Ход работы.

РЕАКЦИЯ С H₂SO₄ (конц).

Для спиртового раствора фолликулина.

В пробирку наливают 20-30 капель спиртового раствора фолликулина и помещают её в кипящую водяную баню на 5-10 минут для удаления спирта. К оставшемуся в пробирке фолликулину добавляют 0,4 мл (8 капель) H₂SO₄ (конц.) и ставят пробирку вновь в кипящую водяную баню на 5-10 минут. Жидкость в пробирке постепенно приобретает соломенно-желтое окрашивание, переходящее при нагревании в оранжевое.

Для масляного раствора фолликулина.

С масляным раствором фолликулина реакцию проводят при комнатной температуре. К 2 каплям масляного раствора фолликулина приливают 0,5 мл (10 капель) H₂SO₄ (конц.), постепенно развивается коричневое окрашивание.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 21.

Тема: «качественные реакции на гормон поджелудочной железы – инсулин».

Гормон поджелужочной железы – инсулин – получил свое название потому, что он вырабатывается в островках Лангерганса. Инсулин является простым белком, влияет на углеводный обмен. При недостатке инсулина увеличивается содержание сахара в крови и выделяется большое количество сахара с мочой. Увеличение количества сахара в крови называется гипергликемией, а появление сахара в моче – глюкозурией. При введении инсулина происходит резкое снижение содержания сахара в крови.

В настоящее время инсулин широко применяется при лечении сахарного диабета. Инсулин дает характерные реакции на белок (Геллера, биуретовую, Фоля, Миллона и др.), но эти реакции неспецифичны.

ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАКТИВЫ. Штатив с пробирками, пипетки. Раствор инсулина в ампулах, концентрированная азотная кислота, 10 и 30%-ный раствор едкого натра, 1%-ный раствор сернокислой меди, реактив Фоля (5%-ный раствор ацетата свинца).

Ход работы.

1. РЕАКЦИЯ ГЕЛЛЕРА. К 10 каплям концентрированной азотной кислоты осторожно по стенке пробирки приливают равный объем – 10 капель раствора инсулина. Пробирку наклоняют под углом 45 так, чтобы обе жидкости не смешивались. На границе двух жидкостей образуется белый аморфный осадок в виде небольшого кольца.

2. БИУРЕТОВАЯ РЕАКЦИЯ. К 10 каплям инсулина добавляют 5 капель 10%-ного раствора едкого натра и 3-5 капель 1%-ного раствора сернокислой меди. Перемешивают, встряхивают. Жидкость окрашивается в фиолетовый цвет.

3. РЕАКЦИЯ ФОЛЯ. К 5 каплям раствора инсулина приливают 5 капель 30%-ного раствора едкого натра и 5 капель реактива Фоля и кипятят. Через 1–2 минуты при стоянии появляется бурый или черный осадок сернистого свинца.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 22.

Тема: «реакция на билирубин».

Билирубин образуется из простетической группы гемоглобина-гема. Гем теряет железо и подвергается превращению. При этом образуется ряд веществ, молекулы которых представляют собой открытые цепи. Наиболее окисленным из них является биливердин, который восстанавливаясь, переходит в билирубин. Билирубин образуется в селезенке, печени, а также, по-видимому, в эритроцитах. В процессе обмена веществ билирубин вступает во временную связь, с белками тканей и жидкостей организма. Билирубин образует комплексы преимущественно с альбуминами. Билирубин обычно содержится в крови в небольших количествах (0,2-0,8 мг%). При различных поражениях печени и желтухах часто наблюдается гипербилирубинемия, когда концентрация билирубина в крови достигает 30-35 мг% (см таблицу).

Содержание билирубина в сыворотке крови в зависимости от возраста.

Возраст человека	Билирубин в мг%
	Общий	Прямой	Непрямой
Новорожденный 2-й день 4-й день 6-й день 9-й день 1-й месяц Взрослый	1,35 3,17 5,27 4,21 3,10 0,65 0,65	0,51 0,51 0,46 0,51 0,51 0,15 0,15	0,84 2,86 4,81 3,70 2,51 0,50 0,50

В сыворотке крови имеются два вида билирубина: нерастворимый в воде непрямой билирубин и прямой билирубин, связанный с глюкуроновой кислотой, хорошо растворим в воде. Непрямой билирубин связан с альбуминами крови и дает розовое окрашивание с диазореактивом только после обработки сыворотки крови этиловым или метиловым спиртом. Эта реакция на билирубин называется непрямой. Прямой билирубин, связанный с глюкуроновой кислотой, дает прямую диазореакцию (т.е. без предварительной обработки спиртом).

У здоровых людей свободный билирубин (т.е. связанный с альбумином, нерастворимый в воде, непрямой) уходит из плазмы в печень и там переходит из свободного в связанный с глюкуроновой кислотой (т.е. в растворимый, прямой). В норме прямой билирубин составляет 75% общего билирубина крови. Прямая реакция на билирубин характерна в первую очередь для желтухи, возникшей вследствие механического препятствия оттоку желчи. Повышение непрямого билирубина является одним из основных признаков гемолитической желтухи. В печени билирубин задерживается и затем вместе с желчью в виде глюкуронида изливается в желчный пузырь. В состав желчи входит билирубин и биливердин в форме солей щелочных металлов. Билирубин имеет красновато-желтую, биливердин – зеленую окраску. Вместе с желчью билирубин и биливердин поступают в двенадцатиперстную кишку. Под влиянием микроорганизмов пищеварительного тракта часть билирубина восстанавливается в темно окрашенный пигмент кала – стеркобилиноген, который на воздухе окисляется и превращается в стеркобилин.

Схема превращения билирубина:

Билирубин + 2Н₂  мезобилирубин;

Мезобилирубин + 2Н₂  стеркобилиноген (уробилиноген);

Стеркобилиноген + 2Н₂  стеркобилин.

Часть мезобилирубиногена из тонкого кишечника всасывается в кровь, попадает в печень и вновь поступает с желчью в кишечник. Незначительное количество стеркобилирубиногена после всасывания в толстом кишечнике, минуя печень, попадает в кровь и выделяется с мочей. Стеркобилиноген является пигментом мочи, обусловливающим специфическую окраску, и носит название уробилиноген. На воздухе уробилиноген окисляется и превращается в уробилин.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ: 1) сыворотка крови. 2) сыворотка крови, содержащая прямой билирубин (к консервированной сыворотке добавляют небольшое количество желчи).

РЕАКТИВЫ: 1) диазореактив приготовляется смешиванием 10 мл раствора №1 и 0,3 раствора №2 (диазореактив №1: 5 г сульфаниловой кислоты растворяют при подогревании в 300-400 мл дистиллированной воды, 15 мл конц. солянойкислоты и доводят водой до 1 л. Диазореактив №2: 0,5%-ный раствор азотистокислого натрия). 2) Спирт этиловый. 3) Сыворотка крови (нативная).

ОБОРУДОВАНИЕ: бюретки, штатив с пробирками, воронки, фильтры бумажные, пипетки на 1 и 2 мл, часовое стекло, стеклянные палочки.