Ход работы:

1. В химический стакан на 50 мл отмеривают цилиндром 3 мл молока и добавляют 7 мл дистиллированной воды. Смесь перемешивают и добавляют 10-15 кап. 1%-ного раствора соляной кислоты. Кислоту приливают аккуратно, по каплям, т.к. в избытке кислоты осадок казеина растворяется. Суспензию перемешивают. Через 3-5 минут образуется рыхлый осадок.

2. Для удаления соляной кислоты в стакан приливают 10 мл дист. воды, перемешивают и оставляют еще на 5 минут. Надосадочную жидкость аккуратно сливают. К осадку еще раз приливают 10 мл дист. воды. С помощью этой процедуры удаляют большую часть соляной кислоты. Осторожно перемешивают содержимое стакана и через 5 минут фильтруют через бумажный фильтр.

3. После отстаивания жидкость фильтруют и с фильтратом проделывают биуретовую реакцию и молибденовую пробу на фосфорную кислоту. К 5 каплям гидролизата прибавляют 10%-ный раствор гидроксида натрия и 2 капли 1%-ного раствора сульфата меди. Наблюдается фиолетовое окрашивание. К 10 каплям молибденового реактива добавляют 5-7 капель гидролизата и кипятят несколько минут в присутствии фосфорной кислоты (5 капель), жидкость окрашивается в лимонно-желтый цвет. При охлаждении выпадает кристаллический осадок комплексного соединения (NH₄)₃PO₄12MoO₃.

Контрольные вопросы:

1. К какому классу сложных белков относится казеин?

2. Напишите реакцию серина с фосфорной кислотой.

3. Что такое биуретовая реакция?

Занятие № 3 «Ферменты» (часть 1)

1. Классификация ферментов.

2. Механизм действия ферментов. Специфичность действия ферментов.

3. Влияние параметров среды на активность ферментов. Коферменты и кофакторы.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 3.

Тема: “влияние температуры на активность амилазы”.

Расщепление крахмала амилазой можно наблюдать, используя реакцию с йодом.

МАТЕРИАЛ ИССЛЕДОВАНИЯ: амилаза слюны (наклонив голову, приоткрывают рот, подносят пробирку к нижней губе и собирают слюну).

РЕАКТИВЫ: I₂, 1%-ный раствор в KI; крахмал, 1% раствор; дистиллированная вода, фосфатный буфер с разным значением рН (5,4 - 8,0).

ОБОРУДОВАНИЕ: пипетки, пробирки, термостат (40⁰С), водяная баня и баня со льдом, предметные стекла.

ХОД РАБОТЫ.

1. Наливают в четыре пробирки по 0,5 мл раствора крахмала. Еще в четыре пробирки наливают по 0,5 мл разбавленной (1:10) слюны.

2. Берут первую пару пробирок (одна с ферментом, другая с крахмалом) и помещают в баню со льдом. Вторую пару оставляют при комнатной температуре. Третью пару пробирок помещают в термостат (40⁰С), четвертую - в кипящую водяную баню.

3. Через 10 мин. содержимое каждой пары пробирки сливают вместе, тщательно перемешивают и оставляют стоять еще 10 минут в тех же условиях.

4. Из третьей пробирки отбирают 3 капли жидкости и проделывают реакцию с каплей йода на стекле. Если появляется синее окрашивание, растворы оставляют стоять еще 10 мин. и после этого повторяют реакцию с йодом на стекле. Затем добавляют 2 капли раствора йода во все пробирки и наблюдают за появлением окрашивания.

ОФОРМЛЕНИЕ РАБОТЫ: результаты записывают в таблицу; делают выводы о характере влияния температуры на активность амилазы. Сравнивают результаты, полученные с разными образцами слюны.

№ пробирки	Температура инкубации, ^0С	Окрашивание с йодом
1	0
2	20
3	40
4	100