Материалы по коккам и энтеробактериям_2014

Гомельский государственный медицинский университет, кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии

		помутнение; на плотных – мелкие, нежные, прозрачные колонии вязкой консистенции.
	Ферментативная	Каталазоположительны, оксидазоположительны. Ферментируют глюкозу и мальтозу до
	активность	кислоты без газа.
		У менингококков различают четыре антигенные системы:
		1.	Капсульные полисахаридные антигены. По специфичности которых менингококки делятся
		на серогруппы: A, B, C, D, 29E, F, G, X, Y, W135, Z и др. Более 90% инфекций связано с
		группами A, B, C.
	Антигены	2.	Белковые антигены наружной мембраны – разделены на 5 классов. Белки классов 2 и 3
		определяют серотипы, белки класса 1 – субтипы.
		3.	Белковый антиген, общий для всего вида.
		4.	Липополисахаридные антигены.

В соответствии с этим антигенная формула менингококков имеет следующий вид: серогруппа: серотип по белку: субтип по белку: серотип по ЛПС.

Структурные: капсула – защита от фагоцитоза, реснички и белки наружной мембраны – Факторы факторы адгезии и колонизации; Эндотоксин – обладает пирогенным, некротическим и патогености летальным действием. Ферменты агрессии: гиалуронидаза., нейраминидаза, -

фибринолизин, - протеаза – разрушает IgAs

Менингококки вегетируют на слизистой оболочке носоглотки человека – носителя. Во внешней среде быстро погибают, так как чувствительны к высушиванию, охлаждению,

Экология и дезинфектантам. Единственный источник инфекции – человек (больной или распространение микробоноситель). Механизм передачи – воздушно-капельный. У большинства

заразившихся заболевание не возникает. У 10% развивается картина острого назофарингита, а у отдельных лиц – генерализованные формы инфекции: менингококкемия и /или менингит.

Исследуемый материал: слизь из носоглотки и зева (носительство), кровь (сепсис), ликвор (менингит).

I. Бактериоскопический метод. Микроскопия мазков, окрашенных по Граму.

В мазках грамотрицательные кокки бобовидной формы, расположены попарно, интра и экстрацеллюлярно.

II. Бактериологический метод. 1. Посев на специальные среды с добавлением сыворотки крови, асцитической жидкости и антибиотика ристомицина (задерживает рост сопутствующей микрофлоры)

2.Культивирование в атмосфере 5 – 8% СО2 48 ч. при t = 370С.

3.Отбор прозрачных, голубоватых колоний и постановка диагностических тестов: оксидаза

(+), каталаза (+).

	Лабораторная	4.	Откол подозрительных колоний на сывороточный или асцит – агар (рост); на МПА (нет
	диагностика	роста).
		5.	Определение биохимических свойств в пестром ряду Гисса – ферментация глюкозы (К+) и
		мальтозы (К+).
		6.	Определение антибиотикограммы.
		7.	Серотипирование: - РА с типоспецифическими сыворотками против 4 основных A, B, C,
		D и нескольких дополнительных E, F, G серогрупп; - РП; - РНГА с антительными
		эритроцитными диагностикумами.
		III. Экспресс – диагностика. Обнаружение менингококковых антигенов в ликворе
		постановкой реакций преципитации в агаровом геле, методами ИЭФ, РИА со
		специфическими групповыми сыворотками. ПЦР (полимеразная цепная реакция).
		IV. Серологический метод. Постановка РНГА с эритроцитарными антигенными
		диагностикумами (содержат группоспецифические полисахаридные антигены).
	Иммунитет	Стойкий постинфекционный иммунитет обусловлен бактерицидными антителами и
		клетками иммунологической памяти.
	Специфическая	Менингококковая химическая вакцина, состоящая из высокоочищенных поли-сахаридных
	профилактика и	антигенов серогрупп A, C, Y, W135. Этиотропное лечение: пенициллин, хлорамфеникол, III
	терапия	поколение цефалоспоринов, рифампицин и др.

11

Гомельский государственный медицинский университет, кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА Занятие №17 Микробиологическая диагностика стафилококковых

инфекций

Возбудители Царство: Procaryota; Отдел: Firmicutes; Семейство: Micrococcaceae; Род: Staphylococcus;

Виды: Около 30 видов, преимущественное значение в патологии человека имеют виды S. aureus; S. epidermidis; S. saprophyticus.

Вызываемые заболевания гнойно-воспалительные процессы различной локализации, раневую инфекцию, пищевые интоксикации, сепсис, внутрибольничные инфекции.

Исследуемый материал гной, слизь, мокрота, кровь, моча, спинномозговая жидкость (ликвор) и др.

Бактериоскопический метод

Staphylococcus aureus (чистая культура)

Окраска по Граму Увеличение 7х90= 630

Бактериологический метод диагностики

Характер роста стафилококка на питательных средах неприхотливы, галлофилы – растут при NaCl ; до 15%

Питательная среда	Характер роста
Простой бульон, простой агар	Диффузное помутнение, круглые, 2 – 4 мм диаметром, пигментированные колонии
	(золотистые, белые, лимонно-желтые)
Солевой бульон, солевой агар	То же ,в присутствии 10% соли растут только стафилококки – селективная среда
ЖСА (2% желтка, 10% соли)	колонии с радужным ореолом у лецитовителазаположительных S.aureus.
КА (ПА +10% крови)	– колонии с зоной полного гемолиза (β-гемолиз у S. aureus

Факторы вирулентности стафилококков микрокапсула, белок А (связывает IgG), ферменты агрессии : плазмокоагулаза, лецитиназа, гиалуронидаза , дНК-аза, протеаза, фосфатаза ;гемолизины, энтеротоксины А-F.

Идентификация видов стафилококков (заполнить таблицу)

Виды

Плазмокоагулаза

Ферментацияглюкозыиманнита

Окисление

ДНК-аза

Лецитиназа

ванаэробныхусловиях

маннита

S. aureus

+

Гл К+; маннит К+

+

+

+

S. epidermidis

-

Гл -; маннит-

-

-

-

S. saprophyticus

-

Гл -; маннит±

±

-

-

Определение антибиотикорезистентности

Название метода Диско-диффузионный метод Исследуемый материал Чистая культура стафилококка

Антибиотик

Интерпретация результатов МУК РФ 2004

Результат

Вывод

зоны задержки роста (мм)

(измерить)

Устойчивый

Промежуточный

Чувствительный

Диаметр

(R)

( I)

(S)

зоны (мм)

Оксациллин

≤ 10

11-12

≥13

Эритромицин

≤13

14-22

≥23

Ко-тримоксазол

≤10

11-15

≥16

Клиндамицин

≤14

15-20

≥21

Ципрофлоксацин

≤15

16-20

≥21

Фаготипирование стафилококков набором из 22 бактериофагов Цель постановки поиск источника инфекции при пищевых отравлениях или внутрибольничных инфекциях

Принцип метода снован на штаммоспецифичности фагов. на штаммы S.aureus, посеянные газоном, нанесены капли 21 стафилококковых фагов для определения - фаготипа по зонам лизиса. Разные фаготипы свидетельствуют о разных источниках заражения, одинаковые о едином источнике. (Например, совпадение фаготипа стафилококков, выделенных из послеоперационной раны и с поверхности хирургического инструмента или с рук хирурга указывает на источник инфекции.)

Учет результатов: Фаготип штамма № 1 S. aureus 3В/53/81; Фаготип штамма № 2 S. aureus 3В/42E/187

Заключение: Разные фаготипы свидетельствуют о разных источниках заражения

Микробиологическая диагностика стрептококковых инфекций

Возбудители Царство: Procaryota; Отдел: Firmicutes; Семейство: Streptococcaceae; Род: Streptococcus; Виды: группа А – S. pyogenes; группа В – S. agalactiae; группа С – S. equisimilis; группа D (энтерококки) – S. faecalis, S. faecium, группа G – S. anginosus. Нет группового антигена – S. salivarius, S. mitis, S. mutans, S. pneumoniae и др

12

Гомельский государственный медицинский университет, кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии

Вызываемые заболевания Патогенный вид S. pyogenes. Механизмы и пути передачи – воздушно-капельный и контактный : 1) ГСИ; 2) тонзиллит (ангина); 3) скарлатина; 4) рожа; 5) ревматизм; 6) гломерулонефрит.

Факторы вирулентности 1)О-стрептолизин разрушает мембраны эритроцитов, других клеток, кардиотоксическое действие. 2. Лейкоцидин.- Лизис полиморфноядерных лейкоцито 3) Цитотоксины. Нарушение белкового синтеза в клетках.

. Ферменты 1) Гиалуронидаза 2) Стрептокиназа (фибринолизин) 3) ДНК-аза 4) Протеиназа Капсула (стрептококки групп А и В). Перекрестно реагирующие антигены (ПРА) 1.Гиалуроновая кислота стрептококков сходна с тканью канальцев почек

Æ гломерулонефриты; Исследуемый материа: гной, слизь, мокрота, кровь, моча, ликвор и др.л

Бактериоскопический метод

Streptococcus pyogenes

(чистая культура) Окраска по Граму Увеличение 7х90= 630

Бактериологический метод Характер роста стрептококков на питательных средах

Питательные среды

Характер роста

Сахарный МПБ ( + 2% глюкозы)

придонный или пристеночный рост;

Кровяной МПА (указать типы

мелкие непигментированные колонии с зоной полного (β- гемолиз у S. pyogenes)

гемолиза)

гемолиза или неполного гемолиза(α- гемолиз у S.pneumoniae).

Видовая идентификация стрептококков

Свойства

Микроорганизмы

S.pyogenes

S.agalactiae

S.mutans

S.pneumoniae

Вид гемолиза на кровяном агаре

β

α,β

α

α

Тест лизиса желчью

–

–

–

+

Рост в бульоне с 6,5 % NaCl

–

+

–

–

CAMP-тест

–

+

–

–

PYR-тест

+

–

–

–

Чувствительность к бацитрацину

+

–

–

–

Чувствительность к оптохину

–

–

–

+

Антигенная дифференциация стрептококков

основана на разном

составе полисахарида

клеточной стенки (субстанции S).

Ленсфилд разделила их на 20 серологических групп, обозначаемых заглавными буквами латинского алфавита от А до V.

Проводится в реакциях: преципитации или латекс-агглютинации

Энтерококки

Виды группа D (энтерококки): S. faecalis, S. faecium,

Морфология типичные стрептококки, ранее называли фекальными стрептококками

Вызываемые заболевания гнойно-воспалительные, внутрибольничные инфекциии

Дифференцировка энтероккоков

Рост на ЖЩА

Обесцвечивание

Резистентность

Энтерококковая дифференциально-

(желчно-

метиленового-

к теллуриту

диагностическая среда

щелочной агар)

синего в молоке

калия

редукция

гемолиз

протеолиз*

ТТХ**

E. faecalis

+

+

+

+

+/-

+/-

E. faecium

+

+

-

-

+/-

-

**ТТХ – 2,3,5-трифенилтетразолия хлорид. При восстановлении ТТХ энтерококки дают рост на ЭДДС в виде вишневокрасных колоний с белым ободком.

*Протеолитически активные штаммы энтерококков на ЭДДС образуют вокруг колоний темно-красные или бурые зоны.

Микробиологическая диагностика пневмококковых инфекций

Возбудитель Нет группового антигена, S. pneumoniae

Вызываемые заболевания пневмонии ,гнойные менингиты, отиты, коньюктивиты, синуситы

Факторы вирулентности пневмококков: капсула,

Исследуемый материал_ гной, слизь, мокрота, кровь, моча, ликвор и др._

13

Гомельский государственный медицинский университет, кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии

Бактериоскопический метод

Микроскопия готовых препаратов Streptococcus pneumoniae	S. pneumoniae (в органах
S. pneumoniae (в мокроте)
Окраска по Граму	белых мышей)
	по Окраска по Граму
Увеличение 7х90= 630	Увеличение 7х90= 630
	капсулы
Учесть результаты посевов крови в сахарный МПБ
Мазок бульонной культуры	Результаты: в жидкой среде пневмококки
Окраска по Граму	образуют цепочки
Увеличение 7х90= 630

Микробиологическая диагностика менингококковой инфекции

Возбудитель Царство: Procaryota; Отдел: Gracilicutes; Семейство: Neisseriaceae; Род: Neisseria; Вид: Neisseria meningitidis

Факторы вирулентности Структурные:капсула – защита от фагоцитоза, реснички и белки наружной мембраны– факторы адгезии и колонизации;Эндотоксин–обладает пирогенным, некротическим и летальным действием.Ферменты агрессии: гиалуронидаза, нейраминидаза, фибринолизин, протеаза– разрушает IgA

Клинические формы менингококковой инфекции. У большинства заразившихся заболевание не возникает. У 10% развивается картина острого назофарингита, а у отдельных лиц – генерализованные формы инфекции: менингококкемия и /или менингит.

Исследуемый материал слизь из носоглотки и зева (носительство), кровь (сепсис), ликвор (менингит).

Бактериоскопический метод

N. meningitidis	N. meningitidis
	(вликворе)
(вликворе)	Окраска по Граму
Окраска метиленовым	Увеличение
синим	7х90= 630
Увеличение 7х90= 630

Бактериологический метод

Питательные среды и условия культивирования требовательны к питателным средам, используют среды с добавлением сыворотки крови, асцитической жидкости. Капнофилы - культивирование в атмосфере 5 – 8% СО2 48 часов при t = 370С.

Культуральные признаки на средах с добавлением сыворотки крови образуют прозрачные колонии, голубоватые в проходящем свете.

Биохимическая дифференциация менингококка и гонококка

Вид		глюкоза	мальтоза	лактоза	сахароза	каталаза	оксидаза
N.meningitidis	К+		К+	-	-	+	+
N.gonorrhoeae	К+		-	-	-	+	+

Серотипирование (реакции) агглютинации

Серодиагностика (реакции) агглютинации и непрямой (пассивной) агглютинации (РПГА)_

Микробиологическая диагностика гонококковой инфекции

Возбудитель

Царство: Procaryota; Отдел: Gracilicutes; Семейство: Neisseriaceae; Род: Neisseria; Вид: Neisseria gonorrhoeae

Клинические формы гонококковой инфекции : 1)инфекции нижних отделов мочеполового тракта; 2)инфекции верхних отделов мочеполового тракта;3)инфекции прочих органов и тканей: проктит, фарингит, бленнорея; 4)диссеминированная гонококковая инфекция.

Исследуемый материал: отделяемое из уретры, вагины, шейки матки, глаз, кровь, осадок мочи и др.

14

Гомельский государственный медицинский университет, кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии

Бактериоскопический метод

Neisseria gonorrhoeae

в гное уретры Окраска по Граму Увеличение 7х90= 630

Серодиагностика хронической гонореи в РСК

Бактериологический метод

Питательные среды и условия культивирования

требовательны к питательным средам, используют среды с добавлением сыворотки крови, шоколадный агар

Культуральные признаки на средах с добавлением сыворотки крови и шоколадном агаре образуют «мелкие, нежные, вязкие колонии («росинки»)

Исследуемый материал соскобы со слизистых или отделяемое мочеполовых органов
Диагностические препараты:
1 . Диагностическая сыворотка				содержит				антитела против гонококков
2. Сыворотка крови морской свинки								содержит комплемент
								содержит эритроциты барана
3. Гемолитическая система:
4.
		и гемолитическую сыворотку				содержащую антитела к эритроцитам барана
Результат реакции
		Больной		Опыт		Контроль гемолитической системы				Контроль сыворотки
А
			Гем+; РСК-			Гемолиз -				Гемолиз
В
			Гем-; РСК+			Гемолиз				Гемолиз

Вывод: пацинет А здоров, пациет В болен хронической гонореей

15

Гомельский государственный медицинский университет, кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии

ЗАНЯТИЕ № 18 ТЕМА: ЭНТЕРОБАКТЕРИИ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ

ДИАГНОСТИКА ЭШЕРИХИОЗОВ И БАКТЕРИАЛЬНОЙ ДИЗЕНТЕРИИ. УСЛОВНОПАТОГЕННЫЕ ЭНТЕРОБАКТЕРИИ.

Общая характеристика семейства Еnterobacteriaceae

Семейство Enterobacteriaceae является одним из самых обширных и включает наибольшее число патогенных для человека представителей. Местом обитания всех видов энтеробактерий является кишечник, откуда они выделяются во внешнюю среду. Энтеробактерии представляют собой грамотрицательные палочки средних размеров. Спор не образуют. По типу дыхания относятся к факультативным анаэробам. Подвижны благодаря перитрихиально расположенным жгутикам или неподвижны при их отсутствии. Хорошо растут на простых питательных средах. Все представители семейства Enterobacteriaceae обладают сахаролитической активностью – ферментируют углеводы до кислоты и газа или только до кислоты. Протеолитическая активность выражена слабо. В биохимическом отношении наиболее активна Escherichia coli, являющаяся представителем нормальной микрофлоры организма человека. Наименьшей ферментативной активностью обладают Shigella dysenteriae и Salmonella typhi.

Дифференцирующие признаки энтеробактерий на среде Клиглера:

Среда Клиглера содержит:

1.МПА (Мясо-пептонный агар -

мясопептонный бульон +агар-агар)

2.Глюкозу 1г/л

3.Лактозу 10 г/л

4.Индикатор рНфеноловый красный (в кислой среде желтеет)

5.Индикатор на Н2S (при выделении чернеет)

Г–;	Г–Кг;
Л-;	Л-Кг;
Н2S-	Н2S-

Исходная Эшерихия

Г–К;	Г–Кг;
Л -;	Л -;
Н2S-	Н2S+

Шигелла Сальмонелла

Принцип действия среды: ферментация глюкозы происходит только в анаэробных условиях в глубине среды (столбика) из-за ее малой концентрации. Ферментация лактозы происходит в аэробных условиях на поверхности среды (скоса). При этом цвет индикатора меняется на желтый (закисление среды). О продукции сероводорода узнаем по почернению среды.

					1.Эшерихии.
	Таксономия и	Царство: Procaryota; Отдел:			Gracilicutes; Семейство:Enterobacteriaceae; Род: Esherichia; Вид:
	классификация	Esherichia coli.
	Морфология и	Эшерихии палочки средних размеров. Грамотрицательны, большинство подвижны благодаря
	тинкториальные	перитрихиально расположенным жгутикам, но есть и неподвижные варианты. Спор не
	свойства	образуют. Некоторые штаммы имеют капсулу.
		Факультативные анаэробы. Растут при температуре от 10° до 46°С, оптимальная температура
		35 - 37°С. Хорошо растут на простых питательных средах образуя колонии средних размеров,
	Биологические	гладкие, влажные, блестящие, с ровным краем. На жидких средах вызывают равномерное
	свойства	помутнение, иногда с осадком или пленкой. В окружающей среде эшерихии устойчивы. При
		60°С погибают в течение 15 мин. В воде, почве сохраняют жизнеспособность в течение
		нескольких месяцев. Прямой солнечный свет вызывает гибель через несколько минут.
		Чувствительны к действию дезинфицирующих веществ.
		Эшерихии высоко активны – ферментируют углеводы,					в т.ч. лактозу, до кислоты и газа.
	Биохимические	Протеолитическая активность выражена слабо, могут продуцировать индол. Большинство
	свойства	эшерихий ферментирующие лактозу (лактозоположительны) поэтому на среде Эндо (МПА +
		лактоза + фуксин) образуют темно-красные колонии с металлическим блеском, не
		ферментирующие лактозу эшерихии, растут в виде бесцветных колоний.
		Сложная: соматический О-антиген, капсульный К-антиген и жгутиковый Н-антиген. О-антиген
	Антигенная	(171	разновидность)	определяет серологическую			группу.	Поверхностный	К-антиген
		представлен 3 вариантами – А, В и L. Они отличаются друг от друга по термоустойчивости.
	структура
		Самым термостабильным является А-антиген – он выдерживает кипячение в течение двух
		часов.	В-антиген выдерживает воздействие температуры 60°С					в течение часа.	L-антиген

16

Гомельский государственный медицинский университет, кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии

разрушается при нагревании до 60°С. К-антиген располагается более поверхностно, чем О- антиген, поэтому он может препятствовать агглютинации О-сыворотками. В этом случае О- антиген можно выявить только после разрушения К-антигена кипячением в течение двух часов. Типовой специфичностью обладает Н-антиген, по которому эшерихии делятся на серологические варианты (около 60).

По патогенности вид E. coli не является однородным. Различают:

1.непатогенные (резидентные) комменсалы, пожизненно колонизирующие толстый кишечник;

2.условно-патогенные – вызывают внекишечные поражения (цистит, сепсис); такие заболевания возникают, как правило, эндогенно за счет эшерихий, колонизирующих кишечник;

3.патогенные (диареегенные) эшерихии – вызывают острые кишечные инфекции (ОКИ), которые имеют экзогенное происхождение.

Условно-патогенные эшерихии входят в состав нормальной микрофлоры кишечника. Являются санитарно-показательными микроорганизмами (присутствие кишечной палочки в воде, почве, пищевых продуктах, предметах обихода свидетельствует о их фекальном загрязнении). Условно-патогенные эшерихии способны вызывать заболевания при проникновении в ткани вне пищеварительного тракта - в мочевыводящие и желчные пути, легкие, брюшину, мозговые оболочки, где возникает гнойно-воспалительный процесс, который нередко развивается на фоне иммунодефицита.

Патогенные E. сoli – возбудители ОКИ, получили название диареегенных. Они подразделяются на 4 основные категории:

1.энтеротоксигенные E. сoli (ETEC);

2.энтероинвазивные (EIEC);

3.энтеропатогенные (EPEC);

4.энтерогеморрагические (EHEC).

Патогенность Энтеротоксигенные эшерихии (ETEC). Серогруппы: О6, О8, О15, О20, О25, О27, О63, О78,

О80, О85, О115, О128ас, О139, О148, О153, О159, О167 являются возбудителями холероподобного заболевания у детей и взрослых, известного под названием «диарея путешественников». Кодируемые плазмидой термолабильный (LT) и термостабильный (ST) энтеротоксины нарушают водно-солевой обмен в кишечнике, приводя к развитию водянистой диареи. Клиническая картина инфекции сходна с холерой: водянистая диарея, тошнота, рвота, кишечные спазмы, небольшая лихорадка. В испражнениях примеси отсутствуют или обнаруживается небольшое количество слизи. Вспышки водные, пищевые. Сезонность летняя. Название «диарея путешественников» отражает факт частого возникновения данных инфекций у вновь прибывших в неблагополучный регион лиц, тогда как местное население постоянно контактируя с возбудителями (инфицированная вода, продукты) имеет иммунитет.

Энтероинвазивные эшерихии (EIEC). Серогруппы: О28ас, О29, О124, О136, О143, О144,

О152, О164, О167. Способны внедряться и размножаться в клетках эпителия нижнего отдела подвздошной и толстой кишки. Являются возбудителями дизентериеподобных заболеваний, характеризующихся непродолжительной водянистой диареей, развитием колитического синдрома, лихорадкой, токсикозом. В стуле возможна примесь крови, слизи, полиморфноядерных лейкоцитов. Обычно болеют дети в возрасте от 1,5 до 2 лет, но могут болеть и подростки, и взрослые. Сезонность летне-осенняя. Вспышки пищевые, водные. Заболевания нередко регистрируются как госпитальная инфекция, при этом доминирует E. сoli

О124.

Энтеропатогенные эшерихии (EPEC). Эта группа эшерихий включает 9 серогрупп класса 1:

О55, О86, О111, О119, О125, О126, О127, О128аb, О142 и четыре серогруппы класса 2: О18,

О44, О112, О114. Вирулентность этой группы эшерихий связана с белком наружной мембраны, получившим название интимин, его синтез детерминирован хромосомным геном, а также

17

Гомельский государственный медицинский университет, кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии

белком, синтез которого контролируется плазмидой 60 мДа. Некоторые серовары продуцируют шигаподобные токсины. ЕРЕС обладают способностью размножаться на поверхности эпителия тонкого кишечника, что приводит к разрушению микроворсинок и повреждению апикальной поверхности эпителия. Заболевание характеризуется продолжительной водянистой диареей, рвотой, лихорадкой, симптомами обезвоживания. Часто имеет место тяжелое, пролонгированное течение. В стуле обнаруживается примесь слизи. Инфекция передается преимущественно контактно-бытовым путем. Преимущественно болеют дети в возрасте до двух лет. Сезонность не выражена. Вспышки бытовые, редко пищевые. Часто регистрируются как внутрибольничные инфекции в отделениях для новорожденных и грудных детей, находящихся на искусственном вскармливании.

		Энтерогеморрагические эшерихии (EHEC). Серогруппы: О26, О111, О145, О157.
		Наибольшее эпидемиологическое значение имеет E. сoli серовара О157:Н.
		ЕНЕС способны к адгезии на поверхности клеток эпителия толстой кишки. Адгезия
		обусловлена пилями, детерминированными плазмидой размером 60 мДа. Эта плазмида, кроме
		этого, детерминирует синтез гемолизина, способствующего нарушению барьерной функции
		кишечника. Развитие геморрагического колита обусловлено способностью эшерихий данной
		группы продуцировать шигаподобные токсины (их синтез контролируется конвертирующими
		фагами). Поражаются слепая, восходящая и поперечная толстая кишка. Клинически
		заболевание проявляется колитическим синдромом,	отсутствием лихорадки.	В испражнениях
		наблюдается обилие крови, но без полиморфноядерных лейкоцитов. Около 5% больных
		погибает, у 12 – 30% возникают тяжелые осложнения, включая почечную недостаточность,
		гипертонию, поражение центральной нервной	системы. Сезонность	летне-осенняя.
		Поражаются все возрастные группы за исключением грудных детей.
	Экология и	Естественным местом обитания эшерихий является кишечник человека, животных,
		большинства птиц, многих пресмыкающихся, рыб, насекомых. Открыты в 1885 г. австрийским
	распространение
		педиатром Т. Эшерихом искавшим возбудителя «детской холеры».
		Гастроэнтерит новорожденных - тяжелое, часто смертельное заболевание. Диарея взрослых -
		от легких форм, сопровождающихся жидким стулом, недомоганием, до тяжелой
		холероподобной формы болезни. Эти заболевания встречаются повсеместно, однако чаще среди
	Эпидемиология,	некачественно питающихся групп населения. Источник инфекции человек, больной или
	патогенез и	носитель. Механизм передачи фекально-оральный, пути передачипищевой, водный, бытовой.
		Аутоинфекции. Инфекция мочевого тракта. Е. coli - самый распространенный возбудитель
	клиника
		воспаления мочевого пузыря (цистит), реже почек (пиелонефрит). Инфекция преимущественно
	заболевания
		восходящая - из уретры в мочевой пузырь и почечные лоханки. Штаммы, вызывающие эти
	(особенности)
		заболевания, отличаются по некоторым свойствам, например, по способности образовывать
		фимбрии, которые служат у них фактором адгезии. Бактериемия — тип генерализованного
		процесса, вызываемого E.coli. Иногда этот тип инфекции встречается при внутрибольничном
		заражении. Бактериемия может исходить из абсцессов в брюшной полости, мозге, костях.
		Основной метод диагностики – бактериологический. Исследуемый материал - гнойное
		отделяемое раны, моча, кровь, при кишечных инфекциях – фекалии. Материал засевают на
		среду Эндо. По морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам патогенные и
		непатогенные эшерихии не отличаются друг от друга, поэтому отбор подозрительных колоний
		проводят по антигенной структуре: на стекле ставят реакцию агглютинации с
		поливалентными адсорбированными коли-сыворотками и материалом из колоний. Если на
	Лабораторная	чашке вырастают колонии одного типа (на среде Эндо – малиново-красные, с металлическим
	диагностика	блеском), агглютинируют не менее 10 колоний. Если обнаруживаются колонии разных типов
		(малиново-красные без металлического блеска, темно-розовые и т.п.), то испытывают с
		помощью реакции агглютинации по 5 колоний каждого типа. Чистую культуру выделяют из
		колоний, давших положительную реакцию агглютинации с поливалентной коли-сывороткой.
		Идентификацию проводят путем изучения ферментативной активности и антигенной
		структуры. Определяют серологическую группу с живой и гретой культурой и О- и К-
		сыворотками. Для выявления О-антигена культуру эшерихий кипятят на водяной бане в
		течение 1 – 2 часов, что приводит к разрушению К-антигена.
	Иммунитет	Ненапряженный, типоспецифический.
	Профилактика и	Специфической профилактики нет. Основу неспецифической профилактики составляют
	терапия	санитарно-гигиенические и противоэпидемические мероприятия

18

Гомельский государственный медицинский университет, кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии

Таксономия и классификация

Морфология и тинкториальные свойства

Биологические

свойства

Биохимические

свойства

Антигенная структура

Патогенность

Эпидемиология, патогенез и клиника заболевания (особенности)

2. Шигеллы

Царство: Procaryota; Отдел: Gracilicutes; Семейство:Enterobacteriaceae; Род: Shigella;

Виды: . Sh. dysenteriae (13 сероваров); Sh. flexneri (6 сероваров); Sh. boydii (18 сероваров); Sh. sonnei.

Шигеллы представляют собой короткие неподвижные грамотрицательные палочки. Не образуют капсул и спор.

Факультативные анаэробы. Растут в широком диапазоне температур (от 10 до 45°С), оптимальная температура - 37°С, оптимальная рН 6,7 – 7,2. К составу питательных сред не требовательны. На плотных средах образуют мелкие (диаметром около 2 мм) гладкие, с ровными краями, выпуклые, блестящие, полупрозрачные колонии. На плотных дифференциально-диагностических средах с лактозой (Плоскирева, Эндо, Левина) колонии бесцветные. На жидких средах вызывают равномерное помутнение.

Шигеллы во влажной почве сохраняют жизнеспособность до трех месяцев, в воде – в течение 92 дней, в молоке – до скисания, в масле – в течение 8 – 10 дней. Sh. sonneiв молоке и молочных продуктах способны размножаться. Шигеллы хорошо переносят высушивание, низкие температуры (во льду сохраняются до 96 дней), но быстро погибают при действии прямого солнечного света, нагревании (при 60°С в течение 30 мин, при 100°С – моментально). Чувствительны к обычно используемым дезинфицирующим веществам.

Углеводы ферментируют до кислоты. Не ферментируют лактозу (за исключением Sh. sonnei, которая способна ферментировать лактозу замедленно, в течение 48 - 120 часов). Не продуцируют сероводород, не разжижают желатин. Могут образовывать индол.

Содержат соматический О- и капсульные К-антигены. В зависимости от осособенностей строения О-антигена делятся на 4 подгруппы или вида: подгруппа А – Sh. dysenteriae (13 сероваров); подгруппа В – Sh. flexneri (6 сероваров); подгруппа С – Sh. boydii (18 сероваров); подгруппа D – Sh. sonnei.

Факторы вирулентности. Шигеллы имеют факторы адгезии и колонизации: пили,

белки наружной мембраны, липополисахарид клеточной стенки. Адгезии и колонизации способствуют ферменты, разрушающие слизь, - нейраминидаза, гиалуронидаза, муциназа. Все виды шигелл обладают способностью к инвазии в клетки эпителия слизистой оболочки толстой кишки, межклеточному распространению и размножению в клетках. Эта способность определяется плазмидой инвазии, которая имеется у всех четырех видов шигелл. Шигеллы продуцируют токсин Шига и шигаподобные токсины. Токсин Шига продуцирует Sh. dysenteriae1 серовара, остальные – шигаподобные токсины. Это белковые токсины, состоящие из субъединиц А и В. Субъединица А, проникнув в клетку, взаимодействует с 60S-субъединицей рибосом, что приводит к нарушению синтеза белка. Токсин Шига обладает свойствами энтеротоксина, нейротоксина и сильного цитотоксина. Эндотоксин шигелл подавляет активность клеток иммунной памяти

Эпидемиология. Источником инфекции является только человек, больной острой или хронической дизентерией, либо являющийся бактерионосителем. Механизм передачи – фекально-оральный, пути: 1) алиментарный (преобладающий путь для шигелл Зоне); 2) водный (преобладающий для шигелл Флекснера); 3) контактно-бытовой (является ведущим для Sh. dysenteriaе).

Особенностью эпидемиологии дизентерии является смена видового состава возбудителей. До конца 30-х годов ХХ века на долю Sh. dysenteriae приходилось до 30 – 40% всех случаев заболеваний дизентерией, затем этот серовар стал встречаться все реже и почти исчез. Однако в 60 – 80-е годы Sh. dysenteriae1 серовара вновь появилась и вызвала серию эпидемий, которые привели к формированию трех гиперэндемических очагов ее – в Центральной Америке, Центральной Африке и Южной Азии.

Причины смены видового состава возбудителей дизентерии, по-видимому, связаны с изменением коллективного иммунитета и с изменением свойств дизентерийных бактерий. В частности, возвращение Sh. dysenteriaeI серовара и ее

19

Гомельский государственный медицинский университет, кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии

Лабораторная

диагностика

Иммунитет

Специфическая профилактика и терапия

широкое распространение связывают с приобретением ею плазмид, обусловивших множественную лекарственную устойчивость и повышенную вирулентность.

В настоящее время преобладают заболевания, вызванные Sh. Sonnei и Sh. flexneri. Естественная восприимчивость людей к дизентерии высокая. Дизентерия распространена повсеместно. Обычно заболевания возникают в виде вспышек алиментарного или водного характера. Чаще болеют дети до 10летнего возраста. Характерна летне-осенняя сезонность. Шигеллы поражают дистальные отделы толстого кишечника – сигмовидную и прямую кишку, вызывая дизентерию. Дизентерия (dysenteria) – острое инфекционное заболевание, которое клинически проявляется частым болезненным стулом с кроваво-слизистыми испражнениями и интоксикацией.

Патогенез. Шигеллы прикрепляются к М-клеткам, которые покрывают региональные лимфатические образования подслизистой кишечника. Через М- клетки шигеллы проникают в подслизистую оболочку, где поглощаются макрофагами. Взаимодействие шигелл с макрофагами приводит к гибели последних, следствием чего является выделение ИЛ-1 и ИЛ-18, которые вызывают острое воспаление в подслизистой с привлечением большого количества нейтрофилов. Гибель фагоцитов позволяет шигеллам сохранить жизнеспособность и проникать в эпителиальные клетки слизистой оболочки через базальную мембрану. Внутри энтероцитов шигеллы размножаются, проникают в соседние клетки, что приводит к появлению эрозий. В результате гибели шигелл происходит выделение токсина Шига, шигаподобных токсинов и эндотоксина, что приводит к появлению крови в испражнениях. Инкубационный период дизентерии колеблется от нескольких часов до трех – пяти дней. Постепенно или сразу развиваются явления острого колита. Характерны резкие, коликообразные боли в животе и частые, ложные, мучительные позывы к дефекации – тенезмы (до 20 – 30 раз в сутки). Испражнения становятся слизисто-водянистыми, с примесью слизи и гноя, а при более тяжелом течении дизентерии – крови, гноя и частиц слизистой кишечника. Заболевание продолжается 1 – 3 недели. Могут встречаться атипичные, стертые формы. Заболевания, вызванные Sh. sonnei, могут начинаться по типу пищевых токсикоинфекций. Примерно в 3% случаев заболевание переходит в хроническую форму, в 2% - формируется длительное бактерионосительство.

Основным методом диагностики является бактериологический. Исследуемым материалом служат испражнения, которые засевают на дифференциальнодиагностические питательные среды с лактозой (Плоскирева, Эндо, Левина). Для выделения чистой культуры отбирают лактозонегативные (бесцветные) колонии, которые пересевают на двусахарный агар (среда клиглера). В качестве вспомогательного используют серологический метод (РНГА).

После перенесенного заболевания формируется антимикробный и антитоксический иммунитет. Иммунитет вариантоспецифический, поэтому при заражении другими сероварами шигелл возможны повторные заболевания. Основную защитную роль играет местный иммунитет, в частности, большое значение имеет уровень секреторных IgA.

Профилактика неспецифическая. Включает комплекс санитарно-гигиенических и противоэпидемических мероприятий.

Антибиотики применяют после определения антибиотикограммы. Наиболее эффективными в настоящее время являются фторхинолоны. Целесообразность назначения антибактериальных химиопрепаратов определяется тяжестью заболевания. Для лечения может применяться дизентерийный бактериофаг. Фаг может использоваться и для экстренной профилактики. В случае возникновения дисбактериоза показано применение препаратов для коррекции микрофлоры.

20