1. Выделение чистых культур патогенных клостридий

Исследуемый материал:

Посев на плотные среды: чашка с кровяным агаром, чашка с бензидиновым агаром, чашка со средой Виллиса-Хоббс, пробирки со средой Вильсон-Блера Инкубация в анаэробных условиях при 37° в течение 1-7 суток.

Посев на жидкие среды для накопления (мясные, казеиновые). Инкубация при 37° в те­чение от 16 часов до 15 суток. Выросшие культуры, содержащие массу грамположительных палочек, пересевают на плотные среды, как указано.

Микроскопия и пересев на мясную или казеиновую среду колоний, вызывающих гемолиз, покраснение, опалесценцию или почернение на одной из указан­ных сред и состоящих из грамположительных палочек, для получения чистых культур и последующего изучения их свойств.

Среда Виллиса-Хоббс: смесь (400 мл бульона Хоттингера + 4,8 грамма агара; 4,8 грамма лактозы и 1,3 мл 1% раствора нейтрального красного) автоклавируют, охлаждают до 55-50 и добавляют 15 мл суспензии яичного желтка и 60 мл стерильного обезжиренного молока.

2. Причины высокой чувствительности строгих анаэробов к кислороду объясняют следующими обстоятельствами:

1. Отсутствием у них каталазы (в присутствии кислорода накап­- ливается перекись водорода, которая и оказывает бактерицидное действие на анаэробы).

2. В аэробных условиях тормозятся анаэробные энергетические процессы (пастеровский эффект).

3. Отсутствием у анаэробов систем регуляции окислительно- восстановительного потенциала. В присутствии кислорода он повы­- шается, анаэробы не могут понизить его до необходимого уровня, и поэтому их рост подавляется.

З А Н Я Т И Е 6

Дата ______________

Тема: Бактериологический метод (3 день). Идентификация чистых культур бактерий. Биохимическая активность бактерий.

Итоговое контрольное занятие «Морфология и физиология бактерий».

План занятия:

1. Ферменты бактерий. Регистрация результатов посева на среды пестрого ряда.

2. Регистрация результатов опыта с посевами бактерий на среды Эндо, Плоскирева и МПА.

3. Итоговый контроль по теме «Морфология и физиология бактерий».

Методические указания

1. Зарегистрировать результаты посева на среды «пестрого ряда» кишечной палочки и фекального щелочеобразователя. Ферментация углевода с образованием кислоты и газа обозначается буквами КГ; с образование только кислоты - буквой К. Свертывание молока и образование индола обозначается +; отсутствие ферментации углевода, свертывания молока или образования индола и сероводорода обоз­начается знаком -.

Результаты посева на среды “пестрого ряда”.

Виды бактерий	Глюкоза	Лактоза	Маннит	Сахароза	Молоко	Индол	H2S	Подвижность
Кишечная палочка
Фекальный щелочеобразователь

Заключение:_____________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________

2.Отметить различия в характере роста кишечной палочки и фекального щелочеобразователя (размер, прозрачность и окраска колоний на средах Плоскирева и Эндо), а также интенсивность роста их и стафилококка на средах Плоскирева, Эндо и МПА. В случае роста бактерий в виде отдельных колоний подсчитать количество колоний каждо­го вида бактерий на всех средах. Результаты зарисовать и зарегистрировать в таблице .