают сколько БОЕ или ООЕ приходится на единицу объема вируссодержащего материала. Это и есть титр. Т=n/Va, где n-сред арифметическое бляшек или оспин, а –разведение материала, V – введенная доза. Метод 50%-ного инфекционного действия. За единицу количества вируса принимается доза, которая способна вызвать инфекционный эффект у 50% зараженных. Число таких доз в единице материала и будет выражать титр вируса в этом материале. Готовят 10 кратное разведение исследуемого материала, затем одинаковыми дозами заражают равные группы живых тест объектов. Учитывают результат действия и находят в каком разведение вирус проявил свое действие на 50%. Если сразу такое разведение не найдено то оно рассчитывается по формуле Т=lgB – (b-50)/(b-a) *lgd, где В – разведение дающие инфекционный эффект более 50%, b – процент дающий инфекционный эффект более 50%, а – менее 50% d – кратность разведения. За 1ГАЕ принимается такая доза вируса, которая способна агглютинировать примерно 50% эритроцитов содержащихся в том же, что и вирус объеме 1% суспензии отмытых эритроцитов. Готовят ряд последовательных кратных разведений материала и к каждому разведению добавляют 1% суспензию. Реакция оценивается в крестах. Реакция с 2 крестами содержит 1ГАЕ, которая умножается на кратность разведения.

Вопрос №29 «биологическая характеристика вируса ящура. Принцип диагностики»

Ящур – остро протекающая высококонтагиозная болезнь парнокопытных, проявляющаяся лихорадкой, везикулярным поражением слизистых оболочек рта, кожи венчика и вымени, у молодых животных поражением слизистых оболочек рта, кожи венчика и вымени, у молодых животных поражением миокарда и скелетных мышц. Ящур регистрируется во многих странах мира. Инкубационный период продолжается 1-3 дня. Иногда до 7-10 дней. Самый характерный признак данного заболевания у животных – везикулярное поражение слизистых оболочек рта и кожи венчика и вымени. У КРС – протекает остро, доброкачественно у взрослых. Вначале отмечают ухудшение аппетита, повышенную саливацию, повышение температуры тела. На 2-3 день на внутренней поверхности губ и языке (у некоторых в области межкопытной щели, на вымени) появляются афты. Через сутки образуются эрозии. Через 2-3 недели эрозии заживают и животное выздоравливает. Вирус относится к семейству Picornaviridae, роду Aphthovirus, РНК – содержащий, не имеет суперкапсидной оболочки. Вирионы – мелкие частицы икосаэдрической формы. Вирус довольно устойчив к действиям внешней среды. Восприимчивы домашние и дикие парнокопытные. Выделять вирус можно уже в инкубационный период. Переболевание может сопровождаться длительным вирусоносительством. Около 50% выздоровевшего КРС могут выделять вирус в течение 8 месяцев, а некоторые до 2 лет. Вирус культивируется на естественно восприимчивых и лабораторных животных: новорожденных мышатах, крольчатах морских свинках. Хорошо размножается в КК почек. Гемагглютинирующими свойствами не обладает. Известно 7 АГ-нных типов ящура: А, О, С, Сат-1, Сат-2, Сат-3, Азия-1. В организме естественно восприимчивых животных вирус индуцирует образование вируснейтрализующих, комплементсвязывающих и преципитирующих АТ.

Вирус ящура обычно определяют в РСК. Основными компонентами РСК служат АГ, АТ, комплемент, гемолитическая сыворотка и эритроциты барана; в качестве разбавителя используют ИХН или различные буферные растворы. АГ и сыворотки могут обладать антикомплементраностью – способностью адсорбировать комплемент, что задерживает гемолиз и искажает результаты реакции. Чтобы избавиться от антикомплементраности, АГ очищают различными методами: ацетоном, фреоном, эфиром, хлороформом в зависимости от вида ткани, используемой в качестве АГ и вируса. АГ для РСК готовят из органов зараженных животных, из аллантоисной и амниотической жидкости зараженных КЭ, а также из жидкой среды инфицированных КК. РСК применяют для определения типов и подтипов вируса ящура, вызывающих заболевание животных, для проверки производственных штаммов вируса ящура при изготовлении вакцин и лабораторных штаммов в научно-исследовательской работе.

ВОПРОС №30 «ЛЮМИНИСЦЕНТНАЯ МИКРОСКОПИЯ. ОСНОВЫ ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНЦИИ».

В основе метода лежит явление люминесценции, сущность которого в том, что поглощая различные виды энергии (световую, электрическую) атомы некоторых веществ переходят в возбужденное состояние, а затем, возвращаясь в исходное состояние, выделяют поглощенную энергию в виде светового излучения. Люминесценция наблюдается в виде флуоресценции - свечение, возникающее в момент облучения возбуждающим светом и прекращающееся сразу после его окончания. Фосфоресценция – свечение продолжающееся длительное время и по окончании процесса возбуждения.

ВОПРОС № 31 «ВИРУС БЕШЕНСТВА, ЕГО СВОЙСТВА. ПАТОГЕННОСТЬ. ПРИНЦИПЫ ДИАГНОСТИКИ».

Бешенство – острая инфекционная болезнь, протекающая с тяжелым поражением НС, как правило, с летальным исходом. Восприимчивы человек и все млекопитающие животные. Бешенство распространено повсеместно. Возбудителя передают собаки, кошки, дикие грызуны и хищники, а также кровососущие летучие мыши-вампиры. Продолжительность инкубационного периода зависит от места, силы укуса, количества и вирулентности попавшего в рану вируса, резистентности покусанного животного. Инкубационный период длится от 1-3 недель до года и более. Болезнь протекает остро. Клинические признаки при атипичном течение – потеря аппетита, атония рубца, паралич глотки, слюнотечение. Также может быть буйное и тихое течение болезни. Вирус бешенства (ВБ) обладает выраженной нейропробазией. Проникая с периферии по нервным стволам в центральную НС центростремительно, он распространяется в организме центробежно по периферическим нервам и попадает в разные органы, включая слюнные железы.

Вирус относится к семейству Rhabdoviridae, роду Lyssavirus. Вирионы имеют форму стержня с обрубленным концом. Вирион вируса – РНК-содержащий со спиральным типом симметрии, имеет липопротеидную оболочку. Низкие температуры консервируют вирус. Вирион ВБ содержит гликопротеидный и нуклеокапсидный АГ. Первый индуцирует образование вируснейтрализующих АТ, а второй – комплементсвязывающих и преципитирующих АТ. В организме вирус локализуется главным образом в ЦНС, в слюнных железах, слюне. Культивируется на мышах, кроликах, морских свинках, в первичных культурах клеток. Размножение вируса в КК не всегда проявляется ЦПД. Источников инфекции являются больные животные. Они передают вирус во время укуса. Диагноз на бешенство ставят на основании эпизоотологических, клинических данных и результатов лабораторных исследований, имеющих решающее значение. Для исследования направляют в лабораторию свежие трупы мелких животных целиком, а от крупных и средних животных – голову с 2 шейными позвонками. Трупы мелких животных перед отправкой на исследование обрабатывают инсектицидами. Лабораторная диагностика включает: обнаружение вирусного АГ в РИФ и РДП, телец Бабеша-Негри и биопробы на белых мышатах. РИФ – для данной реакции биопромышленность выпускает флуоресцирующий антирабический гамма-глобулин. Принцип – 1)Делают отпечатки или мазки из различных отделов ГМ левой и правой стороны на предметных стеклах (не менее 2 препаратов из каждого отдела); 2)Их высушивают, фиксируют в охлажденном ацетоне; 3)Высушивают , наносят флуоресцирующий гамма-глобулин; 4)Помещают во влажную камеру; 5)Тщательно промываю ИХН, споласкивают водой, высушивают на воздухе, наносят нефлуоресцирующее иммерсионное масло и просматривают под люминесцентным микроскопом. В препаратах, содержащих АГ ВБ, наблюдаются разной величины и формы флуоресцирующие желто-зеленым цветом гранулы в нейронах, но чаще вне клеток. РДП – 1)Наливают на предметные стекла агаровый гель 2)Делают лунки (Д=4-5 мм); 3)Лунки заполняют пастообразной массой из отделов ГМ. 4)Контроли с «+» и «-« АГ ставят на отдельном стекле по тому же трафарету; 5)После заполнения лунок препараты помещают во влажную камеру и ставят в термостат при 37С на 6 часов, затем при комнатной температуре на 18 часов. Реакцию считают положительной при появлении одной или 2-3 линий преципитации любой интенсивности между лунками, содержащими суспензию мозга и антирабический гамма-глобулин. ВЫЯВЛЕНИЕ ТЕЛЕЦ – на предметных стеклах делают тонкие мазки или отпечатки из всех отделов ГМ и окрашивают по Селлерсу или Муромцеву или Манну или Ленцу. БИОПРОБА – отбирают белых мышей (16-20 грамм), нервную ткань из всех отделов ГМ растирают в ступке со стерильным песком, добавляют ИХН до 10-% суспензии, отстаивают 30-40 минут и для заражения используют надосадочную жидкость для заражения мышат. Заражают 10-12 шт: половину интрацеребрально по 0,03 мл, половину подкожно в область носика или в верхнюю губу по 0,1-0,2 мл. Наблюдают 30 дней. При наличии ВБ в патматериале с 7-10 дня после заражения у мышей наблюдают симптомы: взъерошенность шерсти, своеобразную горбатость спины, нарушение координации движений, паралич задних, затем передних конечностей и гибель. У павших мышей ГМ исследуют в РИФ на обнаружение телец Бабеша-Негри и ставят РДП. Биопробу на бешенство считают положительно, если в препаратах из мозга зараженных мышат обнаруживают тельца Бабеша-Негри или выявляют АГ методами РИФ или РДП. Отрицательный диагноз – отсутствие гибели мышат в течение 30 дней.