Ход работы:

Непрямая реакция. В пробирку отмеривают 1 мл сыворотки крови, 2 мл этилового спирта и фильтруют. К фильтрату добавляют 5 капель свежеприготовленного диазореактива – появляется красно-розовое окрашивание.

Прямая реакция. На часовое стекло, под которое положен лист белой бумаги, наносят каплю сыворотки крови, содержащий прямой билирубин, добавляют 3 капли свежеприготовленного диазореактива и перемешивают стеклянной палочкой. Образуется характерное для билирубина красное окрашивание.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №

Тема: «определение содержания триацилглицеролов в сыворотке крови».

Триацилглицеролы омыляются гидроксидом калия в глицерин, при окислении которого возникает формальдегид. Формальдегид определяют по реакции с метилацетоном и амониевыми ионами как желтый 3,5-диацетон-1,4-дегидролутидин.

РЕАКТИВЫ: 1) Эталонный раствор триолеин 3,39 ммоль/л 2) Ацетилацетон, 0,75 г/л в растворе 20%-ного раствора изопропилового спирта. 3) Окислительный раствор 0,13 Н KIO₄ в ацетатном буфере.

4) KOH 1 моль/л. 5) Изопропиловый спирт. 6) Адсорбент.

ОБОРУДОВАНИЕ: КФК-2, водяной термостат, встряхиватель, пробирки, бюретки.

Ход работы:

1. Отмечают цифрами три центрифужные пробирки.

2. В пробирку №1 помещают 0,1 мл исследуемой сыворотки крови.

3. В пробирку №2 помещают 0,1 мл эталонного раствора триолеина.

4. В пробирку №3 помещают 0,1 мл дистиллированной воды.

5. В каждую пробирку помещают по 4 мл изопропилового спирта.

6. В каждую пробирку добавить одну порцию адсорбента.

7. Содержимое пробирки в течение 10-15 минут на встряхивателе.

8. Затем центрифугируют 5 минут при 3000 оборотах в минуту.

9. Отмечают три сухих пробирки цифрами и в каждую из центрифужных пробирок отмеривают по 2 мл надосадочной жидкости и по 5 мл раствора KOH.

10. Содержимое пробирок перемешивают, пробирки закрывают пробками и инкубируют в течение 10 минут при температуре 60 ±2⁰С.

11. Охлаждают пробирки в холодной воде в течение 5 минут.

12. Во все пробирки добавляют по 0,5 мл раствора KIO₄.

13. Оставляют стоять 10 минут при комнатной температуре.

14. Во все пробирки добавляют по 0,5 мл ацетилацетона и перемешивают.

15. Все пробирки инкубируют точно в течение 30 минут при температуре 60⁰С.

После охлаждения измеряют оптическую плотность содержимого пробирки.

№1 (А₁) и №2 (А₂) относительно содержимого пробирки №3 на длину волны 450-420 нм в кювете 1 см.

РАСЧЕТ: С (триацилглицеролов) (ммоль/л)= 3,39  А₁/А₂.