Лабораторная работа №5 осаждение белков солями тяжелых металлов

ПРИНЦИП РАБОТЫ:

Осаждение белков солями тяжелых металлов (в отличие от высаливания) происходит при небольших концентрациях солей. Белки при взаимодействии с солями тяжелых металлов (свинца, меди, серебра, ртути и др.) адсорбируют их, образуя с ними солеобразные и комплексные соединения, растворимые в избытке этих солей (за исключением солей AgNO₃, HgCl₂), но нерастворимые в воде. Соли тяжелых металлов вызывают необратимое осаждение белков, т.е. денатурацию. Растворение осадка в избытке солей называется адсорбционной пептизацией. Данное явление происходит вследствие возникновения одноименного положительного заряда на частицах белка.

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) раствор яичного белка; 2) CuSO₄, 5 %; 3) (CH₃COO)₂Pb, 5 %; 4) AgNO₃, 3 %; 5) FeCl₃, 5 %; 6) пробирки.

ХОД РАБОТЫ:

В 4 пробирки наливают по 1-2 мл раствора белка и по каплям добавляют растворы солей: в 1-ую – уксуснокислого свинца; во 2-ую - сернокислой меди; в 3-ю – хлорного железа; в 4-ую – азотнокислого серебра (до выпадения осадков).

Затем прибавляют избыток указанных солей.

РЕЗУЛЬТАТЫ и ВЫВОД:

Лабораторная работа №6 осаждение белков концентрированными минеральными кислотами

ПРИНЦИП РАБОТЫ:

Концентрированные минеральные кислоты вызывают резкую дегидратацию белковых частиц и нейтрализацию их заряда, при этом происходит образование комплексных соединений. В результате происходит денатурация белка. Ортофосфорная кислота осадка не дает. В избытке всех минеральных кислот, за исключением азотной, выпавший в осадок белок растворяется.

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) раствор яичного белка; 2) HNO₃, конц.; 3) H₂SO₄, конц.; 4) HCl, конц.; 5) пробирки.

ХОД РАБОТЫ:

В 3 пробирки наливают по 1 мл кислот: в 1-ую – серной; во 2-ую – азотной; в 3-ю – соляной. Пробирки наклоняют под углом 45 º и осторожно (из пипетки) наслаивают по стенке раствор белка (пробирку следует держать отверстием от себя!). На границе белка и кислоты появляется белое кольцо.

Пробирки осторожно встряхивают и добавляют в них избыток соответствующих кислот.

РЕЗУЛЬТАТЫ и ВЫВОД:

Лабораторная работа №7 осаждение белков органическими веществами

ПРИНЦИП РАБОТЫ:

Органические кислоты вызывают необратимое осаждение белков, чаще используют растворы трихлоруксусной и сульфосалициловой кислот. Сульфосалициловая кислота кроме белков осаждает также продукты их распада - высокомолекулярные пептоны и полипептиды. Трихлоруксусная кислота способна осаждать только белки и не осаждает продукты распада белков.

В органических растворителях (спирт, ацетон и др.) белки не растворяются и выпадают в осадок. В зависимости от природы белка для его осаждения требуются различные концентрации спирта. Спирт связывает воду, вызывая дегидратацию мицелл белка и неустойчивость их в растворе. При осаждении спиртом раствор белка должен быть нейтральным или слабокислым, но не щелочным. Реакция облегчается присутствием электролита хлористого натрия вследствие снятия заряда с частиц белка. Реакция осаждения белка спиртом или кратковременным действием спирта обратима при охлаждении. Если осадок быстро отделить от спирта, то белок может сохранить нативное состояние.

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) сульфосалициловая кислота, 20 %; 2) трихлоруксусная кислота, 10 %; 3) этиловый спирт; 4) раствор яичного белка; 5) пробирки.

ХОД РАБОТЫ:

В 3 пробирки отбирают по 5 капель раствора яичного белка.

В 1-ую пробирку добавляют 2 капли раствора сульфосалициловой кислоты. Во 2-ую – 2 капли трихлоруксусной кислоты. В 3-ю приливают 15-20 капель этилового спирта (раствор мутнеет), затем добавить 1 каплю насыщенного раствора хлористого натрия.

РЕЗУЛЬТАТ и ВЫВОД: