генетика к 2 кр

G-бэндинг

1.Больше бэндов, чем при С-окраске. Как и С-бэндинг требует красителя Гимза, но предобработка включает трипсин, мочевину или протеиназу.

2.G-бэндинг на растительных хромосомах практически невозможен, повидимому, из-за большего количества ДНК на единицу длины хромосомы, хромомеры слишком плотно упакованы по сравнению с хромосомами млекопитающих.

3.В последние годы появились методики G- окрашивания растительных объектов.

Сравнение метафазной и прометафазной гомологичных хромосом: распределение бэндов соответствует положению желобков на поверхности хромосомы (x 10,000; Harrison, C.J.,

Jack, E.M. Allen, T.D., and Harris, R., J. Cell Sci., 77, 143, 1985.

Courtesy of the Company of Biologists)

Q-бэндинг

1.Хромосомы не проходят предварительную обработку

2.Обработку проводят акрихином или его производными (акрихинипритом)

3.Исследование хромосом проводят с помощью флуоресцентного микроскопа

R-бэндинг

1.Предварительная инкубация препаратов в фосфатном буфере (рН=6.8) в условиях контролируемой температуры (87 °С) в течение 10-12 мин.

2.Окрашивание обратно Q- и G-окрашиванию

Сравнение основных видов дифференциального окрашивания

Название метода

Основа метода

Объекты

Q-бэндинг	Окрашивание ДНК АТ-специфичными	Рептилии, птицы,
	флуорохромами (акрихин,DAPI, Hoechst	млекопитающие
	33258 ) - жѐлтое свечение
G-бэндинг	Окрашивание Гимзой после инкубации в	Рыбы, амфибии,
	тѐплом SSC или трипсине	рептилии, птицы,
		млекопитающие
R-бэндинг	Окрашивание Гимзой после инкубации в	Млекопитающие
	горячем буфере
C-бэндинг	Окрашивание Гимзой после обработки	Большинство
	щелочью - фиолетовые бэнды	растений и
		животных
Репликацион-ный	Слияние с BrdU в течение ранней или	Растения
бэндинг	поздней S-фазы после окрашивания
	Гимзой

Сравнение методик основных способов дифференциального окрашивания

Название метода	Принцип метода
C-бэндинг	Гимза окрашивает насыщенные сателлитами
	прицентромерные районы, выявляет конститутивный
	гетерохроматин
R-бэндинг	Выявляет области, насыщенные GC-парами,
	противоположен по рисунку G-бэндингу
G-бэндинг	Тѐмные G-бэнды образуются в профазе или ранней
	метафазе, благодаря участкам ДНК, способным
	связывать краситель
Q-бэндинг	АТ-насыщенные участки ДНК флюоресцируют,
	благодаря арихину; GC-области подавляют его
	действие; большей частью в гетерохроматине; зависит
	также, например, от способности флуорохрома
	связываться с гистонами

Сравнение С- и G-бэндинга в животных и растительных хромосомах

1.С-, G-, N-, нецентромерные (интерстициальные и теломерные) бэнды в зависимости от интенсивности обработки выявляются как у растений, так и у животных

Повышение жесткости обработки:

G R T C

2.С-бэнды растений богаты АТ-парами, расположены близко друг к другу и подобны бэндам, выявляемым при окраске по Фѐльгену или Q-окраске, потому сравнимы с G-бэндами млекопитающих

3.Степень одинаковости С- и G-бэндов хромосом животных и растений до конца не выяcнена

4.Бэнды хромосом животных более отчетливы

Другие методы

1.T-окраска –вариант R-окраски с преимущественным окрашиванием теломер

2.NOR-бэндинг – окрашивание хромосом аммонийным серебром, при этом окрашивается ядрышковый организатор (вторичная перетяжка)

3.Hy-бэндинг– метод специально разработан для растительных объектов. Включает обработку горячей соляной кислотой (HCl) и окрашивание ацетокармином. Распределение бэндов иное, чем у С-бэндинга

Длина хромосом и число сегментов (бэндов)

в метафазе – 400 (слева) и профазе – 1400 (справа)

Гибридизация in situ. GISH.

GISH of Allium cepa x (A. roylei x A. fistulosum) hybrid