Количественное определение
1. Методы кислотно-основного титрования.
1.1. Ацидиметрический метод неводного титрования (титрование хлорной кислотой в среде безводной уксусной кислоты).
ФС: субстанции аминалона, кислоты аминокапроновой;
возможно определение других веществ с открытой аминогруппой (кислота глутаминовая, метионин, цистеин, пеницилламин).
Метод основан на усилении основных свойств аминокислот в среде протогенного растворителя - безводной уксусной кислоты.
При растворении в безводной уксусной кислоте цвиттер-ионная форма аминокислоты переходит в катионную.
Индикатор – кристаллический фиолетовый (от фиолетового до зеленого окрашивания). f экв.(аминалона) = 1.
1.2. Алкалиметрический метод нейтрализации в среде органических растворителей: диметилформамида (ДМФА), ацетона, этилового и пропилового спиртов (подавляют ионизацию аминогрупп), титрант - водный раствор натрия гидроксида.
ФС: метионин в субстанции, таблетках, 5% раствор кислоты
аминокапроновой для инъекций.
Индикатор – для метионина - тимоловый синий (от желтой до синей окраски), растворитель – ДМФА.
Для кислоты аминокапроновой - тимолфталеин (от бесцветного к синему окрашиванию), растворитель – ацетон. f экв.(ЛС) = 1.
1.3. Алкалиметрический метод определения аминокислот, содержащих две карбоксильные группы и одну аминогруппу. При правильном подборе индикатора данные соединения могут титроваться как одноосновные кислоты.
ФС: кислота глутаминовая в субстанции и таблетках.
Индикатор – бромтимоловый синий (от желтой до голубовато-зеленой окраски).
рКа α-СООН= 2,19
рКа γ- СООН=4,25
рКа NH2=9,67
Интервал перехода pH бромтимолового синего 6,0-7,6
f экв. (кислоты глутаминовой) = 1.
1.4. Метод «формольного титрования» (метод Серенсена). Для блокирования аминогруппы предварительно добавляют формальдегид, образуется устойчивое метиленовое производное, усиливаются кислотные свойства аминокислоты. Титрование проводят натрия гидроксидом в обычных условиях (без добавления органических растворителей).
ФС: аминалон в таблетках.
Может быть использован для других аминокислот.
Точка эквивалентности: потенциометрический метод или с помощью
индикатора фенолфталеина (от бесцветной к розовой окраске).
f экв.(аминал.) = 1.
! Алкалиметрический метод нельзя использовать для соединений, содержащих SH-группу, т.к. эта группа проявляет кислотные свойства и частично титруется натрия гидроксидом, получаются завышенные результаты.
2. Методы окислительно- восстановительного титрования.
2.1. Йодометрический метод количественного определения соединений с SH-группой (цистеин, ацетилцистеин, пеницилламин). Метод основан на восстановительных свойствах ЛС (за счет меркапто-группы).
ФС: цистеин в субстанции.
Условия: 1 M HCl, to=3oC, 20 минут, темное место.
Избыток йода титруют раствором натрия тиосульфата (индикатор – крахмал). Параллельно проводят контрольный опыт.
f экв. (цистеина)=1, т.к. каждая молекула теряет один протон.
Йодометрический метод количественного определения на метионина (ФС).
Метод основан на окислении метионина йодом в среде фосфатного буферного раствора. Используют вариант обратного титрования, избыток йода титруют раствором натрия тиосульфата (индикатор – крахмал), параллельно проводят контрольный опыт.
f экв.(метионина)=1/2, т.к. сера (II) окисляется до серы (IV).