III. Некотрые из рекомендуемых к освоению диагностических и лечебных манипуляций3

1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ при помощи цоликлонов «анти-А» и «aнти-B» (ознакомление с техникой определения, проводимого врачом).

На планшет или тарелку наносят по одной большой капле (0,1 мл) цоликлонов «анти-А» и "анти-В" Рядом с ними наносят по одной маленькой капле (в 10 раз меньшей капель цоликлонов) исследуемой крови. Затем капли цоликлонов вмешивают стеклянными палочками с капельками крови (если стеклянная палочка всего одна, ее перед работой с каждой каплей необходимо тщательно промыть и насухо вытереть салфеткой).

Наблюдение за ходом реакции проводят при легком покачивании планшета или тарелки в течение 3 минут. Результат в каждой капле может быть положительным или отрицательным.

Цоликлоны		Исследуемая кровь принадлежит к группе
анти - А	анти - В
		O ( I )
		А (II)
		В (III)
		АВ (IV)

ПОЛОЖИТЕЛЬНЫЙ результат выражается в агглютинации эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных (или круглых красных) агрегатов.

При ОТРИЦАТЕЛЬНОЙ реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет.

ТЕХНИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУППЫ КРОВИ

ПЕРЕКРЕСТНЫМ СПОСОБОМ

(при помощи стандартных сывороток и стандартных эритроцитов)

Оснащение:

1. Стандартные гемагглютинирующие сыворотки групп О α, β (I), А β (II), B α (III) – двух серий каждой группы, сыворотка группы АВ о (IV) и стандартные эритроциты О (I), A (II), B (III).

2. Изотонический раствор NaCl.

3. Белые фарфоровые пластинки со смачиваемой поверхностью.

4. Иглы.

5. Пипетки.

6. Стеклянные палочки.

7. Песочные часы на 5 минут.

Техника определения:

1. Определения производят на белой фарфоровой пластинке, на верхнюю часть которой наносят обозначения слева направо: О α, β (I), А β (II), B α (III). Под соответствующими обозначениями групп крови наносят по одной большой ( 0,1 мл) капле стандартных сывороток групп О (I), A (II), B (III). Так как стандартные сыворотки двух различных серий, то число наносимых капель = 6.

2. На нижнюю часть пластины наносят (также под соответствующими обозначениями) по одной маленькой (0,01 мл.) капле стандартных эритроцитов.

3. Из пробирки, содержащей кровь больного, пипеткой извлекается сыворотка и накапывается по одной большой капле (0,1 мл.) на подготовленные стандартные эритроциты.

4. Затем этой же пипеткой набираются со дна пробирки эритроциты исследуемой крови и наносятся по маленькой (0,01 мл.) капле в каждую из 6 ранее подготовленных капель стандартных сывороток. Соотношение сывороток и эритроцитов = 10:1.

5. Во всех каплях сыворотку с эритроцитами тщательно перемешивают.

6. Наблюдение за ходом реакции не менее 5 минут.

7. По мере наступления агглютинации (но не ранее чем через 3 минуты!) в те капли, в которых она наступила, добавляют по одной капле изотонического раствора NaCl.

Трактовка результата:

Производится по оценке и сопоставлению результатов, полученных при исследовании с помощью стандартных сывороток и стандартных эритроцитов.

Результаты реакций, полученных при помощи стандартных сывороток и стандартных эритроцитов должны совпадать. Эти результаты могут быть выражены в четырех комбинациях:

1. Реакция со стандартными сыворотками (два верхних ряда) – нет агглютинации эритроцитов, реакция со стандартными эритроцитами (нижний ряд) – нет агглютинации с эритроцитами O ( I ) группы, но есть агглютинация с эритроцитами А (II) и В (III) групп.

Исследуемая кровь О (I) группы.

2. Реакция со стандартными сыворотками (два верхних ряда) – положительная с сыворотками О (I) и В (III) групп, но с сывороткой А (II) группы агглютинации нет. Со стандартными эритроцитами (нижний ряд) – есть реакция агглютинации с эритроцитами группы В (III), но с эритроцитами О ( I ) и А (II) групп агглютинации нет.

Исследуемая кровь А (II) группы.

3. Определяется реакция агглютинации эритроцитов со стандартными сыворотками (два нижних ряда) О ( I ) и А (II) групп, но с сывороткой В (III) группы агглютинация отсутствует. Определяется агглютинация в капле со стандартными эритроцитами А (II) группы, но с эритроцитами О ( I ) и В (III) групп агглютинации нет.

Исследуемая кровь В (III) группы.

4. Определяется реакция агглютинации эритроцитов со стандартными сыворотками (два верхних ряда) О ( I ), А (II) и В (III) групп, а исследование с контрольной сывороткой АВ (IV) группы подтверждает специфичность реакции. Агглютинации в каплях со стандартными эритроцитами всех трех групп – нет.

Исследуемая кровь АВ (IV) группы.

ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУПП КРОВИ

ПРИ ПОМОЩИ ГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩИХ СЫВОРОТОК

Результат реакции со стандартными сыворотками группы			Исследуемая кровь принадлежит к группе
0 αβ (I)	A β (II)	B α (III)
			O ( I )
			А (II)
			В (III)
			АВ (IV)
Контроль с сывороткой группы АВ (IV)

ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУПП КРОВИ ЧЕЛОВЕКА СИСТЕМЫ АВО С ПОМОЩЬЮ СТАНДАРТНЫХ ЭРИТРОЦИТОВ

Стандартные эритроциты

Исследуемая кровь принадлежит к группе

0 (I)	A (II)	B (III)	O ( I )
			A ( II )
			B (III)
			AB (IV)

ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУППЫ КРОВИ

ПЕРЕКРЕСТНЫМ МЕТОДОМ

(при помощи цоликлонов «АНТИ-А» и «АНТИ-В»

и со стандартными эритроцитами)

№ п/п	Реакция исследуемых эритроцитов с цоли- клонами		Реакция исследуемой сыворотки со стандартными эритроцитами			Исследуемая кровь принадлежит к группе
	«анти-А»	"анти-В"	0(I)	А(II)	В(III)
1.	-	-	-	+	+	0 (I)
2.	+	-	-	-	+	А (II)
3.	-	+	-	+	-	В (III)
4.	+	+	-	-	-	АВ (IV)

Приказ Минздрава РФ № 2 от 9.09.98 г