Коноплева 2013

1) несырьевые части растения: части данного лекарственного растения, не являющиеся лекарственным растительным сырьем; сырьевые части растения, утратившие окраску, присущую данному виду (побуревшие, почерневшие, пригоревшие и т.д.);

2) посторонние примеси: примеси, не относящиеся к данному лекарственному растению, и имеющие растительное (органические примеси — неядовитые части других растений, солома, сено и т. п.) или минеральное (минеральные примеси — земля, песок, камешки) происхождение.

Лекарственные средства на основе лекарственного растительного сырья (лекарственное растительное сырье цельное или измельченное фасованное, сборы, растительные чаи) не должны обладать устойчивым посторонним запахом, содержать такие примеси, как стекло, пометгрызуновиптиц, ядовитые растения и т. п.; кроме этого, не должны обнаруживать признаки гниения, плесени, амбарных вредителей и других примесей животного происхождения.

Методика определения содержания примесей

От 100 г до 500 г испытуемого образца лекарственного растительного сырья или минимальное количество, указанное в частной статье, рассыпают тонким слоем. Осматривают невооруженным глазом или с помощью лупы (6х). Каждую группу примесей отделяют, взвешивают и рассчитывают их процентное содержание по формуле:

m1 - масса примеси, г,

m2 - масса аналитической пробы, г.

Полученные результаты сравнивают с данными НД.

Определение степени зараженности ЛРС амбарными вредителями

Лекарственное растительное сырье не должно иметь признаков гниения. Оно должно быть по возможности тщательно очищено от примесей, таких как остатки почвы, пыли, грязи, загрязнений наподобие грибов, амбарных вредителей и других примесей животного происхождения.

Проверку на наличие живых и мертвых вредителей осуществляют при приемке и периодически при хранении путем осмотра невооруженным глазом и с помощью лупы (5—10х) при внешнем осмотре, а также при определении степени измельчения и содержания примесей. При этом обращают внимание на наличие частей сырья, поврежденных амбарными вредителями. Кроме сырья, тщательно просмат-

303

ривают швы, складки упаковочного материала, щели в ящиках.

При обнаружении в сырье амбарных вредителей определяют степень его зараженности. Для этого соответствующую аналитическую пробу сырья (2.8.20) просеивают сквозь сито (500). В сырье, прошедшем сквозь сито, проверяют с использованием лупы наличие клещей; в сырье, оставшемся на сите, проверяют невооруженным глазом и с использованием лупы наличие моли, точильщика и их личинок и других живых и мертвых вредителей. Количество найденных вредителей и их личинок пересчитывают на 1000 г растительного сырья и устанавливают степень его зараженности.

При наличии в 1 кг сырья не более 20 клещей (клещ мучной

(Tyroglyphus farinae L.), клещ волосатый (Glyciphagus destructor Schrank.), клещ хищный (Cheyletus lactis L), сухофруктовый клещ

(Carpoglyphus lactis L.) и др.) зараженность сырья относят к I степени; при наличии более 20 клещей, свободно передвигающихся по поверхности сырья и не образующих сплошных масс, — ко II степени; если клещей много, они образуют сплошные войлочные массы, движение их затруднено — к III степени.

При наличии в 1 кг сырья амбарной моли (Tinea granella L) и ее личинок, а также хлебного точильщика (Sidotrepa panicea L) и других вредителей в количестве не более 5 зараженность относят к I степени, при наличии 6-10 вредителей — ко II степени, более 10 вредителей— к III степени.

При I степени зараженности сырье после надлежащей деконтаминации может быть допущено к производству лекарственных средств. При II степени и в исключительных случаях при III степени зараженности сырье, после надлежащей деконтаминации, может быть использовано для переработки с целью получения индивидуальных веществ.

После проведения деконтаминации, необходимо убедиться, что части растения не пострадали, и что после обработки в сырье не осталось вредных примесей. Для деконтаминации лекарственного растительного сырья запрещается использование этиленоксида.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧИСЛОВЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ

Определение потери в массе при высушивании ЛРС

Воздушно-сухое сырье содержит обычно 10 – 14 % гигроскопической влаги. Повышенное содержание влаги в сырье приводит к его порче: изменяется окраска сырья, появляется затхлый запах, плесень, разрушаются действующие вещества. Такое сырье нельзя использо-

304

вать. Поэтому НД для каждого вида сырья устанавливает норму содержания влаги (влажность) не выше определенного значения.

Под влажностью сырья понимают потерю в массе при высушивании за счет гигроскопической влаги и летучих веществ.

Известны различные способы определения влажности (ГФ РБ II, Т.1 (2.2.32)). Для определения потери в массе при высушивании в ЛРС принят метод высушивания до постоянной массы при температуре

100-105 С или в течение времени при температурном интервале, указанном в частной ФС.

Если температурный интервал не указан, то высушивание проводят при указанной температуре ±2° С.

Масса, степень измельчения сырья указываются в частных фармакопейных статьях.

Указанное в частной статье количество испытуемого образца помещают во взвешенный бюкс, предварительно высушенный в условиях, описанных для испытуемого вещества и ставят в нагретый до 100-105 ° С сушильный шкаф. Время высушивания отсчитывают с того момента, когда температура в сушильном шкафу достигнет 100-105 °С.

Первое взвешивание листьев, трав и цветков проводят через 2 ч; корней, корневищ, коры, плодов, семян и др. видов сырья через 3 ч.

Постоянная масса считается достигнутой, если разница между двумя последними взвешиваниями после 30 мин высушивания и 30 мин охлаждения в эксикаторе не превышает 0,01 г.

Потерю в массе при высушивании сырья в процентах (Х) вычисляют по формуле:

m - масса сырья до высушивания, г; m1- масса сырья после высушивания, г.

За окончательный результат определения принимают среднее арифметическое двух параллельных определений, вычисленных до десятых долей процента, допускаемое расхождение между которыми не должно превышать 0,5%.

Так определяют влажность, которая отражена для каждого вида сырья в НД в разделе числовые показатели.

В случае определения влажности для пересчета количества действующих веществ и золы на абсолютно сухое сырье берется

точная навеска (1-2 г с точностью ± 0,001г) из аналитической пробы, предназначенной для определения содержания золы и действующих веществ. Определение проводят таким же методом, но при разнице между последними взвешиваниями не превышающей 1мг.

305

Определение содержания золы общей и нерастворимой в хлористоводородной кислоте

Лекарственное растительное сырье содержит не только органические, но и минеральные вещества. Кроме того, сырье, особенно подземные части растений, бывает загрязнено посторонними минеральными примесями: кусочками земли, камешками, песком, пылью на густоопушенных листьях и др. Нормирование их уровня в сырье является условием получения качественного сырья. С этой целью почти для всех видов сырья определяется содержание общей золы, а для сырья, используемого для приготовления настоев и отваров, - содержание золы, нерастворимой в хлористоводородной кислоте.

Общая зола – это остаток несгораемых неорганических веществ, оставшийся после сжигания и прокаливания сырья. Этот остаток состоит из минеральных веществ, свойственных сырью, и посторонних минеральных примесей (земля, песок, камешки, пыль).

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте, состоит в основном из оксида кремния и характеризует загрязненность сырья посторонними минеральными примесями.

Для определения общей золы кварцевый или платиновый тигель нагревают при красном калении (около 500 °С) в течение 30 мин, выдерживают до остывания в эксикаторе и взвешивают. Если нет других указаний в частной статье, 1,00 г испытуемого образца или измельченного в порошок лекарственного растительного сырья помещают в тигель и равномерно распределяют по дну тигля. Высушивают при температуре от 100° С до 105°С в течение 1 ч и затем сжигают до постоянной массы в муфельной печи при температуре (600±25)°С, выдерживая тигель до остывания в эксикаторе после каждого сжигания. Во время проведения анализа в тигле не должно появляться пламя.

Если после длительного сжигания зола все еще содержит темные частицы, содержимое тигля количественно переносят горячей водой на беззольный фильтр и сжигают остаток на фильтре вместе с фильтровальной бумагой. Фильтрат объединяют с золой, осторожно выпаривают до сухого остатка и сжигают до постоянной массы.

Проводят 2 параллельных определения.

Содержание общей золы в процентах (Х) в абсолютно сухом сырье определяют по формуле:

m1 - масса золы, г; m - масса сырья, г;

306

W - потеря в массе при высушивании сырья, %.

Определение золы, нерастворимой в хлористоводородной кислоте

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте, — это остаток, полученный посте обработки сульфатной или общей золы хлористоводородной кислотой и рассчитанный на 100 г испытуемого образца.

В тигель, содержащий остаток после определения общей или сульфатной золь прибавляют 15 мл воды и 10 мл кислоты хлористоводородной d=1,18 (35% - 38%), раствор покрывают часовым стеклом, аккуратно кипятят в течение 10 мин и охлаждают. Фильтруют через обеззоленный фильтр, промывают фильтр горячей водой до тех пор, пока фильтрат не станет нейтральным. Затем фильтр сушат и сжигают при температуре слабого красного каления, после чего охлаждают в эксикаторе и взвешивают.

Процесс сжигания необходимо повторять до тех пор, пока разница между двумя последовательными взвешиваниями будет не более 1 мг.

Содержание золы, нерастворимой в хлористоводородной кислоте, определяют в процентах на массу абсолютно сухого ЛРС по формуле:

m1 - масса золы, г;

m2 - масса золы фильтра (если зола последнего более 0,002 г); m - масса сырья, г;

W - потеря в массе при высушивании сырья, %

Определение содержания экстрактивных веществ

Определение содержания экстрактивных веществ проводят в том случае, если это предусмотрено НД.

Под экстрактивными веществами понимают массу сухого остатка, полученного после упаривания вытяжки из ЛРС, экстрагированной растворителем, указанным в НД на ЛРС.

Показатель содержания экстрактивных веществ вводится в НД в тех случаях, когда действует комплекс биологически активных веществ, или не разработан метод количественного определения действующих веществ, или неизвестна группа действующих веществ.

307

Методика определения содержания экстрактивных веществ

1.Берут точную навеску (1 г) измельченного и просеянного сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм, помещают в коническую колбу вместимостью 200-250 мл, заливают 50 мл растворителя, указанного в НД на лекарственное сырье, колбу закрывают пробкой, взвешивают (с точностью ± 0,01 г).

2.Содержимое колбы оставляют на 1 час (экстракция проходит при комнатной температуре). Затем колбу соединяют с обратным холодильником, нагревают, поддерживая слабое кипение, в течение 2 часов (экстракция проходит при нагревании).

3.После охлаждения колбу с содержимым вновь закрывают той же пробкой, взвешивают и потерю в массе восполняют растворителем. Содержимое колбы тщательно взбалтывают и фильтруют через сухой бумажный фильтр в сухую колбу вместимостью 150-200 мл.

4.25 мл фильтрата пипеткой переносят в предварительно высушенную при температуре 100-105º С до постоянной массы и точно взвешенную фарфоровую чашку диаметром 7-9 см и выпаривают на водяной бане досуха.

5.Чашку с остатком сушат при температуре 100-105° С до постоянной массы, после чего охлаждают в течение 30 мин в эксикаторе, на дне которого находится хлорид кальция безводный, и немедленно взвешивают.

Проводят два параллельных определения.

Содержимое экстрактивных веществ в процентах (Х) в пересчете на абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле:

m - масса сухого остатка, г; m1 - масса сырья, г;

W - потеря в массе при высушивании сырья, %.

Содержание экстрактивных веществ, как и действующих веществ, должно быть не менее указанной в НД нормы.

При установлении в результате испытаний несоответствия качества сырья требованиям НД проводят его повторную проверку. Для повторного анализа от невскрытых единиц продукции отбирают выборку и повторяют весь анализ, начиная с отбора проб. Резуль-

308

таты повторного анализа являются окончательными и распространяются на всю партию.

Результаты анализа оформляются протоколом испытаний, форма которого утверждена «Руководством по качеству» для аккредитованных лабораторий УП «Фармация» и «Центра экспертиз и испытаний в здравоохранении». Он выписывается в двух экземплярах. Первый передается на склад и служит основанием для отпуска сырья в аптечные учреждения, второй остается в лаборатории.

ОСНОВНЫЕ МЕТОДЫ ФИТОХИМИЧЕСКОГО АНАЛИЗА ЛРС

Большинство современных НД на лекарственное растительное сырье в качестве одного из важнейших числовых показателей включает нормирование содержания основных биологически активных веществ. Их определение проводится с использованием химических и физико-химических методов.

Для извлечения органических соединений из природных объектов чаще всего используют экстракцию растворителями или перегонку с водяным паром. В обоих случаях получают смесь компонентов, которую затем очищают от примесей, делят на отдельные фракции или индивидуальные вещества с помощью ряда операций: последовательной обработки смеси различными растворителями, распределения веществ между двумя несмешивающимися растворителями, методов хроматографии,

Хроматографический метод — один из важных и распространенных методов фитохимического анализа. Он эффективен и удобен для разделения многокомпонентных смесей, очистки и идентификации соединений. По механизму разделения различают три основных вида хроматографии: адсорбционную, распределительную и ионообменную. В основе их лежат неодинаковая степень адсорбируемости молекул (ионов) на твердом веществе (адсорбционная или ионообменная хроматография) или различное распределение их между двумя несмешивающимися жидкими фазами, одна из которых связана с твердым носителем (распределительная хроматография). В зависимости от целей и задач анализа применяют различные сорбенты и виды хроматографии: колоночную, бумажную и тонкослойную. Бумажная и тонкослойная хроматография позволяет работать с микроколичествами органических веществ и не требует дорогостоящей аппаратуры.

Более надежными и эффективными методами, получившими распространение в аналитических и научно-исследовательских лабораториях, считаются газожидкостная (ГЖХ) и высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ). В основе ГЖХ лежат законы

309

распределения вещества между двумя фазами, одна из которых подвижна. В данном случае в качестве подвижной фазы используют инертный газ (гелий, аргон, азот), а неподвижной фазой является жидкость, нанесенная на инертное твердое тело (сорбент). Сорбент помещают в хроматографическую колонку U-образной или спиралевидной формы. Автоматическое устройство фиксирует разделяемые вещества на выходе из колонки по их физическим и химическим свойствам, а самописец регистрирует качественный и количественный состав смеси. Метод ГЖХ позволяет анализировать смеси летучих веществ или их производных.

В последние годы успешно развивается ВЭЖХ. Она является вариантом колоночной хроматографии, но подвижная фаза — элюэнт

— проходит через колонку с большой скоростью за счет высокого давления. Этот вид хроматографии является удобным методом для разделения, препаративного выделения и проведения качественного и количественного анализа нелетучих термолабильных соединений.

При качественном анализе используют общие и специфические реактивы на группы действующих веществ или отдельные компоненты. Наиболее удобный способ их обнаружения — бумажная и тонкослойная хроматография. На хроматограммах действующие вещества проявляются после просматривания в УФ-свете (флавоноиды, кумарины) или после обработки специфическими реактивами (алкалоиды, сапонины, аминокислоты). Имеются возможности для идентификации доминирующих компонентов по характерной флюоресценции или окраске с реактивами, значению Rf и путем сравнения со стандартными образцами.

Для проведения количественного анализа используют методы, основанные на химических и физических свойствах исследуемых соединений. Основными требованиями, предъявляемыми к методам анализа, являются точность и чувствительность. Особое значение приобретают экспрессные методы анализа, позволяющие оперативно контролировать образцы растительного сырья по мере поступления его от заготовителя к потребителю, К традиционным методам количественного анализа относятся гравиметрические и титрометрические методы. Все большее место занимают оптические методы, реже используются электрохимические методы анализа.

Гравиметрический (весовой) анализ основан на выделении суммы веществ путем их осаждения из различных растворителей или за счет получения нерастворимых комплексных соединений и последующего установления массы взвешиванием осадка на аналитических весах. Точность метода определяется чувствительностью весов, которая обычно составляет ±0,0001 г.

Титрометрические (объемные) методы весьма разнообразны

310

и зависят от химических свойств исследуемых соединений. Для этих целей используются методы прямого и обратного титрования. В основе титрометрических методов могут быть реакции следующих типов: кислотно-основные, окислительно-восстановительные, реакции осаждения и образования комплексных соединений. Определение некоторых оснований или кислот, титрование которых в воде затруднено или невозможно из-за слабых кислотно-основных свойств или малой растворимости (например, некоторые алкалоиды, аминокислоты и пр.), проводят в неводных растворах. Широко распространены методы титрования окислителями — перманганатометрия (определение дубильных веществ в сырье), йодометрия (определение арбутина в листьяхтолокнянкиибрусники)идр.

К оптическим методам относятся фотометрия, флюориметрия, денсито-метрия с использованием хроматографии на бумаге и в тонком (закрепленноминезакрепленном)слоесорбента,атакжеполяриметрия.

Фотометрический анализ основан на измерении количества света, поглощенного раствором вещества в видимой, ультрафиолетовой и инфракрасной областях спектра. Для количественного определения некоторых природных соединений в сырье и лекарственных препаратах наиболее часто применяют фотоколориметрию и спектрофотометрию.

Спектрофотометрическии анализ позволяет определять в растворе ароматические соединения (флавоноиды, фенолокислоты, кумарины, лигнаны и др.) с высокой точностью и чувствительностью при этом как суммы веществ, так и индивидуальных компонентов. Метод базируется на избирательном поглощении монохроматического света с определенной длиной волны раствором исследуемого вещества. Для этой цели служат отечественные спектрометры, позволяющие вычислить поглощение света не только окрашенных, но и бесцветных растворов в видимой или ультрафиолетовой (от 190 до 400 нм) областях спектра.

Фотоколориметрия основана на измерении поглощения немонохроматического света на довольно широком участке спектра, выделяемом с помощью светофильтров. Определение оптической плотности осуществляют на фотоэлектроколориметрах различных типов.

В фотометрии расчет концентрации вещества в анализируемом растворе проводят одним из трех методов: по молярному или удельному коэффициенту поглощения, методом сравнения оптических плотностей стандартных и исследуемых растворов и по калибровочному графику. Наибольшее распространение получил последний метод.

Флюориметрический анализ основан на измерении интенсивности люминесценции испытуемых веществ. Это самый чувствитель-

311

ный метод при анализе кумаринов, флавоноидов и антрахинонов. Практически люминесценцию определяют в растворах с концентрацией 10'*—-10"6 моль/л, когда между ее интенсивностью и концентрацией вещества наблюдается прямолинейная зависимость. Для выполнения анализа используют флюориметры или спектрофлюориметры. Метод используется пока ограниченно.

Поляриметрия — метод, основанный на определении содержания вещества в сырье по вращению плоскости поляризации. Этим методом можно определять только оптически активные соединения (например, алкалоиды, терпеноиды, гликозиды). Величину отклонения плоскости поляризации от начального положения, выраженную в угловых градусах (угол вращения), определяют на поляриметре с точностью ±0,02°. Значение последнего зависит от природы вещества, его концентрации, толщины слоя, длины волны света и температуры. Таким образом, при постоянстве всех параметров: толщины слоя, длины волны и температуры — для данного соединения угол вращения зависит только от концентрации.

Из электрохимических методов при анализе сырья наибольшее применение находят потенциометрическое титрование и полярография.

В основе потенциометрического анализа лежит определение концентрации ионов путем измерения электродвижущей силы элемента, состоящего из двух электродов: индикаторного и электрода сравнения. Потенциометрическое титрование представляет собой вид объемного анализа, при котором конец титрования обусловлен скачком потенциала индикаторного электрода. Этот метод имеет ряд преимуществ перед визуальным, он более чувствителен и объективен.

Полярографический анализ базируется на измерении силы тока, возникающего при электролизе раствора анализируемого вещества на микроэлектроде (ртутный капающий электрод). При помощи этого метода определяют соединения, способные к электровосстановлению, реже — окисляющиеся при электролизе (например, при определении фурокумаринов и флавоноидов). По кривой зависимости силы тока от напряжения в данных условиях анализа можно судить о составе и концентрации анализируемого вещества. Метод заслуживает внимания и особенно незаменим в научно-исследовательских разработках. Широкое применение полярографического анализа встречает затруднения, так как требует соблюдения строгих мер безопасности при работе с ртутью.

К методам анализа, основанным на физических свойствах, относится метод перегонки, или дистилляции, летучих веществ (эфирных масел) с водяным паром. Содержание эфирного масла в растительном сырье определяют способами, описанными в ГФ РБ II,

312