Лабораторная работа № 33 качественное определение липидов сыворотки крови

В крови содержатся триглицериды, фосфолипиды, эфиры холестерина, свободный холестерин и неэстерифицированные жирные кислоты.

Жиры, всасывающиеся слизистой оболочкой тонкого кишечника, в лимфе и в крови находятся в виде хиломикронов – мельчайших капелек, содержащих до 1 % белка. Большинство липидов содержится в комплексе с белками.

Повышенное содержание триглицеридов в сыворотке крови может свидетельствовать о снижении их превращений в тканях.

ПРИНЦИП РАБОТЫ:

Липиды можно открыть по реакции с красителями суданового ряда (например, с Суданом черным образуется розовое окрашивание).

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) судан, 1 % спиртовой раствор; 2) этанол (разбавляют водой в 2 раза непосредственно перед работой); 3) сыворотка крови; 4) растительное масло; 5) дистиллированная вода; 6) бумага для хроматографии (нарезается полосками шириной 4-5 см); 7) чашки Петри.

ХОД РАБОТЫ:

Каплю сыворотки наносят на полоску хроматографической бумаги, высушивают при температуре не выше 90 ºС. Для сравнения на 2-ую полоску бумаги наносят каплю растительного масла, на 3-ю – каплю дистиллированной воды. Полоски высушивают.

Помещают полоски бумаги в чашки Петри, заливают суданом и оставляют на 30 минут. После этого бумагу достают, дают стечь Судану. Раствором этилового спирта в чистой чашке Петри промывают бумагу. На месте нанесения сыворотки крови заметно розовое пятно окрашенных липопротеидов и хиломикронов.

Сравните с пятнами от растительного масла и воды.

РЕЗУЛЬТАТЫ и ВЫВОД:

Лабораторная работа №34 сравнение ненасыщенности жиров

ПРИНЦИП РАБОТЫ:

О ненасыщенности жиров можно судить по йодному числу (или количеству раствора йода пошедшему на титрование раствора жира).

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) свиное сало; сливочное масло; маргарин; растительное масло; 2) хлороформ; 3) 0,001 н раствор йода в хлороформе; 4) стеклянные стаканчики; 5) бюретка или мерная пипетка для титрования.

ХОД РАБОТЫ:

В четыре плоско­донных стаканчика отвесить по 0,5 г: в стаканчик №1 - свиного сала; в стаканчик №2 - сливочного масла; в стаканчик №3 - маргарина; в стаканчик №4 - 15 капель растительного масла.

Затем добавляют в каждый стаканчик по 3 мл хлороформа для растворения жира (твердые жиры следует предварительно расплавить). Тит­руют содержимое всех стаканчиков 0,001 н раствором йода в хлороформе до появления отчетливой розовой окраски. Записывают объем раствора йо­да, пошедшего на титрование каждого вида жира.

Результаты занести в таблицу 26.

Таблица 26

№	Исследуемый жир	Объем реактива пошедшего на титрование, мл	Вывод о степени ненасыщенности исследуемого жира
1.
2.
3.
4.

Лабораторная работа №35 обнаружение стеролов

ПРИНЦИП РАБОТЫ:

Обнаружение стеролов основано на образовании окрашенного соединения при добавлении формалина и уксусного ангидрида.

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) смесь концентрированной H₂SO₄ с формалином, 50:1; 2) хлороформ; 3) уксусный ангидрид; 4) растительное масло (подсолнечное, льняное, оливковое, кукурузное); 5) пробирки; 6) пипетки.

ХОД РАБОТЫ:

В сухую пробирку вносят 2 капли растительного масла, 20 ка­пель хлороформа. Добавляют 20 капель смеси серной кислоты с фор­малином и взбалтывают. Раствор разделяется на два слоя: хлоро­формный (вишневого цвета) и серной кислоты (красно-коричневого цвета с зеленой флуоресценцией). Из верхнего хлороформного слоя отбирают 5-6 капель в сухую пробирку, добавляют 1-2 капли уксус­ного ангидрида и наблюдают появление синего окрашивания, пере­ходящего в зеленое.

Результаты занести в таблицу 27.

Таблица 27

№	Растительное масло	Изменение окраски	ВЫВОД
1.
2.
3.
4.