Лабораторная работа №21 качественные реакции на жирорастворимые витамины

ПРИНЦИП РАБОТЫ:

Витамин А. Если рыбий жир содержит витамин А, то при добавлении серной кислоты, обладающей водоотнимающим свойством, возникает фиолетово-красное окрашивание, быстро переходящее в бурое.

Витамин D. Витамин D при взаимодействии с анилиновым реактивом при нагревании окрашивается в красный цвет.

Витамин Е. Спиртовой раствор витамина Е в присутствии концентрированной азотной кислоты окисляется в хиноидное соединение, окрашенное в красный цвет.

Витамин К. Витамины этой группы обладают группы выраженным антигеморрагическим действием. Обнаруживают по цветной реакции с щелочным раствором цистеина.

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) раствор рыбьего жира в обезвоженном хлороформе; 2) масляный раствор эргокальциферола - 1,25 г/л; 3) витамин Е, 0,1 % спиртовой раствор; 4) викасол, 0,1 % спиртовой раствор; 5) H₂SO₄, конц.; 6) НNO₃, конц.; 7) сахароза в порошке; 8) анилиновый реактив (15 частей анилина и 1 часть концентрированной соляной кислоты); 9) хлороформ; 10) цистеин, 0,025 %; 11) NaOH, 10 %; 12) часовое стекло или чашка Петри; пробирки; пипетки обычные и глазные; держатели; спиртовки.

ХОД РАБОТЫ:

1. Качественная реакция на витамин А. На сухое стекло наносят 5 капель раствора рыбьего жира в хлороформе и 1 каплю концентрированной серной кислоты. Образуется красно-фиолетовое окрашивание.

Результат занести в таблицу 18.

2. Качественная реакция на витамин D. В сухую пробирку вносят 2 капли масляного раствора эргокальциферола, 10 капель хлороформа и 1-2 капли анилинового реактива, осторожно нагревают при постоянном помешивании. Отмечают результат реакции.

Результат занести в таблицу 18.

3. Качественная реакция на витамин Е. В сухую пробирку вносят 6 капель 0,1 % раствора витамина Е. Затем туда добавляют несколько крупинок сахарозы и 10 капель концентрированной HNO₃ (осторожно по стенке пробирки!). Пробирки слегка встряхивают. Через 1-2 мин наблюдают развитие окрашивания.

Результат занести в таблицу 18.

4. Качественная реакция на витамин К. В сухую пробирку наливают 1мл 0,1% спиртового раствора викасола, добавляют 2 капли 0,025 % раствора цистеина и 2 капли 10 % раствора NaOH. Наблюдают за развитием окрашивания.

Результат занести в таблицу 18.

Таблица 18

Определяемый витамин	Используемые реактивы	Цветовое окрашивание
А
D
Е
К

Лабораторная работа №22 качественные реакции на витамины группы в

ПРИНЦИП РАБОТЫ:

Витамин В₁. В щелочной среде тиамин с диазореактивом образует сложное комплексное соединение оранжевого цвета.

Витамин В₂. Окисленная форма витамина В₂ представляет собой желтое флюоресцирующее в ультрафиолетовых лучах вещество. Реакция на витамин В₂ основана на его способности легко восстанавливаться; при этом раствор витамина В₂, имеющий желтую окраску, приобретает сначала розовый цвет (за счет образования промежуточных соединений), а затем обесцвечивается (восстановленная форма витамина В₂ бесцветна).

Витамин В₅ (РР). Витамин РР при нагревании с раствором ацетата меди образует плохо растворимый синий осадок медной соли никотиновой кислоты.

Витамин В₆. Витамин В₆ при взаимодействии с раствором хлорного железа образует комплексную соль типа фенолята железа красного цвета.

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) витамина В₁, 5 %; 2) витамин В₂, 0,025 % раствор (перед определением раствор можно развести в 5 раз); 3) витамин РР, 3 % раствор в 10 % растворе уксусной кислоты; 4) витамин В₆, 1 %; 5) сульфаниловая кислота, 1 %; 6) NaNО₂, 5 %; 7) Na₂CO₃, 10 %; 8) HCl, конц.; 9) металлический цинк; 10) FeCl₃, 1 %; 11) (CH₃COO)₂Cu, 5 %; 12) сухие пробирки, держатели, спиртовки; 13) флуороскоп.

ХОД РАБОТЫ:

1. Качественная реакция на витамин В₁. В пробирку к 5 каплям 1 % раствора сульфаниловой кислоты добавляют 5 капель 5 % раствора NaNО₂. К полученному диазореактиву добавляют 2 капли 5 % раствора витамина В₁ и 5-7 капель 10 % раствора Na₂СО₃ (осторожно по стенке пробирки !). На границе двух жидкостей появляется кольцо оранжевого цвета.

Результат занести в таблицу 19.

2. Качественная реакция на витамин В₂. В пробирку приливают 10 капель раствора витамина В₂, добавляют туда 5 капель концентрированной HCl. В пробирку опускают 1 горошинку металлического цинка. Начинается выделение пузырьков водорода, жидкость постепенно розовеет, затем обесцвечивается. Сравнивают обе формы витамина В₂ по флюоресценции, поместив пробирки у флуороскопа.

Результат занести в таблицу 19.

3. Качественная реакция на витамин В₅ (РР). Перед определением раствор витамина РР взбалтывают! В пробирку вносят 20 капель витамина РР. Нагревают до кипения. Взбалтывают раствор ацетата меди (!) и прибавляют 20 капель его к нагретому раствору. Содержимое пробирки доводят до кипения и охлаждают под струей холодной воды. Наблюдают выпадение осадка медной соли никотиновой кислоты.

Результат занести в таблицу 19.

4. Качественная реакция на витамин В₆. В пробирку вносят 5 капель 1 % раствора витамина В₆ и добавляют 5 капель 1 % раствора хлорного железа. Пробирки встряхивают. Наблюдают развитие окрашивания.

Результат занести в таблицу 19.

Таблица 19

Определяемый витамин	Используемые реактивы	Цветовое окрашивание
В1
В2
В5(РР)
В6