43

There has been elaborated a complex phytodrug consisting of silimar, tanacehol anddried extracts of birch and St.- Iohn,′s wort. and methods of its standartizing

А.Е. БУРОВА, О.А. КОНОВАЛОВА, Т.А. СОКОЛЬСКАЯ ВИЛАР, Москва, Россия.

СТАНДАРТИЗАЦИЯ ПРЕПАРАТА “РОТОКАН”

Препарат “ Ротокан” – разработан Всероссийским институтом лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР). В настоящее время выпускается фармацевтической промышленностью и широко используется в медицинской практике. Препарат представляет собой смесь спиртовых экстрактов трех видов лекарственного растительного сырья (цветков ромашки, календулы и травы тысячелистника). Препарат обладает противовоспалительным, гемостатическим и улучшающим процессы регенерации слизистых оболочек действием. В стоматологической практике его применяют при воспалительных заболеваниях слизистой оболочки рта различной этиологии и пародонта (афтозный стоматит, пародонтоз, язвенно-некротический гингвиостоматит). В гастроэнтерологии его применяют при эрозивно-язвенных поражениях желудка и двенадцатиперстной кишки, гастродоуденитах, хронических холециститах, а в проктологии при геморрое, проктитах и дру-

гих заболеваниях. [4, 5, 6].

Широкое терапевтическое действие ротокана обусловлено наличием в нем комплекса биологически активных веществ (БАВ), относящихся к различным классам химических соединений, таких как сесквитерпеновые лактоны, тритерпеновые гликозиды, флавоноиды, полииновые соединения, кумарины, вещества основного характера, полиса-

хариды, дубильные вещества и др. [1, 2, 3, 4, 5, 6].

До настоящего времени качество препарата регламентировалось ВФС 42-1640-96, срок действия которой истек в 1999 году. Согласно ВФС, оценку качества препарата проводили по сухому остатку, содержанию спирта, наличию тяжелых металлов, подлинности определению количественного содержания суммы БАВ (методом пермангоматометрии по сумме окисляемых веществ).

Подлинность препарата оценивалась качественными реакциями на наличие основных групп БАВ (сесквитерпеновые лактоны азуленового ряда, тритерпеноиды, флавоноиды, вещества основного характера и дубильные вещества).

44

В связи с окончанием срока годности НД на препарат нами была проведена работа по пересмотру ВФС 42-1640-96.

При пересмотре НД на препарат разработаны методики определения подлинности ротокана с помощью тонкослойной хромотографии (ТСХ) и количественного определения суммы БАВ по содержанию суммы фенольных соединений. Эти методики, включенные в новую редакцию ФС на ротокан, отвечают современным требованиям Фармакологического Комитета.

Рисунок 1

Схема тонкослойной хроматограммы препарата “ Ротокан ”

1

4

2

3

Препарат Стандарт

Зона 1 - фиолетового цвета соответствует характеристической зоне экстракта ромашки; Зона 2 – коричневого цвета соответствеут таковой зоне экстракта тысячелистника; Зона 3

– синего цвета соответствует характеристической зоне экстракта календулы; Зона 4 – коричневого цвета соответствеут стандартному образцу Лютеолина.

45

Разработка методики ТСХ ротокана основана на сравнении зон сканирования в хроматограмме самого препарата с зонами сканирования в хроматограммах его компонентов (спиртовых экстрактов ромашки, календулы, тысячелистника). Предлагаемая методика заключается в нахождении трех характеристических зон сканирования, определяющих в препарате наличие всех компонентов, входящих в его состав.

Расположение характеристических зон в хроматограмме ротокана определено значениями Rs согласно требованиям ГФ XI [7], в качестве стандартного вещества ис-

пользуется Государственный стандартный образец (ГСО) лютеолина [9].

Методика ТСХ ротокана включает в себя следующее: 0,04 мл препарата, предварительно отфильтрованного через складчатый бумажный фильтр, с помощью микропи-

петки	наносят полосой	размером 5 см	на линию старта хроматографической пластинки
“ Silufol “ размером 15		х 15 см. Рядом	на расстоянии 2 см наносят 0.02 мл	0.02%	спир-
тового	раствора лютеолина. Затем пластинку высушивают в сушильном			шкафу	при

1000 С в течение 10 минут, после чего помещают в хроматографическую камеру (предварительное насыщение камеры не менее часа) со смесью растворителей толуол : этилацетат : муравьиная кислота в соотношении 5 : 3 : 1 и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей дойдет до конца пластинки, ее вынимают и сушат в течение 15 минут в вытяжном шкафу. Затем просматривают в Уф свете при длине волны 365 нм и отмечают три характеристические зоны сканирования в области

хроматографирования	препарата: зона 1	фиолетового цвета с	Rs	1,13 – 1,19 (ромашка);
зона 2 коричневого	цвета с Rs 0,84 – 0,90 (тысячелистник); зона			3 синего цвета	с Rs
0,78 – 0,84 (календула). (рис.1)
Для количественного определения		суммы биологически	активных веществ		рото-

кана нами предложен спектрофотометрический метод, который основан на реакции окисления фосфорно – молибденовой кислотой (реактив Фолина) в слабощелочной среде. Предлагаемая методика заключается в проведении цветной реакции комплексообразования с суммой фенольных соединений агликонов, полученных после гидролиза соединений препарата. Полученные соединения имеют характеристический максимум поглощения в длинноволновой области спектра.

	Таким образом, методика определения БАВ ротокана включает в себя следующее:
около 2,0 г препарата		помещают		в круглодонную колбу со шлифом вместимостью
100 мл, прибавляют 10 мл 40%			этилового спирта, перемешивают, затем приливают 10 мл
10%	раствора серной кислоты		и снова перемешивают. Затем раствор кипятят с обрат-
ным	холодильником	в течение 1		часа, колбу отсоединяют, раствор упаривают до поло-

			46
вины объема для		удаления	спирта и охлаждают до комнатной температуры. Содержи-
мое	колбы перемешивают и		фильтруют через складчатый бумажный фильтр диаметром
8 см	до полного	отделения	фильтра. Колбу, в которой проводили гидролиз и осадок на

фильтре промывают дистиллированной водой (около 300 мл) до нейтральной реакции по универсальному индикатору.

Осадок на фильтре экстрагируют горячим (60±5 °С) 95% этиловым спиртом порциями по 10 мл (около 40 мл) в мерную колбу вместимостью 50 мл. Раствор охлаждают до комнатной температуры, доводят объем до метки 95% спиртом и перемешивают (раствор А).

1 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, приливают 40 мл дистиллированной воды, затем 2 мл реактива Фолина и через 30 секунд 5 мл 20% раствора натрия карбоната. Объем доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают (раствор Б).

Раствор Б выдерживают при комнатной температуре 1 час, перемешивают и измеряют оптическую плотность на спектрофотометре при длине волны 745 нм в кювете толщиной слоя 10 мм.

Одновременно в тех же условиях измеряют оптическую плотность раствора ГСО лютеолина. Раствор стандарта с концентрацией 4 х 10 г\мл количественно готовят из точной навески лютеолина стандарта.

В качестве раствора сравнения используют раствор, приготовленный одновременно с испытываемым раствором, содержащий 2 мл реактива Фолина, 5 мл 20 % раствора натрия карбоната и доведенный водой до метки в мерной колбе вместимостью 50 мл.

Содержание суммы фенольных соединений в пересчете на лютеолин в процентах

(Х) вычисляют по формуле:
Dx m0	x 50 x 50 x 100	D x m0 x 50
X= --------------------------------- = --------------------;
D0	x 2 x50 x 50 x 1	D0 x
Где: D – оптическая плотность испытуемого раствора;

D0 - оптическая плотность рабочего раствора лютеолина стандарта; m0 – масса лютеолина стандарта в граммах.

Метрологические характеристики методики рассчитаны из результатов анализа одного образца сбора в 11 независимых повторностях (Таб. 1).

Таблица 1

Метрологические характеристики методики количественного

47

определения

	f		X	S	P %		t (P: f)	X	E
	10		0,1765	0,0008774	95		2,23	0,019568	+11%
	Как видно из таблицы, ошибка единичного определения с 95% вероятностью со-
ставляет		+ 11,09%.
	Предлагаемые методики были				апробированы		на пяти	промышленных сериях

препарата ротокан. В проекте ФС на “Ротокан” рекомендуется установить норму по этому показателю не менее 0,15 %.

ЛИТЕРАТУРА

1.Коновалова А. А., Рыбалко К. С. Биологически активные вещества ромашки аптечной. Растительные ресурсы, 1986, т. 18, вып. 1, с. 116 – 127.

2.Клышев Л.К., Бандюкова В. А., Алюкина Л.С. Флавоноиды растений, 1978, Алма – Ата, издательство “Наука Казахской ССР,… с.

3.Коновалова А.А., Рыбалко К.С., Биологически активные вещества календулы лекарственной. Растительные ресурсы, 1990, т. 26, вып. 3, с. 448 – 465.

4.Коновалов Д.А., Коновалова А.А., Челомбитько В.А. Биологически активные вещества тысячелистника тыквенного. Растительные ресурсы, 1990, т. 26, вып. 4, с. 598 – 608.

5.Задорожный А.М., Кошкин А.Г., Соколов С.Я., Шретер А.И. Справочник по лекарственным растениям, 1988, Москва, Изд-во “Лесная промышленность”, 412 с.

6.Растительные ресурсы СССР: цветковые растения, их химический состав, использования: Семейство Asteraceae ( Compositae) – С.- П., издательство “ Наука “, 1993 г.,

вып. 7, с. 349.

7.Государственная Фармакопея СССР XI издание, М., издательство “Медицина”, 1981, вып. 1, с. 99.

8.Хроматография в тонких слоях. Под редакцией Э. Шталя, М., издательство

“Мир”, 1965, с. 377 – 381.

9.Стандарт лютеолина ФС 42-2970-93

A.E. Burova, O.A. Konovalova, T.A. Sokolskaja.

All-Russian Research Institute of Medicinal and Aromatic Plants, Moscow, Russia

Standartization of “Rotokan”

	48
Spectrophotometie method	of phenolic compounds determination	after the hydrolysis
of “Rotocan” tincture has been	proposed. The qualitative method of	its determination is
based on TLC.

ТАРЕЕВА Н.В., ОХОТНИКОВА В.Ф., КАЧАЛИНА Т.В., ГЛЫЗИН В.И. ВИЛАР, Москва,Россия

КАЛАНХИН – ПРЕПАРАТ ИЗ ТЕПЛИЦЫ

Растения рода каланхое (Kalanchoe) – многолетние травянистые растения из сем.толстянковых (Crassulaceae) – культивируются в тропиках Африки, Южной Америки, на Мадагаскаре и др.

Каланхое перистое (Kalanchoe pinnata Pers. Syn.) возделывается в виде однолетней культуры в Аджарии и некоторых тепличных хозяйствах России.

Наряду с выпускаемым препаратом “Сок каланхое” в ВИЛАР разработан препарат – сухой сок каланхое с условным названием “Каланхин”. Сухой сок, как и все сухие экстракты, имеет преимущества при его получении, хранении, дозировании, транспортировке. Получение сухого сока каланхое связано с рациональным использованиекм свежего лекарственного сырья, т.к. при отжиме сока из свежих побегов каланхое в жоме остается до 50 % биологически активных веществ, поэтому целесообразно провести экстракцию действующих компонентов и из жома.

Установлено, что действующими веществами каланхое является комплекс веществ кислотного характера (органические кислоты), в том числе аминокислоты, полисахариды, флавоноиды, катехины, микроэлементы и др.). Наличием этих соединений в значительной мере обусловлено противовосполительное и усиливающее регенерацию тканей действие. Проведен аминокислотный анализ и подтверждено наличие 12 аминокислот: аспарагиновая кислота, треонин, серин, глутаминовая кислота, глицин, аланин, валин, лейцин, фенилаланин, гистидин, изолейцин, аргинин; основные органические кислоты – яблочная, лимонная, щавелевая.

Отработанная технология производства каланхина позволяет получить препарат с содержанием БАВ в нативном состоянии, т.е. действующие вещества живого растения соответствуют БАВ сухого сока каланхое. Для получения каланхина используют свежие побеги каланхое, предварительно выдержанные в течение 7 суток в темном месте при температуре 5-100 С. Содержание действующих веществ в сырье 2,4 %.

Схема производства состоит из следующих стадий:

49

-отжим сока;

-экстракция жома;

-смешивание сока и водного экстракта;

-концентрипрование объединенных сока и экстракта;

-очистка концентрированного продукта сепарированием;

-сушка очищенного продукта.

Врезультате проведенных исследований установлены: оптимальное соотношение сы- рье-экстрагент (1:7), температурный режим, время и количество проведенных экстракций.

Впроцессе отработки регламента на основании экспериментальных данных с использованием воды и водноспиртовых смесей установлено, что оптимальным экстрагентом является вода при соответствующем соотношении сырье-экстрагент. Температурный режим экс-

тракции 40±2 0С. Увеличение температуры нецелесообразно, т.к. выход действующих веществ не возрастает, но появляется возможность их разложения.

Сцелью ускорения процесса извлечения БАВ экстракцию сырья проводят в аппарате

смешалкой, т.к. перемешивание ведет к обновлению поверхности контактирующих фаз и к увеличению движущей силы процесса. Экстракцию повторяют дважды. При этом во время первого контакта жома с водой извлекается до 80 % от общего количества экстрактивных веществ.

Объединенный водный экстракт смешивают с соком, концентрируют в церкуляционном вакуум-выпарном аппарате.

Затем концентрированный кубовый остаток подвергается очистке методом сепарирвоания, при этом отделяются балластные вещества (хророфиллы, смолы, пектины и другие неполярные соединения с большой молекулярной массой). Балластные вещества составляют 10-12% от объема концентрированного экстракта. Очищенный концентрат сушат на распылительной сушилке.

Выход готового продукта от начала технологического процесса составляет 70%. Содержание суммы органических кислот в исходном сырье каланхое перистого в пересчете на яблочную кислоту – 2,4%, в готовом продукте – до 60%..

В производственных условиях на ПЭЗ ВИЛАР был отработан опытно-промышленный регламент, проведены балансовые загрузки и наработана субстанция каланхина для изготовления лекарственных форм.

Для каланхина разработаны две лекарственные формы: гранулы и линимент 2 % и 5 %. Доклинические, фармакологические и токсикологические исследования препарата проведены сотрудниками ВИЛАР.

50

Лекарственная форма – гранулы каланхина разрешены Фармакологическим комитетом МЗ РФ в качестве противовосполительного и репаративного средства в комплексной терапии гастритов, гастродуоденитов, хронических энтероколитов и др.

Гранулы по сравнению с порошком имеют ряд преимуществ: улучшается сыпучесть, возможность точного дозирования, сохраняется однородный состав смеси. Кроме того, гранулы имеют привлекательный товарный вид, меньшую гигроскопичность, не раздражают дыхательные пути.

На основании экспериментальных данных отработана технология получения гранул каланхое и составлен опытно-промышленный регламент на их производство.

Технология получения гранул имеет следующие стадии:

-Просеивание инградиентов.

-Смешивание компонентов

-Влажная грануляция

-Сухая грануляция

-Просеивание гранул

-Расфасовка гранул.

Выбор наполнителей проведен на основании получения удовлетво-рительных характеристик гранулятов. В качестве наполнителей были испытаны лактоза и сахар в различных соотношениях с субстанцией каланхина. Применение сахарозы приводило к увеличению количества мелких гранул (размер менее 0,2 мм). Поэтому в качестве наполнителя был выбран молочный сахар как наиболее индифферентное вещество.

На основании опытов в качестве связующего вещества для гранул была подобрана вода, т.к. действующие вещества каланхина растворимы в воде.

Правильность выбора технологии получения гранул подтверждена химическим анализом, технологическими, фармакологическими и токсикологическими исследованиями.

Разработанная лекформа – линимент каланхое 2 % и 5 % - после клинических испытаний рекомендована Фармакологическим комитетом МЗ РФ для лечения ожогов, отморожений, гнойных ран, трофических язв, пролежней и т.д., как ранозаживляющее средство.

Технология изготовления линимента 2 % и 5 %: смесь раствора каланхина и раствора сорбиновой кислоты в спирте вводят в жировую основу, эмульгируют, добавляют эвкалиптовое масло и вновь эмульгируют.

Разработаны методы химической стандартизации, которые базируются на качественном и количественном определении органических кислот в сырье, субстанции, при постадийном контроле и лекарственных формах (гранулы, линимент 2 % и 5 %).