стоматИностр2012 / Модуль1РУС / Практическая работа №7_2

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА № 9

Тема: Методы культивирования и индикации вирусов

Актуальность темы. В связи с ростом количества вирусных инфекций, пониманием серьезности эпидемиологической ситуации относительно медленных инфекций, в частности ВИЧ-инфекции, перед медицинской вирусологией встают важные задачи по квалифицированной диагностике, лечению вирусных инфекционных заболеваний, усовершенствованию организации и деятельности вирусологических лабораторий, разработке профилактических средств.

Цель (общая): характеризовать методы культивирования и индикации вирусов в лабораторных условиях.

Конкретные цели - уметь:

1.Оценивать результаты метода индикации вирусов по ЦПД при заражении культуры тканей.

2.Знать способы заражения при методике культивирования вирусов на курином эмбрионе.

3.Определять титр вируса в хорионалантоисной жидкости зараженного куриного эмбриона с помощью реакции гемагглютинации, учитывать готовую реакцию.

Исходный уровень знаний – умений:

1.Знать иерархию бимолекулярной организации клеток живых организмов (кафедра биохимии).

2.Знать принципы структурной организации вирусов.

3.Отличие структурной организации и химического состава вирионов от бактерий.

4.Структурная и функциональная характеристика живой клетки.

5.Репродукция вирусов. Основные типы взаимодействия вируса с клеткой хозяина.

Для того, чтобы вы могли уяснить, отвечает ли исходный уровень Ваших знаний-умений необходимому, предлагаем выполнить ряд задач:

1. Дать определения понятия паразитизм.

2. Объяснить основные структурные и функциональные особенности живой клетки.

3. Назвать отличия в строении прокариотических и эукариотических клеток.

4.На примере прокариотической и эукариотической клеток сравнить строение, молекулярный состав и функции разных компонентов клетки.

5.Дать пояснение механизма биосинтеза РНК и ДНК.

Информацию для пополнения знаний-умений можно найти в следующих учебниках:

1. Биология/ Слюсарев

2. Биохимия /Под ред. акад. А.Баева М: Изд.Мир, 1976. с. 21-43.

3. Биохимия /Под ред. А.Николаева. М., 2004. с. 118-138.

4. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология /Под ред. Л.Б.Борисова,

А.М.Смирновой. М.: Медицина,1994. с. 118-120

Теоретические вопросы, на основе которых возможное выполнение целевых видов деятельности:

1.Репродукция вирусов. Основные типы взаимодействия вируса с клеткой хозяина. Особенности

репродукции Днк- и Рнк- вирусов.

2.Методы культивирования вирусов в клеточных культурах, в курином эмбрионе и в организме

животных.

3.Методы выявления (индикации) вирусов по цитопатическому действию (ЦПД)

4.Реакции гемагглютинации и гемадсорбции, бляшкообразование, внутриклеточные включения.

5. Методы идентификации вирусов.

Литература для усвоения знаний-умений по данной теме:

1. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология /Под ред. Л.Б.Борисова, А.М.Смирновой. М.: Медицина,1994. с. 145-149,151-159, 170-180.

2. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология /Под ред. А.И.Коротяева: Санкт-Петербург: Спецлит, 2000.с. 239-260.

3. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. /Под ред. Л.Б.Борисова. М.: Медицина, 1984. с. 96-104.

Ориентировочная основа действия при выполнении практической работы.

1. Разобрать на демонстрационном материале этапы приготовления культуры клеток. Определить разные виды цитопатичного эффекта, и занести в протокол рисунки незараженной культуры ткани и культур с ЦПД.

2. Изучить метод культивирования вирусов на курином эмбрионе, способы заражения куриных эмбрионов. Схематические рисунки занести в протокол.

3. Определить титр вируса в хорионалантоисной жидкости зараженного куриного эмбриона с помощью реакции гемагглютинации. Учесть готовую реакцию, результаты внести в протокол.

После ознакомления с теоретическими вопросами и ходом проведения эксперимента вам предлагается выполнить следующие учебные задачи.

1. Для проведения вирусологических исследований в областном центре организована вирусологическая лаборатория. Какие культуры клеток нужно подготовить для выделения вирусов?

2. В лабораторию поступил материал (смыв из носоглотки) от больного с подозрением на грипп. Какой биологический объект следует использовать для выделения вируса? Какое материальное оснащение необходимо обеспечить для проведения исследования?

Приложение 2

Образец протокола:

Задание 1. Культивирование вирусов в тканевых культурах, индикация вирусов по ЦПД

Рис 1 Первичная культура. Рис 2.Перевиваемая культура Рис 3. ЦПД

Задание 2. Культивирование вирусов на курином эмбрионе.

Рис.3 Схема заражения куриного эмбриона

Условные обозначения:

Задание 3. Индикация вируса в хорионаланоисной жидкости куриного эмбриона с помощью реакции гемагглютинации

Исследуемый материал	разведение						контроль
	1:10	1:20	1:40	1:80	1:160	1:320
ХАЖ

Вывод: в хорионаланоисной жидкости выявлено_________________________ , титр вируса ____________ .

Задание 5. Для диагностики вирусных заболеваний используются следующие методы:

1.

2.

3.

4.

5.

6.

7.

Дата___________ Подпись преподавателя __________________

Методы культивирования та индикиции вирусов

куриный эмбрион

организм лабораторного животного

тканевые культуры

Метод бляшкообразования (негативных колоний)

Цветная реакция

ЦПД при микроскопии (мелко или крупно -зернистая деструкция, очаговая деструкция, симпластобразования)

Реакции гемадсорбции

Патологические изменения в организме подопытного животного

Серологичнеские реакции (РСК, ИФМ, ін. )

Реакции нейтрализации

ДНК, РНК - гибридизация