Коноплева 2013
.pdfот йода крахмальные зерна окрашиваются в синий цвет. В воде определяют их форму, строение. Также для идентификации зерен крахмала проводят испытание в поляризованном свете (между перекрестными призмами Николя) — на зернах обнаруживается черный крестик.
Жирное и эфирное масло. Для обнаружения жирного и эфирного масла готовят препарат в растворе Судана /// и подогревают; капли жирного или эфирного масла окрашиваются в оранжево-розовый цвет.
Слизь. Для обнаружения слизи готовят препарат порошка в растворе черной туши и тотчас рассматривают под микроскопом (малое увеличение); слизь заметна в виде бесцветных масс на черном фоне. Либо помещают 2 капли раствора рутения красного на предметное стекло, небольшое количество порошка суспендируют в жидкости и накрывают покровным стеклом. Через 1 мин дают впитаться капле воды дистиллированной между предметным и покровным стеклами; слизь окрашивается в фиолетово-красный цвет.
Одревесневшие (лигнифицированные) элементы. Небольшое количество порошка помещают на предметное стекло, прибавляют 1-2 капли 10% (об/об) спиртового раствора флороглюцина, перемешивают и выдерживают до почти полного испарения растворителя, прибавляют 1-2 капли кислоты хлористоводородной, накрывают препарат покровным стеклом и немедленно, просматривают под микроскопом; красное окрашивание указывает на присутствие лигнина.
Для окраски одревесневших элементов можно использовать также раствор 10 г/л сафранина. Срезы помещают в раствор 10 г/л сафранина в спирте (50% об/об) на 30 мин (в закрытом бюксе или на часовом стекле), промывают сначала спиртом (50% об/об), затем подкисленным спиртом (на 100 мл 96 % спирта прибавляют 2 капли хлористоводородной кислоты) и заключают на предметном стекле в глицерин; одревесневшие оболочки окрашиваются в красный цвет.
Дубильные вещества. Наличие дубильных веществ устанавливают, нанося 1 каплю раствора 10 г/л железа (III) аммония сульфата или раствора 30 г/л железа (III) хлорида на внутреннюю поверхность сухой коры; появляется черно-синее или черно-зеленое окрашивание.
Производные антрацена. Наличие производных антрацена определяют, нанося 1-2 капли раствора 50 г/л натрия гидрооксида на внутреннюю поверхность коры (красное окрашивание) или проводя микросублимацию описанным ниже способом. На предметное стекло ставят трубку диаметром 1,5 см и высотой 2 см. Внутрь стеклянной трубки помещают небольшое количество порошка (или соскоба) испытуемого образца, сверху накрывают другим предметным стеклом, ставят на асбестовую сетку, закрепленную в штативе, и подогревают. Пламя горелки следует держать от предметного стекла на расстоянии 5 - 7 см. На поверхность стекла, которое служит для улавливания суб-
293
лимата, помещают кусочки фильтровальной бумаги и смачивают время от времени холодной водой. Через некоторое время на нижней стороне стекла появляется налет. Под микроскопом в сублимате видны тонкие желтые иголочки, которые в ультрафиолетовом свете (люминесцентный микроскоп) имеют яркое желтое или оранжево-красное свечение. В растворе 50 г/л калия гидроксида в 96 % спирте сублимат растворяется с появлением красного окрашивания
ЛЮМИНЕСЦЕНТНАЯ МИКРОСКОПИЯ
Метод люминесцентной микроскопии применяется (где это целесообразно) для определения подлинности лекарственного растительного сырья. Преимуществом метода является возможность его применения для изучения сухого растительного материала, из которого готовят толстые срезы или препараты порошка, и рассматривают их в падающем свете при освещении препарата сверху через опакиллюминатор или объектив.
Люминесцентная микроскопия выполняется с помощью люминесцентных микроскопов, снабженных специальными люминесцентными осветителями.
Приготовление микропрепаратов. Для приготовления микропрепаратов используют сухое лекарственное растительное сырье или его порошок. Предварительное размачивание сырья исключается, так как это приводит к вымыванию веществ из клеток; допускается лишь непродолжительное размягчение во влажной камере.
Люминисцентная микроскопия листьев. Готовят обычно препараты из порошка листьев, которые рассматривают без включающей жидкости. Наиболее яркая люминесценция характерна для одревесневших элементов - сосудов жилки, механических волокон, а также кутикулы и кутинизированных оболочек различных эпидермальных образований (волосков, железок и др.). В эпидермальных клетках часто содержатся флавоноиды, обусловливающие коричневую, желтую или зеленовато-желтую люминесценцию. Клетки мезофилла содержат различные включения - желтые, голубые, зеленовато-желтые, коричневые - в зависимости от их химического состава. Хлорофилл в высушенном растительном материале не люминесцирует. Кристаллы оксалата кальция также не обладают люминесценцией. При необходимости приготовления среза лист предварительно размягчают во влажной камере и с помощью бритвы делают толстый срез (2-3 мм), который закрепляют на предметном стекле пластилином. Более тонкие срезы помещают во включающую жидкость и накрывают покровным стеклом.
294
В качестве включающей жидкости используют воду, глицерин,
раствор 50 г/л поливинилового спирта, нефлуоресцирующее вазелиновое масло. Включающая жидкость не должна растворять содержащиеся в препарате люминесцирующие вещества.
Люминесцентная микроскопия трав, цветков, плодов, семян, кор, корней, корневищ, луковиц, клубней, клубнелуковиц изложена в ГФ РБ II, Т.1.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА ЛРС
ПРАВИЛА ПРИЁМКИ ЛРС И МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ
Приемку ЛРС и отбор проб проводят согласно ГФ РБ II, Т.1 (2.8.20).
ЛРС поступает партиями (сериями).
ПАРТИЯ (СЕРИЯ) ЛРС — количество продукции одного наименования, полученное в одном технологическом цикле или в течение определенного интервала времени, в одних и тех же условиях и одновременно представленное на контроль. Качество партии (серии) должно быть удостоверено одним документом.
Партия ЛРС состоит из единиц продукции.
Единицы продукции – упаковка, представляющая собой один из видов транспортной тары, указанной в частных фармакопейных статьях. Это могут быть кипы, мешки, ящики и другие упаковки. Каждую единицу продукции подвергают внешнему осмотру для установления соответствия упаковки и маркировки требованиям НД. Обращают внимание на правильность упаковки, состояние тары (отсутствие подтеков, подмочки и других повреждений, отрицательно влияющих на качество и сохранность сырья).
Для проверки соответствия качества сырья требованиям НД отбирают выборку из неповрежденных единиц продукции, взятых случайным образом из разных мест партии (серии) в количестве, указанном в табл. 22.
Проверку качества сырья в поврежденных единицах продукции
производят отдельно от неповрежденных, вскрывая каждую единицу продукции.
Выборка – количество штучной продукции, отобранной из контролируемой партии (серии).
Объем выборки – число выборочных единиц в выборке.
295
Таблица 22
Объём выборки
Количество контейнеров в пар- |
Количество отбираемых контейне- |
тии лекарственного раститель- |
ров |
ного сырья |
|
1—5 |
Все контейнеры |
6—50 |
5 |
>50 |
10% контейнеров от серии (партии)* |
* при получении дробного числа, округляют до следующего целого числа.
Попавшие в выборку единицы продукции вскрывают и путем внешнего осмотра определяют: однородность сырья по способу подготовки (цельное, измельченное, прессованное и т.д.), цвету, запаху, засоренности; наличие примесей (плесени, гнили, устойчивого постороннего запаха, не исчезающего при проветривании; засоренность ядовитыми растениями и такими примесями, как камни, стекло, помет грызунов и птиц и т. п.). Одновременно невооруженным глазом и с помощью лупы (5—10х) определяют наличие амбарных вредителей.
При обнаружении в сырье недопустимых примесей:
•признаков гниения, плесени, устойчивого постороннего запаха, не исчезающего при проветривании;
•засоренности ядовитыми растениями и такими примесями, как стекло, помет грызунов и птиц и т.п.
партия сырья не подлежит приемке.
ОТБОР ПРОБ ЛРС «АНГРО»
Из каждой единицы продукции, отобранной для вскрытия, берут, избегая измельчения, 3 точечные пробы: сверху, снизу и из середины (схема 21).
Точечная проба - количество продукции, взятое за один раз из одного места серии (партии) одномоментно. Точечные пробы должны быть примерно одинаковыми по массе.
Из мешков, тюков и кип точечные пробы отбирают на глубине не менее 10 см сверху, затем, после распарывания по шву, из середины и снизу. Распоротые по шву мешки, тюки, кипы после взятия проб зашивают.
Точечные пробы семян и сухих плодов отбирают зерновым щупом. Из сырья, упакованного в ящик, первую точечную пробу отбирают из верхнего слоя, вторую – после удаления сырья примерно до половины ящика и третью – со дна ящика.
296
Из всех точечных проб, осторожно перемешивая, составляют объединенную пробу.
Объединенная проба - проба продукции, состоящая из нескольких точечных проб, отобранных из контролируемой партии.
Масса пробы, отбираемой из каждого контейнера, должна быть такой, чтобы масса объединенной пробы была достаточна для проведения всех испытаний; в противном случае отбор точечных проб повторяют.
Масса объединенной пробы не регламентируется и зависит от величины партии, особенностей сырья, величины точечных проб и т.д.
Все пробы, необходимые для проведения различных испытаний, выделяют методом квартования.
Cуть метода квартования: ЛРС разравнивают на гладкой, чистой, ровной поверхности в виде квадрата равномерным по толщине слоем и по диагонали делят на четыре треугольника. Два противоположных треугольника удаляют, а два оставшихся соединяют вместе и перемешивают. Эту процедуру повторяют до тех пор, пока не останется количество сырья в двух противоположных треугольни-
ках, соответствующее массе заданных проб.
Допустимые отклонения в массе каждой из проб не должны превышать ± 10%.
Из объединенной пробы методом квартования выделяют:
•при обнаружении присутствия амбарных вредителей и при необходимости определения степени зараженности амбарными вредителями отбирают аналитическую пробу массой 500 г для мелких видов сырья и массой 1000 г для крупных видов сырья;
•аналитическую пробу для определения микробиологической чистоты (60 г);
•аналитическую пробу для определения радионуклидов (размер пробы определяют в зависимости от используемого метода определения радионуклидов);
•среднюю пробу — в соответствии с таблицей 23 для проведения остальных видов анализа.
Таблица 23
Масса средних проб
Тип лекарственного растительно- |
Минимальный вес средней пробы |
|||
го сырья |
|
|
|
|
Корни, |
корневища, кора, |
травы |
|
500 г |
(цельное и измельченное сырье) |
|
|||
|
|
|||
Листья, |
цветки, семена, |
плоды |
|
250 г |
(цельное и измельченное сырье) |
|
|||
|
|
|||
|
|
297 |
|
|
• Из средней пробы методом квартования отбирают аналитическую пробу для определения подлинности, измельченности и
содержания примесей.
Оставшуюся после макроскопического анализа (2.8.23), определения степени измельчения (2.9.12) и содержания примесей (2.8.2) часть средней пробы измельчают ножницами или секатором до размеров частиц около 1 см, если в частной статье нет других указаний, перемешивают и выделяют методом квартования аналитические пробы:
•для определения влажности (эту пробу немедленно упаковывают герметически);
•золы и действующих веществ;
•пестицидов и токсических элементов.
Если при выделении аналитических проб в двух противоположных треугольниках масса сырья окажется меньше или больше указанной в таблице 23, следует из оставшихся двух треугольников отделить сырьё по всей толщине слоя или таким же образом удалить его из отобранных треугольников.
Отбор проб для нефасованной продукции (ангро или bulk product) должен осуществляться в стерильные контейнеры. Упаковка должна обеспечивать пригодность пробы для проведения испытаний.
Пробы, прошедшие отбор, должны соответствующим образом идентифицироваться с использованием единой маркировки и оформляться актом отбора или другим документом, включающим дату, время и место отбора, условия окружающей среды при отборе, фамилию, имя и отчество лица, проводившего отбор, и другую необходимую информацию.
Если поставка сырья или готовой продукции состоит из нескольких серий (партий), то каждую серию (партию) необходимо рассматривать как отдельную в отношении отбора проб и проведения испытаний.
Во избежание ошибок при отборе проб не допускается отбор проб одновременно от двух и более наименований, двух и более серий (партий) сырья или готовой продукции.
298
Схема 21
ПРАВИЛА ОТБОРА ПРОБ ПРИ ПРИЕМКЕ ЛРС
299
ОТБОР ПРОБ ФАСОВАННОЙ ПРОДУКЦИИ
Лекарственное растительное сырье и сборы расфасовываются в пачки, пакеты фильтр-пакеты (в цельном, резаном, дробленом, порошкованном виде), а также выпускаются в форме брикетов (в резанопрессованном виде).
Единицы продукции в выборку необходимо отбирать из разных мест контролируемой серии (партии).
Объем выборки зависит от размера серии (партии).
Перед отбором проб необходимо произвести внешний осмотр упаковочной тары (ящики, короба, барабаны, бутыли и т. д.), определить ее количество, целостность, наличие пломб, правильность маркировки и оформление сопроводительной документации, а также соответствие тары и упаковки требованиям спецификации.
Отбор проб следует производить только из неповрежденных укупоренных и упакованных согласно нормативной документации упаковочных единиц.
Количество упаковочных единиц, отобранных для отбора, рассчитывают по формуле:
0,4√n,
где: n — общее количество упаковочных единиц одной серии (партии).
Количество вскрытых упаковочных единиц должно быть не менее 3 и не более 30.
В случае недостаточного количества потребительских упаковок для проведения испытания, их повторно отбирают, как указано выше.
Отобранные потребительские упаковки составляют объединен-
ную пробу.
Из объединенной пробы выделяются пробы:
•в соответствии с таблицей 23 (но не менее 10 невскрытых пачек или пакетов; 10 невскрытых контурных ячейковых упаковок, брикетов; 20 невскрытых фильтр-пакетов для определения допустимых отклонений на промышленное фасование);
•для определения микробиологической чистоты — 3 невскрытых потребительских упаковок общей массой не менее 50 г;
•для определения радионуклидов — в соответствии с используемым методом определения радионуклидов.
АНАЛИЗ ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ
Отобранные аналитические пробы сырья и поступившие в контрольно-аналитическую лабораторию УП «Фармация», подвергаются анализу согласно действующей НД.
300
ТОВАРОВЕДЧЕСКИЙ АНАЛИЗ
Он включает определение подлинности, измельченности, содержания примесей и степени зараженности амбарными вредителями.
Подлинность (идентификация) устанавливается макро-, микроскопическим, хроматографическим анализами
Чистота сырья устанавливается путем определения в нем содержания измельченных частей и примесей.
При упаковке и перевозке сухого сырья часть его неизбежно измельчается, ломается. Слишком сильная степень измельчения не только портит внешний вид сырья, но сказывается и на его качестве, поскольку измельченные частицы смешиваются с песком и пылью и затрудняют очистку сырья.
СИТОВОЙ АНАЛИЗ
Методика определения степени измельчения лекарственного растительного сырья
Если нет других указаний в частной статье, лекарственное растительное сырье в количестве 25 - 100 г помещают на соответствующее сито, снабженное плотно пригнанным приемным лотком и крышкой и просеивают, не допуская дополнительного измельчения. Частицы сырья, прошедшие сквозь сито, взвешивают и вычисляют их процентное содержание по отношению к массе аналитической пробы. Если проба сырья не помещается на сите, ее просеивают частями.
Просеивание измельченных частиц считается законченным, если количество сырья, прошедшего сквозь сито при дополнительном просеве в течение 1 мин, составляет менее 1 % от оставшегося на сите.
Степень измельчения порошков в случае определения ее с помощью просеивания выражают, учитывая номер использованного сита, либо с применением нижеприведенных терминов, либо, если такие термины не могут быть использованы, степень измельчения выражают в процентах вещества (м/м), проходящего через сито определенного размера.
При описании порошков используют следующую терминоло-
гию:
Грубый порошок. Не менее 95 % массы порошка проходит через сито (1400) и не более 40 % массы порошка проходит через сито (355).
Среднемелкий порошок. Не менее 95 % массы порошка проходит через сито (355) и не более 40 % массы порошка проходит через сито (180).
301
Мелкий порошок. Не менее 95 % массы порошка проходит через сито (180) и не более 40 % массы порошка проходит через сито (125).
Очень мелкий порошок. Не менее 95 % массы порошка проходит через сито (125) и не более 40 % массы порошка проходит через сито (90).
Если указано сито одного номера, не менее 97 % массы порошка должно проходить через указанное сито, если нет других указаний в частной статье.
В случае измельченного лекарственного растительного сырья должны выдерживаться требования к степени измельчения, указанные в ГФ РБ II в статье «Лекарственное растительное сырье цельное или измельченное фасованное», если нет других указаний в частной статье.
Для определения степени измельчения порошка собирают сита с разными номерами, порошок полностью просеивают и взвешивают каждую фракцию.
Методика определения степени измельчения порошков
Если нет других указаний в частной статье, грубые, среднемелкие порошки в количестве 25 – 400 г помещают на соответствующее сито, встряхивают в течение 10 мин, периодически постукивая по ситу.
Для мелких и очень мелких порошков навеска образца не должна превышать 25 г, сито встряхивают в течение 20 мин.
Если порошки закупоривают отверстия во время просеивания, допускается осторожная прочистка нижней поверхности сита. Навеску порошка, время и условия просеивания указывают в частной статье.
Определение содержания примесей
Примесью считают посторонние объекты, попавшие естественно и неизбежно в сырье при заготовке. Поэтому НД допускают определенный процент примесей для каждого сырья.
Слишком высокий их процент указывает на неаккуратность сбора, сушки, хранения и понижает качество сырья.
Допустимыми примесями в лекарственном растительном сырье являются примеси, включающие в себя:
302