Задача 7.

1. C.botulinum - возбудитель ботулизма. Ботулизм - тяжелая пищевая интоксикация, вызываемая ботулиническим токсином и ха­рактеризующаяся поражением нервной системы..

Вид C.botulinum образует экзотокси­ны, различающиеся по антигенным свойствам, и по этому признаку подразделяется на серотипы. Ботулотоксины всех типов обладают сход­ной биологической активностью и являются вариантами единого нейротоксина. Кроме нсйротоксического действия ботулотоксин обладает лейкотоксической, гемолитической и лецитиназной активностью.

Известны 8 антигенных вариантов ботулотоксина: А, В, Cl, C2, D, E, F, G. Токсинообразование типов С, D, Е закодировано в геноме конвертируемых бактериофагов и проявляется при интеграции профага в бактериальную хромосому; у остальных типов генетический контроль осуществляет непосредственно хромосома клетки.

Заболевания человека вызывают ботулотоксины типов А, В, Е, а также F. В организме человека С. botulinum размножаются слабо и не продуцируют токсина за редким исключением. Ботулотоксин на­капливается в пищевых продуктах, инфицированных спорами С. botulunum, при их прорастании, если созданы анаэробные условия (например при консервировании). Для человека ботулотоксин - самый сильнодействующий бактериальный яд, губительно действующий в дозе 10^хг. Токсин полностью инактивируется при кипячении в тече­ние 20 минут.

Токсин представляет собой полипептидную цепь с одной или несколькими внутримолекулярными связями, его молекулярная масса равна 150 000, он относится к бинарным токсинам.

Ботулотоксины всех типов продуцируются в виде токсичных бел­ковых комплексов, состоящих из нейротоксина и нетоксичного белка. Белок является стабилизатором токсина, защищает его от разрушаю­щего действия протеолитических ферментов и НС1.

Ботулотоксин в виде высокомолекулярного комплекса малоток­сичен и является прототоксином. В результате мягкого протеолиза, осуществляемого у большинства типов токсина собственными эндо­генными протеазами, а у типа Е экзогенными протеазами (например трипсином), прототоксин распадается на 2 субкомпонента: L-легкий и Н-тяжелый. Между ними сохраняется дисульфидная связь. L-суб­компонент соответствует фрагменту А (активатор) и оказывает токси­ческое действие на клетку-мишень (мотонейрон). Н-субкомпонент соответствует фрагменту В (акцептор) и осуществляет прикрепление к рецептору клетки-мишени.

2. Патогенез. Попав вместе с пищей в ЖКТ, ботулотоксин прикреп­ляется к клеткам эпителия кишечника и путем пиноцитоза попадает в лимфатические сосуды, затем в кровь и далее проходит гематоэнцефалический барьер. В организме он распадается на 2 субкомпонента: L-легкий и Н-тяжелый. Н-субкомпонент связывается с ганглиозидами пресимпатической мембраны мотонейронов. L-субкомпонент, действуя как эндопротеаза, блокирует секрецию ацетилхолина. Тем самым пре­рываются нервные импульсы, идущие от мотонейрона к мышце, что приводит к развитию вялых параличей. Ботулотоксин поражает мотонейроны спинальных моторных центров, продолговатого мозга и пе­риферической нервной системы.

Экология. C.botulinum является сапронозом и вегетирует в по­чве, часто обнаруживается в кишечнике лошадей и других животных, реже встречается в кишечнике человека. Из почвы или испражнений споры возбудителя попадают на различные объекты и могут загряз­нять пищевые продукты. В анаэробных условиях споры прорастают, вегетативные клетки продуцируют ботулотоксин. Чаще всего заболе­вание возникает при употреблении в пищу консервированных продук­тов домашнего приготовления, что связано с их недостаточной стерилизацией.

3. Лабораторный диагноз ботулизма проводят одновременно в двух направлениях - обнаруживают ботулотоксин и выделяют возбудителя.

Исследуемые материалы: кровь, рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, моча, секционный материал, пищевые продукты. 1. Выявление ботулотоксина и определение его типа может быть осуществлено:

Серологическим методом с помощью серологических реак­ций РОНГА, ИФА, реакции преципитации в геле.

Бактериологический - выделение и идентификация культуры C.botulinum (как и других клостридий) проводят, используя методы выделения анаэробных бактерий.

4. Биопроба на мышах. Для этой цели кровь, фильтрат или центрифугат других исследуемых материалов разливают в 4 пробирки, в каждую из трех добавляют разные противоботулинические сыворотки А, В и Е, в 4-ю - нормальную сыворотку и инкубируют в термостате 30 минут. Затем содержимое пробирок вводят 4-м группам мышей (не менее 2-х мышей в каждой группе) и наблюдают за живот­ными в течение 4-х суток. При наличии ботулотоксина вы­живают мыши только одной группы вследствие нейтрализации токсина гомологичной сывороткой, что по­зволяет определить тип ботулинического токсина.

5. Сыворотки противоботулинические типов А, В, Е лошади­ные очищенные концентрированные жидкие - представляют собой специфические иммуноглобулинные сыворотки крови ло­шадей, гипериммунизированных ботулиническими анатоксина­ми, очищенные, концентрированные. С лечебной целью сыворотку вводят в максимально ранние сроки с момента появ­ления первых симптомов ботулизма. Для лечения заболеваний, вызванных неизвестным типом токсина ботулизма, используют смесь моновалентных сывороток. При известном типе токсина используют моновалентную сыворотку соответствующего типа.