2006_-Byelorussian_Pharmacopoeia_Volume_1

В нижеописанном методе предполагается использование мембран диамет-

ром около 50 мм. При использовании фильтров других диаметров объемы разве- дений и промывок должны быть изменены соответствующим образом. Аппарат

для фильтрации и мембрану стерилизуют подходящим способом. Конструкция ап-

парата должна обеспечивать введение и фильтрацию испытуемого раствора в

асептических условиях, извлечение мембраны для ее переноса в питательную среду или проведение инкубации после помещения питательной среды в аппарат.

Водные растворы. Небольшое количество подходящего стерильного рас- творителя, не подавляющего рост микроорганизмов, например, нейтрального рас- твора мясного или казеинового пептона концентрацией 1 г/л (рН 7,1 ± 0,2), поме- щают на мембрану аппарата и фильтруют. Растворитель может содержать подхо-

дящие нейтрализующие и/или инактивирующие вещества, например, в случае ан- тибиотиков.

Содержимое контейнера или контейнеров, подлежащих испытанию, пере- носят на мембрану (мембраны), при необходимости, после разбавления до объе- ма, используемого в испытании на пригодность, избранным стерильным раство-

рителем; в любом случае, используют количества испытуемого продукта не менее указанных в Таблице 2.6.1.-2. Немедленно фильтруют. Если испытуемый раствор обладает антимикробными свойствами, мембрану не менее трех раз промывают

путем пропускания через нее каждый раз объема выбранного стерильного рас-

творителя, указанного в испытании на пригодность. В процессе промывки объем

не должен превышать 5×200 мл, даже если при проверке пригодности было пока-

зано, что такая промывка не полностью исключает антимикробную активность.

Мембрану целиком переносят в питательную среду или в асептических условиях делят ее на две равные части, каждую из которых помещают в две подходящие среды. Используют такие же объемы питательных сред, как и в испытании на при- годность. Кроме того, среда может быть нанесена на мембрану в аппарате. Среды инкубируют в течение не менее 14 дней.

Таблица 2.6.1.-2

Минимальные количества тестируемого продукта, используемые для каждой пи-

тательной среды

	Минимальное количество, которое
Количество в контейнере	следует использовать для посева на
	каждую среду, если не обосновано и
	разрешено использование других ко-
	личеств
Для жидкостей
Менее 1 мл	Все содержимое каждого контейнера
1 – 40 мл	Половина содержимого каждого кон-
	тейнера, но не менее 1 мл
Более 40 мл, но не более 100 мл	20 мл
Более 100 мл	10% содержимого контейнера, но не
	менее 20 мл
Для жидкостей, содержащих антибиоти-	1 мл
ки
Для других препаратов, растворимых в	Все содержимое каждого контейнера,
воде или в изопропилмиристате	составляющее не менее 200 мг
Нерастворимые препараты, кремы и ма-	Все содержимое каждого контейнера,
зи, подлежащие суспендированию или	составляющее не менее 200 мг
эмульгации
Для твердых веществ
Менее 50 мг	Все содержимое каждого контейнера
50 мг и более, но менее 300 мг	Половина содержимого каждого кон-
	тейнера, но не менее 50 мг
От 300 мг до 5 г	150 мг
Более 5 г	500 мг

Твердые растворимые препараты. Для каждой среды используют количе-

ство продукта, растворенного в подходящем растворителе, например, растворе натрия хлорида 0,9% или нейтральном растворе мясного или казеинового пептона

концентрацией 1 г/л, не менее указанного в Таблице 2.6.1.-2, и продолжают испы-

тание по методике, описанной выше для водных растворов, с использованием мембраны, соответствующей выбранному растворителю.

Масла и масляные растворы. Для каждой среды используют количество продукта не менее указанного в Таблице 2.6.1.-2. Масла и масляные растворы,

обладающие достаточно низкой вязкостью, могут быть подвергнуты фильтрова-

нию через сухую мембрану без разбавления. Вязкие масла могут быть при необ- ходимости разбавлены подходящим стерильным растворителем, для которого по-

казано отсутствие антимикробной активности в условиях испытания, например, изопропилмиристатом. Дают маслу проникнуть в мембрану под действием собст-

венной тяжести, затем фильтруют, постепенно увеличивая давление или вакуум. Мембрану промывают путем фильтрования не менее трех порций по 100 мл под-

ходящего стерильного растворителя, например, нейтрального раствора мясного или казеинового пептона концентрацией 1 г/л, содержащего подходящий эмульга- тор в концентрации, приемлемость которой была подтверждена в ходе испытания на пригодность, например, 10 г/л полисорбата 80. Мембрану или мембраны пере- носят в питательную среду или среды (или наоборот) в соответствии с указания-

ми, приведенными выше для водных растворов, и инкубируют при таких же тем-

пературах в течение тех же промежутков времени.

Мази и кремы. Для каждой среды используют количество продукта, не ме-

нее указанного в Таблице 2.6.1.-2. Мази на жирной основе и водно-масляные эмульсии могут быть разбавлены до содержания 1% изопропилмиристатом, как

описано выше, при необходимости, при нагревании до температуры, не превы- шающей 400С. В исключительных случаях может оказаться необходимым нагрев до температуры, не превышающей 440С. Фильтруют насколько возможно быстро и продолжают испытание в соответствии с указаниями, приведенными выше для

масел и масляных растворов.

Прямая инокуляция питательной среды. Количество испытуемого препа-

рата, предписанное в таблице 2.6.1.-2, помещают непосредственно в питательную среду. При этом объем продукта должен составлять не более 10% объема среды,

если не предписано иное.

Если испытуемый продукт обладает антимикробной активностью, испыта-

ния выполняют после нейтрализации подходящим нейтрализующим агентом или путем разбавления в достаточном количестве питательной среды. При необходи-

мости использования большого объема продукта предпочтительнее использовать

концентрированную питательную среду, приготовленную с учетом последующего

разбавления. Если это удобно, концентрированная среда может быть добавлена

непосредственно к продукту в контейнере.

Масляные жидкости. Используют среды с добавкой подходящего эмульга-

тора в концентрации, приемлемость которой была подтверждена в ходе испыта-

ния на пригодность, например, 10 г/л полисорбата 80.

Мази и кремы. Готовят разбавлением в соотношении около 1:10 путем эмульгирования с использованием избранного эмульгатора в подходящем сте- рильном растворителе, например, растворе мясного или казеинового пептона концентрацией 1 г/л. Разбавленный продукт переносят в среду, не содержащую эмульгатора.

Инокулированную среду инкубируют в течение не менее 14 дней. Состоя-

ние культур оценивают несколько раз в течение инкубационного периода. Иноку- лированные среды, содержащие масляные продукты, ежедневно осторожно

встряхивают. Однако, при использовании тиогликолевой или другой аналогичной

среды для определения анаэробных микроорганизмов, встряхивание или пере- мешивание сводят к минимуму для поддержания анаэробных условий.

НАБЛЮДЕНИЕ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

Время от времени в течение периода инкубации, а также по его завершении

оценивают наличие макроскопических признаков микробного роста в средах. Если внесение испытуемого материала приводит к помутнению питательной среды,

вследствие чего наличие или отсутствие микробного роста не может быть легко определено визуально, следует через 14 дней после начала инкубации перенести

порции среды (каждая объемом не менее 1 мл) в другие сосуды, содержащие

свежую аналогичную среду и инкубировать исходные сосуды и сосуды с перене- сенными порциями в течение 4 дней.

Если признаков микробного роста не обнаруживается, то продукт признают выдерживающим испытание на стерильность. При наличии признаков микробного

роста продукт не выдерживает испытание на стерильность, если не может быть

показано путем повторного испытания или другим способом, что результаты ис-

пытания не являются достоверными по причинам, не связанным с испытуемым продуктом. Результаты испытания могут быть признаны недостоверными лишь

при выполнении не менее одного из нижеперечисленных условий:

a) данные микробиологического мониторинга зоны проверки стерильности указы-

вают на произошедшие сбои,

б) проверка методики, используемой в данном испытании, привела к обнаружению недочетов,

в) в отрицательном контроле был обнаружен микробный рост,

г) после установления типа микроорганизмов, выделенных в ходе испытания, рост этого штамма (этих штаммов) может быть однозначно приписан ошибкам, вноси-

мым материалами и/или методиками, используемыми при проведении испытания.

Если результаты испытания признаны недостоверными, испытание повто-

ряют, используя то же количество образцов, что и в первоначальном тесте.

Если признаков микробного роста в ходе повторного испытания не обнару-

живается, то продукт признают выдерживающим испытание на стерильность. Ес- ли в ходе повторного испытания обнаруживается рост, то продукт не выдерживает

испытание на стерильность.

ПРИМЕНЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ К ПАРЕНТЕРАЛЬНЫМ ПРЕПАРАТАМ, ОФТАЛЬМО-

ЛОГИЧЕСКИМ И ДРУГИМ НЕИНЪЕКЦИОННЫМ ПРЕПАРАТАМ, ДЛЯ КОТОРЫХ

ТРЕБУЕТСЯ ВЫПОЛНЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ НА СТЕРИЛЬНОСТЬ

При использовании метода мембранной фильтрации используют, где это

возможно, все содержимое контейнера, но не менее количеств, указанных в Таб- лице 2.6.1.-2, при необходимости разбавляя приблизительно до 100 мл подходя- щим стерильным раствором, например, нейтральным раствором мясного или ка- зеинового пептона концентрацией 1 г/л.

При использовании метода прямой инокуляции питательной среды исполь- зуют количества, указанные в Таблице 2.6.1.-2, если не оправдано и не разрешено

применение других количеств. Испытания на стерильность в отношении бактерий

и грибов выполняют на одном и том же образце испытуемого продукта. В случа- ях, когда объем или количество, содержащиеся в контейнере, являются недоста-

точными для проведения испытаний, для инокуляции различных сред используют

содержимое двух или более контейнеров.

Таблица 2.6.1.-3

Минимальное количество испытуемых единиц

Количество единиц в партии	Минимальное	количество
	тестируемых	единиц для
	каждой среды, если не
	обосновано и	разрешено
	иное*
Парентеральные препараты
Не более 100 контейнеров	10%, но не менее 4 кон-
	тейнеров

Более 100, но не более 500 контейнеров	10 контейнеров
Более 500 контейнеров	2%, но не более 20 кон-
	тейнеров
Офтальмологические и другие неинъекционные
препараты
Не более 200 контейнеров	5%, но не менее 2 контей-
	неров
Более 200 контейнеров	10 контейнеров
В случаях, когда продукция представлена в форме
контейнеров, содержащих одну дозу, применяют
указанную выше схему для парентеральных препа-
ратов
Большие объемы твердых субстанций
До 4 контейнеров	Каждый контейнер
Более 4, но не более 50 контейнеров	20%, но не менее 4 кон-
	тейнеров
Более 50 контейнеров	2%, но не менее 10 кон-
	тейнеров
Большие упаковки антибиотиков (более 5 г)	6 контейнеров

* Если содержимого одного контейнера достаточно для инокуляции двух сред, то в данной колонке дано количество контейнеров, необходимое для обеих сред.

УКАЗАНИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ ИСПЫТАНИЯ НА СТЕРИЛЬНОСТЬ

Цель испытания на стерильность, как и всех фармакопейных испытаний, за-

ключается в предоставлении независимым аналитикам средств проверки соот-

ветствия данного материала требованиям Фармакопеи. Производителю не вме-

няется в обязанность проводить такие испытания и не запрещается использовать модификации установленного метода или альтернативные методы при условии, что данная продукция будет соответствовать требованиям Фармакопеи при про- ведении испытания с использованием официального метода.

Условия проведения испытаний. Асептические условия проведения ис-

пытания могут быть достигнуты, например, использованием камеры с ламинар- ным потоком воздуха класса А, расположенной в чистом помещении класса В, или

с помощью изолятора.

Руководство для производителей. Уровень достоверности, подтвер-

ждаемый удовлетворительным результатом испытания на стерильность (отсутст- вие загрязняющих единиц в образце), в отношении к качеству партии зависит от

ее однородности, условий производства и эффективности принятого плана отбора проб. Для целей данного описания партия определяется как однородный набор запечатанных контейнеров, приготовленных таким образом, чтобы риск микробно- го загрязнения был одинаковым для каждой единицы.

Для продукции, стерилизуемой на последней стадии производства, биоло-

гически обоснованные и автоматически документированные фактические доказа-

тельства правильного протекания процесса стерилизации для всей партии дают

большую гарантию, по сравнению с испытанием на стерильность. Обстоятельст-

ва, при которых допустим параметрический выпуск серии, описаны в разделе

«Методы приготовления стерильной продукции» (5.1.1). Для подтверждения асеп- тических условий производства может применяться метод наполнения питатель-

ными средами. За исключением этих ситуаций, испытание на стерильность явля- ется единственным аналитическим методом для продукции, производство которой

осуществляется в асептических условиях.

Вероятность определения наличия микроорганизмов в ходе испытания на стерильность возрастает с увеличением их количества в испытуемом образце и варьируется в зависимости от способности к росту имеющихся микроорганизмов.

Вероятность обнаружения очень низких уровней микробного загрязнения, даже если оно в пределах партии является однородным, весьма мала. Интерпретация

результатов испытания на стерильность основывается на предположении, что со- держимое любого контейнера в партии, если он будет подвергнут испытанию,

даст одинаковый результат. Поскольку очевидно, что каждый контейнер не может быть подвергнут испытанию, следует использовать соответствующий план отбора

проб. В случае асептического производства рекомендуется отбирать образцы в начале и в конце выпущенной партии, а также после существенного вмешатель- ства в технологический процесс.

Руководство, касающееся минимального рекомендуемого количества об- разцов, отбираемых для проведения испытания, в зависимости от размера пар-

тии, приведено в таблице 2.1.6.-3. При использовании этих рекомендаций следует учитывать объем препарата в контейнере, валидацию метода стерилизации и лю-

бые другие особые условия, касающиеся планируемой стерильности продукции.

Наблюдение и интерпретация результатов. Общепринятые микробиоло-

гические и биохимические методы в общем случае являются удовлетворительны- ми для идентификации микроорганизмов, выделяемых в ходе испытания на сте- рильность. Однако, если производитель желает использовать лишь критерий (d) для признания результатов испытания на стерильность недостоверными, может

оказаться необходимым использование чувствительных методов классификации

для демонстрации идентичности микроорганизма, выделенного при испытании

продукции, – микроорганизму, выделенному из материалов и окружающей обста- новки. Хотя с помощью рутинных микробиологических и биохимических методов

может быть показано, что два изолированных штамма не являются идентичными,

эти методы могут быть недостаточно чувствительными и надежными для получе- ния однозначного доказательства того, что два штамма имеют один и тот же ис- точник. Для определения того, что микроорганизмы имеют общее происхождение

и клонально связаны, может оказаться необходимым использование более чувст- вительных тестов, например, молекулярной классификации по гомологии

РНК/ДНК.

2.6.2. МИКОБАКТЕРИИ

Если испытуемый образец может содержать микроорганизмы, отличные от микобактерий, его обрабатывают подходящим деконтаминирующим раствором, например, раствором ацетилцистеина и гидроксида натрия или раствором натрия лаурилсульфата.

На каждую из двух подходящих твердых питательных сред (например, сре- да Лёвенштейна-Йенсена или среда Миддлбрук 7Н10) наносят по 0,2 мл образца.

Эксперимент выполняют в трех повторностях. В подходящую жидкую питательную

среду также в трех повторностях вносят по 0,5 мл образца. Все среды инкубируют при 370С в течение 56 дней.

Устанавливают способность среды к обеспечению роста в присутствии ис- пытуемого продукта путем инокуляции подходящего штамма семейства Mycobacterium, например, BCG, и, при необходимости, используют подходящий нейтрали- зующий агент.

Если в течение первых восьми дней инкубации наблюдается развитие по- сторонних микроорганизмов, испытание повторяют с одновременным проведени-

ем испытания на бактериологическую стерильность.

Продукт выдерживает испытание, если в конце инкубационного периода ни

в одной из пробирок не наблюдается роста микобактерий.

2.6.3. ИСПЫТАНИЯ НА ПОСТОРОННИЕ ВИРУСЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ КУРИНЫХ ЭМБРИОНОВ

Используют жидкую вакцину или восстанавливают подлежащее испытанию

количество вакцины, высушенной из замороженного состояния, применяя указан- ную на этикетке или другую подходящую жидкость, содержащую в каждом случае соответствующие антибиотики. Если это предписано в частной статье, нейтрали- зуют моноспецифической антисывороткой. При необходимости разбавляют таким

образом, чтобы 0,2 мл смеси содержали 10 доз вакцины. Смесь прививают двум

группам по 10 куриных эмбрионов возрастом от 9 до 11 дней, полученных из групп, не содержащих указанных патогенов:

-0,2 мл в аллантоисную полость каждого из яиц первой группы,

-0,2 мл на хориоаллантоисную мембрану каждого из яиц второй группы.

Втечение 7 дней ежедневно состояние яиц оценивают визуально путем просвечивания. Эмбрионы, погибающие в течение первых 24 часов, не учитыва- ют, считая, что их гибель вызвана неспецифическими причинами: результаты ис- пытания считают достоверными при условии, что не менее 6 эмбрионов из каждой группы выживают в течение более 24 часов после прививки. Все эмбрионы, по-

гибшие более чем через 24 часа после прививки, а также выжившие в течение 7

дней, проверяют на наличие аномалий. Проверяют также хориоаллантоисные мембраны на наличие аномалий, аллантоисные жидкости – на наличие гемагглю- тинирующих агентов, а клетки, отделяемые путем центрифугирования от аллан- тоисных жидкостей, – на наличие вируса инфекционного бронхита с использова-

нием метода флуоресцирующих антител. Выполняют дополнительный экспери-

мент с эмбрионами. По отдельности отбирают образцы материала из живых и по- гибших эмбрионов и прививают каждый из образцов 10 эмбрионам каждым из

вышеописанных методов. При этом материал хориоаллантоисных мембран дол-

жен наноситься на хориоаллантоисные мембраны, а аллантоисная жидкость должна вводиться в аллантоисную полость. Яйца наблюдают в течение 7 дней и

оценивают их состояние в соответствии с вышеприведенными указаниями. В слу- чае, если вакцина приводит к гибели или ненормальному развитию, она не вы- держивает испытание.

2.6.4. ИСПЫТАНИЕ НА ВИРУСЫ ЛЕЙКОЗА

Если это предписано в частной статье, вакцину нейтрализуют моноспеци-

фической антисывороткой. Вакцину в количестве 10 доз прививают культуре фиб- робластов куриных эмбрионов, поддерживающей рост подгрупп А и В вируса лей-

коза. Культуры должны состоять не менее, чем из пяти повторов, площадь каждо- го из которых составляет не менее 60 см2. Субкультивирование фибробластов производят с интервалами от 3 до 4 дней; весь период поддерживания составляет не менее 9 дней. В конце последнего периода клетки собирают, ресуспендируют,

получая концентрацию 107 клеток в миллилитре, и готовят экстракт. Для каждого из экстрактов проводят испытание на связывание комплемента для групп-

специфического антигена птичьего лейкоза. Параллельно проводят испытание для контрольных групп с привитым вирусом лейкоза подгрупп А и В. Если обнару-

живаются любые свидетельства наличия вируса лейкоза, вакцина не выдержива- ет испытание. Если результаты не позволяют сделать определенный вывод, про-

водят дальнейшее субкультивирование фибробластов и продолжают испытание до получения однозначного результата.

2.6.5. ИСПЫТАНИЕ НА ПОСТОРОННИЕ ВИРУСЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУР

Используют жидкую вакцину или восстанавливают подлежащее испытанию количество вакцины, высушенной из замороженного состояния, применяя указан-

ную на этикетке или другую подходящую жидкость. Если это предписано в частной

статье, вакцину нейтрализуют моноспецифической антисывороткой. При необхо- димости разбавляют таким образом, чтобы 0,1 мл смеси содержали 10 доз вакци- ны. 0,5 мл смеси прививают культурам, полученным из куриных почек или печени куриных эмбрионов. Культуры выделяют из групп, не содержащих указанных пато- генов. Выдерживают для адсорбции в течение 1 часа при 370С. Культуры должны состоять не менее, чем из пяти повторов, и иметь общую площадь не менее 150

см2. Культуры наблюдают в течение не менее 5 дней, отмечая наличие любых

специфических цитопатических эффектов, вызываемых вакциной. Если специфи- ческих эффектов не наблюдается, выполняют дополнительные испытания с клет-

ками и жидкостями, отобранными из всех культур с интервалами не менее 5 дней,

и проводят наблюдение в течение инкубационного периода, составляющего 20 дней. Конечные культуры испытывают также на наличие гемадсорбирующих аген- тов с использованием куриных эритроцитов. Гемадсорбирующие агенты пред- ставляют собой микроорганизмы или вирусы, вызывающие адсорбцию эритроци- тов на поверхности клеточных культур, на которых происходит их репликация. Ге- мадсорбцию можно наблюдать следующим образом: в конце периода испытания к отделенным и промытым монослоям клеточной культуры добавляют 0,5% суспен-

зии промытых эритроцитов. По окончании периода адсорбции (20 минут при 40С) монослой осторожно промывают раствором хлорида натрия в фосфатном буфе-

ре рН 7,4 R и изучают под микроскопом. При наличии гемадсорбции на монослоях клеток наблюдаются скопления эритроцитов. Результаты испытания достоверны,

если не менее 80% культур выживают после каждого посева. Вакцина не выдер- живает испытание, если наблюдаются любые цитопатические эффекты или обна- руживается наличие гемадсорбирующих агентов.

2.6.6. ИСПЫТАНИЕ НА ПОСТОРОННИЕ АГЕНТЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЦЫПЛЯТ.

Если в частной статье нет иных указаний, испытание проводят не менее, чем на 10 цыплятах двухнедельного возраста, отобранных из групп, не содержа-

щих специфических патогенов. Каждому из цыплят делают прививку в количестве 100 доз внутримышечно и 10 доз путем закапывания в глаза. Через две недели прививки повторяют. Птиц наблюдают в течение пяти недель со дня первой при-

вивки. В течение периода наблюдения птицам не вводятся антимикробные аген- ты.

Проводят отбор сыворотки у каждого из цыплят перед первой прививкой и в конце испытания. Каждую из сывороток исследуют соответствующим методом. Определяют наличие антител против нижеперечисленных инфекционных агентов,

за исключением антител против вируса, из которого была изготовлена вакцина. Вакцина не выдерживает испытания при наличии любых доказательств присутст-

вия посторонних агентов. Результаты испытания недостоверны при обнаружении любых антител до прививки. В таком случае испытание повторяют. Результаты испытания также недостоверны, если к его концу выживает менее 80% животных.

По согласованию с компетентными органами могут применяться и другие методы испытания при условии их соответствующей специфичности и чувствительности, не меньшей по сравнению с чувствительностью нижеуказанных методов.

Инфекция	Тип испытания
Инфекционный бронхит(1)	Агаровый гель – преципитин
	или ингибирование гемагглютинации
Инфекционный бурсит (болезнь	Агаровый гель – преципитин
Гумборо)
Болезнь Марека	Агаровый гель – преципитин
Болезнь Ньюкасла	Ингибирование гемагглютинации
Инфекции, вызываемые Salmo-	Агглютинация
nella pullorum
Аденовирусные инфекции(2)	Агаровый гель – преципитин
Инфекции, вызываемые виру-	Агаровый гель – преципитин
сом птичьей энцефалопатии	или твердофазное иммуноферментное опреде-
Реовирусные инфекции(2)	ление (ELISA)
	Агаровый гель – преципитин
Инфекции, вызываемые виру-	Нейтрализация сыворотки
сом лейкоза(2)
Грипп А(2)	Агаровый гель – преципитин
Инфекционный ларинготрахе-	Нейтрализация сыворотки
ит(2)

(1)По согласованию с компетентными органами, при рутинных испытаниях партий

продукции данное испытание может не выполняться, если для каждой партии вы-

полнено испытание на посторонние вирусы с использованием оплодотворенных

яиц (2.6.3).

(2)По согласованию с компетентными органами, при рутинных испытаниях партий

продукции данное испытание может не выполняться, за исключением случаев, ко- гда это требуется в соответствии с указаниями в частной статье.

2.6.7. МИКОПЛАЗМЫ

Если испытание на микоплазмы предписано для основного или рабочего

клеточного банка, для посевной партии вирусов или для контрольных клеток, при- меняют как метод культивирования, так и метод индикаторной клеточной культу-

ры. Если испытание предписано для вирусного сбора, большого количества вак- цины или готовой партии продукции, применяют метод культивирования. Метод индикаторной клеточной культуры может при необходимости также использовать- ся для контроля сред.

МЕТОД КУЛЬТИВИРОВАНИЯ

ВЫБОР ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ

Испытание выполняют с использованием достаточного количества как твердых, так и жидких питательных сред для того, чтобы в избранных условиях

инкубации был обеспечен рост небольшого количества микоплазм, которые могут

присутствовать в испытуемом продукте. Жидкие среды должны содержать фено- ловый красный. Для ряда сред показано наличие удовлетворительных питатель- ных свойств, по крайней мере, для нижеперечисленных организмов. Для каждой новой партии среды должны быть подтверждены питательные свойства в отно- шении соответствующих организмов из списка.

Acholeplasma laidlawii (вакцины для медицинского и ветеринарного приме-

нения, в процессе производства которых используются антибиотики)

Mycoplasma gallisepticum (в случаях, когда для производства вакцин исполь-

зуются материалы, имеющие птичье происхождение или для вакцин, предназна-

ченных для применения в птицеводстве)

Mycoplasma hyorhinis (ветеринарные вакцины, кроме птичьих)

Mycoplasma orale (вакцины для медицинского и ветеринарного применения)

Mycoplasma pneumoniae (вакцины для медицинского применения) или дру- гие подходящие виды, связанные с ферментацией D-глюкозы

Mycoplasma synoviae (в случаях, когда для производства вакцин использу-

ются материалы, имеющие птичье происхождение или для вакцин, предназначен- ных для применения в птицеводстве).

Тест-штаммы представляют собой изоляты, подвергнутые не более, чем 15

пересевам, и хранящиеся в замороженном или лиофилизированном состоянии.

После клонирования принадлежность штамма к требуемому виду определяется

подходящим методом путем сравнения с типовыми культурами, например:

A. laidlawii	NCTC 10116	CIP 75.27	ATCC 23206
M. gallisepticum	NCTC 10115	CIP 104967	ATCC 19610
M. hyorhinis	NCTC 10130	CIP 104968	ATCC 17981
M. orale	NCTC 10112	CIP 104969	ATCC 23714
M. pneumoniae	NCTC 10119	CIP 103766	ATCC 15531
M. synoviae	NCTC 10124	CIP 104970	ATCC 25204