ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА №12

Тема: Нормальная микрофлора организма человека. Дисбактериоз. Пробиотики.

Актуальность темы. Организм человека колонизирован более 500 видами микроорганизмами, которые составляют его нормальную микрофлору. Они находятся в состоянии равновесия (эубиоз) между собой и с организмом человека. Нарушение этого равновесия опасно для нашего организма потому, что нормальная микрофлора выполняет ряд важнейших функций, которые обеспечивают стабильность внутренней среды организма. Поэтому знание роли нормофлоры человека является важным вопросом современной медицины.

Цель (общая): уметь оценивать состояние нарушений в микробиоценозах организма человека, уметь корректировать эти нарушения с помощью антибиотиков и пробиотикив.

Конкретные цели - уметь:

1. Объяснять роль нормальной микрофлоры организма человека в защите организма от агрессивных агентов внешней и внутренней среды.

2. Описывать микрофлору разных биотопов организма человека в норме и при патологических процессах.

3. Характеризовать методы диагностики и коррекции нарушений в микробиоценозах организма человека.

4. Объяснять механизмы действия и сферу применения пробиотиков.

Базовый уровень:

1.Определять стерильные и нестерильные полости организма человека (кафедра анатомии).

2.Трактовать антагонизм как биологическое явление (кафедра медицинской биологии).

3. Объяснять роль ферментов в процессе пищеварения (кафедра биохимии).

4. Оценивать роль витаминов как регуляторов метаболизма (кафедра биохимии).

Для того, чтобы Вы могли выяснить, отвечает ли базовый уровень Ваших знаний-умений необходимому, предлагаем выполнить ряд задач.

Задача 1.Назовите полости человека, где микробиоценоз представлен разнообразными бактериями.

Задача 2.На основании чего делают вывод, что данный микроорганизм имеет наиболее антагонистическое действие, чем другие?

Задача 3.Как называются энзимы, которые расщепляют жиры?

Задача 4. Состояние организма при недостаточности количества витаминов?

Информацию для пополнения знаний-умений можно найти в следующих учебниках:

1. Приверс М.Г., Лысенко Н.И., Бушков В.И. Анатомия человека. -М.: Медицина.- 2001.С.

2. Афанасьев Ю.И., Юрина Н.А. Гистология, цитология и элогия. -М.:Медицина.-1999.-С.

3. Березов Т.Т., Коровкин В.Ф.Биологическая химия. -М.:Медицина.-2001.-С.

Теоретические вопросы, на основе которых возможно выполнение целевых видов деятельности:

1. Понятие о нормальной микрофлоре: ее роль и функции в организме.

2. Понятие о биотопе, микробиоценозе микроэкологической системы организма человека.

3. С фамилиями каких ученых связано учение о нормальной микрофлоре.

4. Гнотобиология. Ее значение в медицинской микробиологии и иммунологии.

5. Понятие о биотехнологии.

6. Автохтонная и аллохтонная микрофлора тела человека.

7. Микрофлора кожи, дыхательных путей, пищеварительной и мочеполовой систем.

8. Динамика нормальной микрофлоры в онтогенезе человека.

9. Понятие о колонизационной резистентности и ее роли в инфекционной патологии.

10. Дисбактериоз (условия возникновения, последствия развития, классификация по возбудителям и локализации).

11. Методы диагностики, санации, коррекции дисбактериозов.

12. Эубиотики и пробиотики - препараты для восстановления нормальной микрофлоры организма человека. Механизм действия.

13. Научная проблема кафедры микробиологии ДДМА.

Литература для усвоения знаний-умений по данной теме:

1. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология под ред. Л.Б.Борисова .М.-Медицина,2002, с.137 - 148.

2 Материала лекции по теме ”Нормальная микрофлора организма человека”.

3.Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии/под ред. Л.Б.Борисова. М.: Медицина,1984.

4.Кременчуцкий Г.Н., Рыженко С.А., Вальчук С.И .Роль микроэкологии организма человека и принципы ее коррекции.-Монография. -Днепропетровск.С.

Содержание обучения должно обеспечить достижение целей обучения, чему способствует содействие граф логической структуры темы „Нормальна микрофлора организма человека” (приложение 1).

Ориентировочная основа действия при выполнении практической работы.

1.Ознакомиться с морфологией микроорганизмов, которые составляют нормальную микрофлору нестерильных полостей тела человека:

а) изучить морфологию окрашенных мазков представителей нормальной микрофлоры тела человека: лактобактерий, бифидумбактерий, кишечной палочки. Определить морфологические признаки этих микроорганизмов. Рисунки занести в протокол.

б) приготовить и окрасить мазки из зубного налета по методу Грама. Зарисовать микроорганизмы ротовой полости. Обратить внимание на разнообразие бактерий. Сравнить полученный мазок с тем, что изображен в таблице.

в) приготовить и окрасить мазки из мокроты по методу Грама. Зарисовать микроорганизмы дыхательных путей. С помощью таблицы определить, к какой морфологической группе они принадлежат.

2.Разобрать методику исследования микробного пейзажа кишечника:

а) для выявления патогенных энтеробактерий исследуемый материал засевают на среду Эндо, Плоскирева, висмут-сульфитный агар.

б) из разведения 10^-3 0,1 мл засевают на среду Сабуро, для выявления микроорганизмов p.Candida и на ЖСА для выявления стафилококков.

в) из разведения 10^-5 0,1 мл засевают на среду Ендо и на 5% кровяной агар для выделения и количественного учета условно-патогенных энтеробактерий, кокковой группы, гемолитических форм.

г) из разведения 10^-5, 10^-7, 10^-9 по 0,1 мл засевают на среду Блоурока, гидролизатно-молочная среда или другие подобного состава среды для выявления бифидобактерий.

д) для количественного определения лактобактерий по 1 мл из этих же разведений засевают на среду МРС-3.

Критерии оценки дисбактериоза кишечника

1. Выявление бифидобактерий в разведениях менее чем 10^-8 степени или полное их отсутствие.

2. То же самое в отношении лактобактерий.

3. Увеличение количества лактозонегативных и медленно-бродящих эшерихий - более 10% от общего их количества.

4. Появление гемолитической флоры, которая отсутствует у здорового человека.

5. Выявление условно-патогенных энтеробактерий более 10^-4 на 1г фекалий (протей, клебсиэла, цитробактер и др.).

6. Выявление золотистого стафилококка.

7. Выявление грибов р.Candida более чем 10^-3 на 1г фекалий.

8. Снижение или резкое повышение количества кишечной палочки на 1г фекалий.

Для дисбактериоза характерно объединение нескольких показателей изменения микрофлоры и возникновение новых их ассоциаций в динамике заболевания.

Рассмотреть представленные результаты анализов на дисбактериоз кишечника. Определить в протоколе степень дисбактериоза для каждого случая.

Таблица 1. Степени дисбактериоза.

Степень дисбакте-риоза	Содержание облигатных анаэробов (Bifidobacterium, Bacteroides)	Содержание факультатив анаэробов и аэробов Lactobacillus,Escherichia	Клинические проявления
1	без изменения в норме (10^-8 и выше на 1г фекалий)	незначительное повышение или снижение	норма
2	незначительное снижение (к 10^-7 и ниже)	снижение Lactobacillus (10^-5 и ниже)	незначительная диспепсия
3	- значительное уменьшение анаэробов (10^-6); - значительное повышение атипичных E.coli (гемолитические и лактозонегативные); - колонизация биотопа одним из условно-патогенных микробов (Klebsiella, Proteus, Staphylococcus, Candida, Clostridium)		Понос, плохое пищеварение и усвоение пищи
4	-снижение защитной анаэробной и аэробной микрофлоры (ниже 10^-4), -колонизация биотопа несколькими видами условно-патогенной микрофлоры, -появление в кишечнике патогенных бактерий, -транслокация кишечной микрофлоры за границы биотопа.		Снижение иммунитета, диарея резкое снижение веса тела, инфекции

3. Познакомиться с научной проблемой кафедры, где создан новый пробиотик А-Бактерин, который является препаратом двойного назначения (применяется наружно и перорально). В состав его входят микробы антагонисты из рода Aerococcus, выделенные из грудного молока (штамм №167) с выраженной антагонистической активностью за счет адгезии и продуктов различных биологически активных веществ. Стимулируют иммунитет.

Области применения:

• профилактика и лечение гнойно-воспалительных процессов кожи и слизистых оболочек;

• коррекция дисбактериозов;

• профилактика кишечных инфекций и бактерионосительства.

4. Изучить антагонистическую активность производственных штаммов двух эубиотиков (Колибактерина и А-Бактерина) путем посева методом „штриха” на суточные культуры S.aureus и Vibrio-p 6078 на ПМА. Учесть готовые результаты и внести их в протокол.

5. Рассмотреть предложенные образцы биопрепаратов: „колибактерина”, ”Бификола”, ”Бифидумбактерина”, ”Лактобактерина”, ”Биоспорина”, ” А-Бактерина”. Заполнить таблицу, указать какие из микроорганизмов входят в состав пробиотиков. Ознакомиться с инструкциями относительно применения их на практике.