(Метод мойдина и зака)».

Метод основан на способности органических соединений – комплексонов – взаимодействовать с ионами кальция. В качестве комплексона используется трилон Б (ЭДТА). Трилоном Б титруют ионы кальция, предварительно связанные с индикатором – мурексидом. Момент полного связывания кальция с трилоном Б определяется по изменению цвета мурексида (в комплексе с ионами кальция мурексид красно-оранжевого цвета, свободный от кальция мурексид окрашивается в сине-фиолетовый цвет). Комплекс кальция с трилоном Б более прочен, чем комплекс с мурексидом. Зная концентрацию и объем раствора трилона Б, пошедшего на титрование, находят содержание кальция. Нормальное содержание кальция в сыворотке крови 9-11 мг/дл (2,25-2,64 ммоль/л). Состояние гипокальциемии наблюдается при авитаминозе Д (рахите), у беременных, при недостаточной функции паращитовидной железы, заболеваниях почек, при отравлениях фторидами. Гиперкальциемия встречается реже (гиперпаратиреодизм, опухоли, деструктивные процессы в костной ткани, лейкозы).

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ: сыворотка крови.

РЕАКТИВЫ: 1) NaOH, 30%-ный раствор. 2) Трилон Б, 0,05 моль/л раствор. 3) Индикатор (смесь мурексида с хлоридом натрия в соотношении 1:100).

ОБОРУДОВАНИЕ: 1) Колбы вместимостью 100 мл. 2) Цилиндры мерные вместимостью 100 мл.

3) Пробирки. 4) Бюретки.

Ход работы.

Готовят раствор мурексида для всей группы студентов. Для этого в колбу вносят 1 мл раствора NaOH и 100 мл воды, перемешивают. В полученный раствор добавляют смесь мурексида до появления ярко-фиолетовой окраски. Микробюретку заполняют раствором трилона Б. В две широкие пробирки (опытная и контрольная) наливают по 5 мл раствора мурексида. В опытную пробирку вносят по 0,2 мл (4 капли) исследуемой сыворотки крови (раствор становится розовым). Титруют (без промедления!) из микробюретки раствором трилона Б до исчезновения розовой окраски и восстановления фиолетового цвета (сравнить с окраской контроля, титрование лучше делать при дневном освещении).

РАСЧЕТ: Исходя из того, что 1 мл 0,05 моль/л раствора трилона Б эквивалентен 0,06 мг Са, рассчитывают содержание кальция в сыворотке крови (в мг/дл):

Х = В х 0,06 х 100 х 5,

где В – объем трилона Б, пошедший на титрование опытной пробы, мл.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 20.

Тема: «качественная реакция на адреналин и фолликулин».

МАТЕРИАЛ ИССЛЕДОВАНИЯ: раствор адреналина (1:1000).

РЕАКТИВЫ: 1) 1%-ный раствор FeCl₃. 2) 10%-ный раствор NaOH. 3) 10%-ный раствор KIO₃.

4) 10%-ный раствор уксусной кислоты.

ОБОРУДОВАНИЕ: штатив с пробирками, пипетки.

Ход работы.

I. РЕАКЦИЯ С FeCl₃. В пробирку вносят 3 капли раствора адреналина и 1 каплю 1% раствора FeCl₃. Появляется изумрудно-зеленое окрашивание, которое затем при прибавлении 1 капли раствора NaOH приобретает вишнево-красный цвет. Реакция обусловлена тем, что пирокатехиновое ядро образует с ионами Fe⁺³ соединения типа фенолятов.

II. РЕАКЦИЯ НА АДРЕНAЛИН. В пробирку вносят 2-3 капли раствора адреналина, 2 капли раствора KIO₃ и 2 капли раствора уксусной кислоты. Перемешивают и слегка нагревают. Жидкость окрашивается в красно-фиолетовый цвет. Окраска обусловлена тем, что при взаимодействии адреналина с диазореактивом образуется азокраситель.

Качественная реакция на фолликулин (эстрон) проводится с H₂SO₄ (конц.) и обусловлена образованием эфирного соединения коричневого цвета.

РЕАКТИВЫ: H₂SO₄ (конц).

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ: фолликулин, спиртовой или масленый раствор.