Вирус гепатита а

 

Культивирование и репродукция. Вирус гепатита обладает пониженной способностью к репродукции в культурах клеток. Однако его удалось адаптировать к перевиваемым линиям клеток человека и обезьян. Репродукция вируса в культуре клеток не сопровождается ЦПД. HAV почти не выявляется в культуральной жидкости, поскольку ассоциирован с клетками, в цитоплазме которых он репродуцируется.

 

Вирус гепатита А отличает рекордная устойчивость к внешним воздействиям:

• Кипячение - инактивация вируса происходит только через 5 мин.

• Хлор - 30 мин.

• Формалин - 72 часа

• 20% этиловый спирт - не инактивируется

• кислая среда (рН 3.0) - не инактивируется

• блюда из мяса и моллюсков (температура 80^оС) - 20 мин.

• выживание в воде (температура 20^оС) - 3 дня

 

Патогенез заболеваний человека и иммунитет. HAV так же, как и другие энтеровирусы, с пищей попадает в желудочно-кишечный тракт, где репродуцируется в эпителиальных клетках слизистой оболочки тонкой кишки и регионарных лимфатических узлах. Затем возбудитель проникает в кровь, в которой он обнаруживается в конце инкубационного периода и в первые дни заболевания.

 

 

 

Желтушность склер и кожи

 

В отличие от других энтеровирусов основной мишенью поражающего действия HAV являются клетки печени, в цитоплазме которых происходит его репродукция. Не исключена возможность поражения гепатоцитов NK-клетками (натуральными киллерами), которые в активированном состоянии могут взаимодействовать с ними, вызывая их разрушение. Активация NK-клеток происходит и в результате их взаимодействия с интерфероном, индуцированным вирусом. Поражение гепатоцитов сопровождается развитием желтухи и повышением уровня трансаминаз в сыворотке крови. Далее возбудитель с желчью попадает в просвет кишечника и выделяется с фекалиями, в которых отмечается высокая концентрация вируса в конце инкубационного периода и в первые дни заболевания (до развития желтухи). Гепатит А обычно заканчивается полным выздоровлением, летальные исходы редки.

После перенесения клинически выраженной или бессимптомной инфекции формируется пожизненный гуморальный иммунитет, связанный с синтезом противовирусных антител. Иммуноглобулины класса IgM исчезают из сыворотки через 3—4 мес после начала заболевания, в то время как IgG сохраняются в течение многих лет. Установлен также синтез секреторных иммуноглобулинов S lgA.

Эпидемиология. Источником инфекции являются больные люди, в том числе и с распространенной бессимптомной формой инфекции. Вирус гепатита А широко циркулирует среди населения. На Европейском континенте сывороточные антитела против HAV содержатся у 80 % взрослого населения, достигшего 40-летнего возраста. В странах с низким социально-экономическим уровнем инфицирование происходит уже в первые годы жизни. Гепатитом А часто болеют дети.

Больной наиболее опасен для окружающих в конце инкубационного периода и в первые дни разгара болезни (до появления желтухи) в связи с максимальным выделением вируса с фекалиями. Основной механизм передачи — фекальнооральный — через пищу, воду, предметы обихода, детские игрушки.

Вирусный гепатит А - вирусная инфекция, проявляющаяся желтухой, которая вызвана аутоиммунным поражением клеток печени вследствие их поражением вирусом. Инфекция передается фекально-оральным путем, с загрязненной водой и продуктами. Источниками вируса являются заболевшие люди.

Эпидемическая желтуха была описана впервые еще в античную эпоху, однако гипотеза об инфекционной природе была впервые сформулирована Боткиным только в 1888 году. Дальнейшие исследования привели к разделению в 1960-х годах вирусного гепатита с фекально-оральным путем передачи (А) и сывороточного гепатита (В). Позднее были выявлены и другие вирусные гепатиты - C, D, E и др.

Впервые вспышки гепатита А были описаны в XVII-XVIII веках. Неэпидемические, отдельные случаи вирусного гепатита А были описаны как катаральная желтуха - то есть желтуха, сопровождающаяся симптомами простуды. Спустя век было доказано, что эпидемическая и неэпидемическая формы желтухи являются проявлением одной и той же инфекции, вызванной одним вирусом.

Фекально-оральный механизм распространения вируса был выявлен только во время Второй Мировой войны. В 1941-42 гг. желтуха стала проблемой для английских войск в ходе военных действий на Среднем Востоке, когда вирус вывел из строя около 10% личного состава. С этого момента, в 1943 г. в Великобритании и США были начаты углубленные исследования проблемы. Факт пожизненного иммунитета к инфекции у однажды переболевших ею натолкнул исследователей на мысль о том, что сыворотка переболевших гепатитом А может быть использоваться для профилактики. Эффективность использования человеческого иммуноглобулина (считается, сыворотка всех взрослых содержит антитела к вирусу гепатита А) была продемонстрирована уже в 1945 г., когда результатом иммунизации 2,7 тыс. американских солдат стало 86%-е снижение заболеваемости.

Чаще всего вирус попадает в организм фекально-оральным путем, то есть при употреблении в пищу контаминированных воды и продуктов. Чаще всего, это продукты, не подлежащие термической обработке - зелень и фрукты, либо уже контаминированные вирусом, либо вымытые водой сомнительного происхождения. Менее актуальным является передача вируса с зараженной кровью и ее продуктами, что встречается у наркоманов, пользующихся общими шприцами, у тех, кто получает препараты крови или контактирует с ней (включая сотрудников органов правопорядка). Этот путь передачи редко принимается в расчет, хотя чисто умозрительное сравнение с вирусным гепатитом В может дать представление о возможной недооценки распространенности гепатита А.

Источником инфекции является больной человек в последнюю неделю инкубационного периода (который длится от 14 до 28 дней) и в первую неделю заболевания. Таким образом внешне здоровый человек может служить источником опасности для своего окружения. Длительность нетрудоспособности в среднем составляет 35 дней.

Большинство случаев заболевания начинается с симптомов, напоминающих простудное заболевание - потеря аппетита, общая слабость, тошнота, рвота, повышение температуры. Впрочем, эти симптомы обычно не останавливают больных, они продолжают работать и не обращаются к врачам.

  Первым симптомом, настораживающим пациентов, является потемнение мочи, что является одним из признаков желтухи. Цвет мочи меняется с обычного, соломенно-желтого до цвета темного пива. Другим признаком желтухи, который первыми замечают уже близкие больного, является пожелтение склер (белков глаз). Третьим классическим признаком желтухи является обесцвечивание кала.

Однако вирусный гепатит А может протекать и без желтухи, когда единственными признаками протекающей инфекции могут быть тошнота, потеря аппетита и, возможно, боли в животе. Частота желтушных форм увеличивается с возрастом, желтуха редко встречается у детей до 5 лет и является практически обязательным спутником гепатита А у взрослых.

Наиболее тяжелыми клиническими формами вирусного гепатита А являются холестатическая (дословно "застой желчи") и фульминантная (молниеносная). При первой доминирующими симптомами становятся выраженная желтуха, значительное увеличение печени и сильный кожный зуд, причиной которого является раздражение нервных рецепторов кожи компонентами желчи. Застой желчи при такой форме вирусного гепатита А вызван значительным воспалением стенок желчных протоков и печени в целом. Несмотря на более тяжелое течение, прогноз при холестатической форме гепатита А остается благоприятным. Этого нельзя сказать о фульминатной, молниеносной форме гепатита А, к счастью довольно редкой среди детей и молодых взрослых (частота составляет доли процента), но нередкой у пожилых пациентов (несколько процентов случаев). Смерть наступает в течение нескольких дней, вследствие острой печеночной недостаточности.

Летальность от гепатита А колеблется в пределах от 1% до 30%, при этом обнаруживается явное нарастание летальности с возрастом, что связано с увеличением вероятности наслоения инфекции на хроническое заболевание печени. Значительная часть летальных исходов регистрируется у пациентов, являющихся хроническими носителями вируса гепатита В.

Страны с умеренной эндемичностью характеризуются особым типом распределения заболеваемости. В сельской местности встреча с вирусом гепатита А происходит в детстве, иммунитет приобретается в более молодом возрасте. В городах, где легче соблдать гигиенические требования, человек дольше остается восприимчивым, что, как ни парадоксально, приводит к большей частоте желтушных, а иногда и тяжелых форм гепатита А у горожан. Таким образом, жители городов, выезжающие в сельскую местность также являются группой риска.

Другими группами риска являются:

 лица выезжающие в командировки и на отдых в неблагополучные по гепатиту А регионы, в том числе военные

 работники канализационных служб и водоснабжения,

 работники предприятий торговли и питания,

 группы риска по осложнениям и смертности вследствие гепатита А: носители вируса гепатитов В и С, пациенты с хроническими заболеваниями печени.

Клинические проявления гепатита А

Один из наиболее важных факторов, от которого зависят клинические проявления гепатита А - это возраст. В отличие от взрослых, у детей не бывает "классической" картины гепатита А. Более того, у маленьких детей гепатит А может протекать бессимптомно. Частота появления и тяжесть симптомов заболевания увеличивается с возрастом, так что желтушная форма гепатита А характерна почти для всех взрослых больных. У больных пожилого возраста более вероятно развитие тяжелой формы заболевания, для них более свойственно развитие тяжелых осложнений гепатита А. Больные старше 40 лет, чаще нуждаются в госпитализации, уровень смертности среди них, по сравнению с другими возрастными группами, также выше. В типичных случаях клиническое течение гепатита Аимеет четыре стадии: инкубационный период, продромальная фаза, желтушная фаза и период выздоровления. Инфицированный больной выделяет вирус на начальных стадиях заболевания, и инфекция передается другим лицам задолго до развития клинических симптомов. После наиболее контагиозного инкубационного периода продолжительностью от 15 до 50 дней у большинства больных гепатитом А начинают появляться продромальные симптомы заболевания. Вслед за этим наступает клиническая манифестация болезни, которая характеризуется большой вариабельностью симптомов. Как и при других вирусных инфекциях, продромальные симптомы гепатита А, как правило, имеют неспецифичный характер, у больных появляется чувство слабости, желудочно-кишечные расстройства (включая отвращение к пище, диарею и рвоту) и гриппоподобные симптомы, такие как головная боль, озноб и лихорадка. Кроме того, часто могут наблюдаться респираторные нарушения, мышечная слабость, кожные высыпания и боли в суставах. Появление темной мочи и неокрашенного кала в конце продромального периода являются важными признаками, указывающими на заражение вирусом гепатита А и обычно оказываются причиной обращения больного за медицинской помощью. По окончании острого периода заболевания, длящегося обычно несколько недель, у большинства больных наступает выздоровление. Тем не менее, в ряде случаев может наблюдаться рецидив заболевания, развитие холестатической желтухи или фульминантного (скоротечного) гепатита26. Переболевшие больные обладают длительным, возможно пожизненным, иммунитетом к гепатиту А. Длительный и стойкий иммунитет к заболеванию вырабатывается только после перенесенного гепатита А или активной иммунизации.

 

Лабораторная диагностика гепатита А

Вирус гепатита A (HAV) относится к семейству пикорнавирусов, роду Hepatovirus, тип 72.

Материал для исследования — фекалии больного. Для выделения вируса готовят 10—40 % фекальный экстракт, гомогенизированный в фосфатном буфере (рН 7,4). Крупные частицы отбрасывают центрифугированием с небольшой скоростью. Вирус концентрируют, комби­нируя дифференциальное центрифугирование с экстрак­цией органическими растворителями (хлороформом), фильтрацией через агарозу (сефарозу CL-2B) и плот-ностным центрифугированием в хлориде цезия. Наибо­лее интенсивное выделение вируса с фекалиями больных происходит за несколько дней до начала клинических проявлений инфекции (в конце инкубационного периода), с наступлением манифестной инфекции содержание ви­руса в фекалиях прогрессивно уменьшается. На высоте вирусовыделения концентрация вируса составляет 10⁶ и более вирионов в 1 г фекалий.

Экспресс-диагностика осуществляется с помощью ИЭМ, РИА, РЭМА.

ИЭМ позволяет выявлять в фекальном экстракте вирусные частицы при концентрации их не ниже 10⁴. Фекальный экстракт (10—20 %) смешивают со специ­фической сывороткой в соотношении 9:1, инкубируют при температуре 37 °С, осаждают центрифугированием при 10 000 об/мин в течение 30 мин, и осадок исследуют под электронным микроскопом.

РИА в твердой фазе состоит из трех этапов: а) ад­сорбция антител на поливиниловую поверхность проби­рок; б) связывание антигена из фекального экстракта фиксированными антителами; в) определение адсорбиро­вавшегося антигена с помощью специфических, мечен­ных радиоактивным йодом антител. Препарат меченых антител должен содержать 1—2 атома радиоактивного йода на молекулу гамма-глобулина.

Высокой чувствительностью обладает РЭМА, позво­ляющая выявить вирусный антиген в фекальном экст­ракте с помощью специфической сыворотки и конъюги-рованной антисыворотки.

Выделение и идентификацию вируса проводят путем заражения фильтратом фекалий чувствительных живот­ных (шимпанзе и обезьян-мармозеток), а также куль­туры человеческих лимфоцитов, стимулированных фитогемагглютинином. Вирусный антиген определяют с помощью РИФ в цитоплазме гепатоцитов, скопления вируса позволяет выявить электронная микроско­пия.

Серологическое исследование основано на выявлении специфических IgM, которые появляются очень рано, одновременно с подъемом уровня сывороточных фермен­тов, а также IgG. Для выявления антител классов IgM и IgG применяются ИЭМ, РСК, РИА, РЭМА. Наиболее широко применяется серодиагностика гепатита — выявление теми же методами в парных сыворотках крови антител класса IgM, которые достигают высокого титра в течение первых 3—6 нед.