75.Иммуносерологические исследования. Биологические основы определения групп крови. Клиническое значение определения групп крови.
Иммунологические исследования — диагностические методы, базирующиеся на специфическом взаимодействии антигенов и антител. Широко применяются для лабораторных анализов инфекционных и паразитарных заболеваний, а также достоверного определения групп крови, нарушений гормонального фона, тканевых и опухолевых антигенов, распознавания аллергии и аутоиммунных процессов, видовой принадлежности белка, а также беременности.
ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ ВЫЯВЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИГЕНОВ
Реакции агглютинации
В этих реакциях принимают участие антигены в виде частиц (микробные клетки, эритроциты и другие корпускулярные антигены), которые склеиваются антителами и выпадают в осадок.
Для постановки реакции агглютинации (РА) необходимы три компонента: 1) антиген (агглютиноген); 2) антитело (агглютинин) и 3) электролит (изотонический раствор натрия хлорида).
Аг + АТ + электролит = агглютинат
Реакция преципитации – это формирование и осаждение комплекса растворимого молекулярного антигена с антителами в виде помутнения, называемого преципитатом. Он образуется при смешивании антигенов и антител в эквивалентных количествах. Реакцию преципитации ставят в пробирках (реакция кольцепреципитации), в гелях, питательных средах и др.
ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ ВЫЯВЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ
Постановка непрямой реакции гемагглютинации (РНГА) выявления титра специфических антител у больного. В реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) в качестве носителя используют эритроциты. Нагруженные антигеном эритроциты склеиваются в присутствии специфических антител к данному антигену и выпадают в осадок. Сенсибилизированные антигеном эритроциты используют в РПГА как эритроцитарный диагностикум для обнаружения антител (серодиагностика).
Постановка развернутой реакции агглютинации с целью выявления титра специфических антител у больного. Развернутая РА для серодиагностики ставится в сыворотке больных. Ее разводят и изотоническом растворе натрия хлорида от 1:50 - 1:100 до 1:800 или 1: 1600. Так как в более низких титрах сыворотки могут находиться нормальные агглютинины, имеющиеся у здоровых людей или больных с другим диагнозом (диагностический титр). В качестве антигена в этой реакции используют диагностикумы - заведомо известные взвеси, как правило, убитых бактерий, с которыми безопасно работать.
С-реактивный белок (СРБ) - чувствительный универсальный индикатор повреждения тканей и воспаления, отражает выраженность воспалительного процесса.
АСЛ-О (антистрептолизин-О) выявляет связь заболевания со стрептококковой инфекцией.
Ревматоидный фактор – специфический белок, увеличивающийся у больных ревматоидным артритом и другими аутоиммунными заболеваниями, отражает тяжесть, прогрессирование процесса и неблагоприятный прогноз.
ФНО-альфа (фактор некроза опухоли альфа) – ключевой цитокин (биологическое активное вещество) в развитии иммунного воспаления.
Иммуноглобулины - это особый вид белков, участвующих в местном иммунитете. Они вырабатываются под влиянием антигенов и обладают способностью специфически связываться с ними. Иммуноглобулины по своему строению и функции делятся на 4 вида:
Иммуноглобулины IgA участвуют в местном иммунитете, в большей части присутствуют на поверхности слизистых оболочек. Содержатся в молоке, слюне, в слезном, бронхиальном и желудочно-кишечном секрете, желчи, моче. Основная функция IgA – нейтрализация вирусов и защита дыхательных, мочеполовых путей, желудочно-кишечного тракта от инфекций.
Иммуноглобулины IgM – показатели острого иммунного воспаления или обострения хронического процесса.
Иммуноглобулины IgG - основные иммуноглобулины, участвующие в иммунном ответе, обеспечивают длительный гуморальный иммунитет при инфекционных заболеваниях. Дефицит IgG ослабляет сопротивляемость к инфекциям. Иммноглобулины IgG - показатели хронического иммунного воспаления.
Иммуноглобулины IgE – образуются в повышенном количестве при аллергии.
Криоглобулины - аномальные белки-иммуноглобулины, которые становятся нерастворими при температуре ниже 37°С и приводят к закупорке кровеносных сосудов, вызывая появление характерной сыпи. Криоглобулины могут присутствовать в крови человека, страдающего системной красной волчанкой, а также рядом инфекций.
Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) - это комплексы, состоящие из антигена, антител и связанных с ними компонентов комплемента. ЦИК при патологии приводят к повреждению тканей и развитию иммунного воспаления (например в почках, легких, коже, суставах, сосудах). Повышаются в крови при аутоиммунных заболеваниях.
Компоненты системы комплемента (Complement components С3, С4…С9) - в норме присутствуют в крови в виде функционально неактивных молекул белков крови и являются частью иммунитета. Активация данной системы может привести к нарушению и извращенным реакциям иммунитета, развитию воспаления, аллергическим реакциям.
Фагоцитарная активность лейкоцитов - используется для оценки резервных возможностей лейкоцитов (нейтрофилов и моноцитов) к поглощению и перевариванию чужеродных агентов.
Система AB0:
В плазме крови человека могут содержаться агглютинины α и β, в эритроцитах — агглютиногены A и B, причём из белков A и α содержится один и только один, то же самое — для белков B и β.
Таким образом, существует четыре допустимых комбинации; то, какая из них характерна для данного человека, определяет его группу крови:
α и β: первая
A и β: вторая
α и B: третья
A и B: четвёртая
Определение группы крови по системе AB0:
В клинической практике определяют группы крови с помощью моноклональных антител. При этом эритроциты испытуемого смешивают на тарелке или белой пластинке с каплей стандартных моноклональных антител (цоликлоны анти-А и цоликлоны анти-B, а при нечеткой агглютинации и при AB(IV) группе исследуемой крови добавляют для контроля каплю изотонического раствора. Соотношение эритроцитов и цоликлонов: ~0,1 цоликлонов и ~0,01 эритроцитов. Результат реакции оценивают через три минуты.
Система Rh (резус-система):
Резус-фактор - это антиген (белок), который находится на поверхности красных кровяных телец (эритроцитов). Он обнаружен в 1919 г в крови обезьян, а позже - и у людей. Резус-фактор играет важную роль в формировании так называемой гемолитической желтухи новорожденных, вызываемой вследствие резус-конфликта кровяных телец иммунизованной матери и плода. Известно, что резус-фактор - это сложная система, включающая более 40 антигенов, обозначаемых цифрами, буквами и символами. Чаще всего встречаются резус-антигены типа D (85 %), С (70 %), Е (30 %), е (80 %) - они же и обладают наиболее выраженной антигенностью. Система резус не имеет в норме одноименных агглютининов, но они могут появиться, если резус-отрицательному человеку перелить резус-положительную кровь.
Правила переливания крови:
Перед каждым переливанием крови необходимо: 1) установить группу крови донора и реципиента; 2) определить резус-принадлежность крови реципиента; 3) поставить пробу на групповую совместимость крови донора и реципиента; 4) поставить пробу на резус-совместимость крови донора и реципиента; 5) провести биологическую пробу.