Материалы по коккам и энтеробактериям_2014

Гомельский государственный медицинский университет, кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии

Таксономия и классификация

Морфология и тинкториальные свойства

Биологические

свойства

Биохимические

свойства

Антигенная структура

Патогенность

Эпидемиология, патогенез и клиника заболевания (особенности)

Лабораторная

диагностика

Иммунитет

Специфическая профилактика и терапия

3.Клебсиеллы

Царство: Procaryota; Отдел: Gracilicutes; Семейство:Enterobacteriaceae; Род: Klebsiella;

Виды: К. pneumoniae, К. oxytоca, К. granulomatis . Род получил название по имени Э.

Клебса, который впервые описал микроорганизм в 1875 г..

Неподвижные грамотрицательные палочки размером 0,3— 1,5x0,6—0,8 мкм, имеющие капсулу. Располагаются единично, парами или цепочками.

Благодаря наличию капсулы клебсиеллы хорошо сохраняются в окружающей среде. Их выделяют из воды, почвы, древесины, растений (в том числе сельскохозяйственных). Чувствительны к кипячению и дезинфектантам. К. pneumoniae входит в состав факультативной флоры кишечника, верхних дыхательных путей, влагалища. Обнаруживается на коже и слизистых оболочках.

Клебсиеллы биохимически активны и способны расщеплять лактозу, но не продуцируют сероводород. Дифференциация внутри рода на виды и разделение К. pneumoniae на подвиды производится на основе биохимических свойств. Клебсиелы способны утилизировать цитрат, малонат, расщеплять мочевину. В отличие от других видов, К. oxytica продуцирует индол.

Обладают О-антигеном (более 12 серогрупп) и полисахаридным капсульным антигеном (более 85 групп).

Полисахаридная капсула обеспечивает устойчивость к фагоцитозу и действию комплемента. Большинство клебсиелл имеют пили, продуцируют термостабильный и термолабильный энтеротоксины, а также ферменты патогенности: нейраминидазу, ДНКазу, фосфатазу.

Эпидемиология. К. pneumoniae подвид pneumoniae является возбудителем неспецифических инфекций дыхательных путей, органов мочевыводящей системы, пищевой токсикоинфекции. Особенно опасны штаммы, обладающие фактором множественной лекарственной устойчивости, так как они являются одними из ведущих возбудителей внутрибольничных инфекций, которые протекают с поражением дыхательных и мочевыводящих путей а также гнойных послеродовых осложнений и неонатальной инфекции новорожденных, которая протекает в виде пневмонии, кишечных расстройств и токсикосептических состояний, заканчивающихся летально.

Возбудитель подвида ozaenae вызывает озену — атрофический зловонный ринит. Клебсиелла подвида rhinoscleromatis вызывает риносклерому — хроническое деструктивно-грануломатозное заболевание носоглотки. К. oxytоca является возбудителем внутрибольничных инфекций в урологических клиниках. К. granulomatis является возбудителем донованоза — венерической паховой гранулемы, которая проявляется грануломатозными изъязвлениями на коже и в подкожной клетчатке. Заболевание передается половым, реже бытовым путем, для него характерна эндемичность распространения, в основном в странах тропического климата.

Основной метод бактериологический. За исключением вида К. granulomatis, который на искусственных питательных средах растет плохо, и его культивируют в желточном мешке куриного эмбриона, остальные виды клебсиелл нетребовательны к питательным средам. На жидких средах вызывают диффузное помутнение. На плотных образуют блестящие выпуклые слизистые колонии. Материал для исследования, выбор которого зависит от локализации инфекционного процесса, засевают на лактозосодержащие дифференциальные питательные среды с последующим выделением чистой культуры возбудителя и ее идентификацией до вида и подвида. При микроскопии легко выявляется капсула. Серологическая диагностика проводится постановкой РСК с О-антигенами. Диагностику донованоза проводят бактериоскопическим методом путем обнаружения телец Донована в мазках из биоптата гранулем, окрашенных по Романовскому—Гимзе. Гуморальный иммунитет протективными свойствами не обладает. Антитела являются свидетелями инфекционного процесса. Процесс выздоровления связан с активацией фагоцитоза.

Средств специфической профилактики не существует. Лечение проводят клебсиеллезным бактериофагом и антибиотиками под контролем антибиотикограмм.

21

Гомельский государственный медицинский университет, кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии

Таксономия и классификация

Морфология и тинкториальные свойства

Биологические свойства

Биохимические

свойства

Антигенная структура

Эпидемиология, патогенез и клиника заболевания (особенности)

Лабораторная

диагностика

Иммунитет

Специфическая профилактика и терапия

4. Протеи

Царство: Procaryota; Отдел: Gracilicutes; Семейство:Enterobacteriaceae; Род: Proteus;

Виды: 5 видов, из которых в патологии человека наибольшее значение имеют два: P. vulgaris и P. mirabilis, которые впервые были выделены Г. Хаузером из гниющего мяса в 1885 г. Название род получил в честь греческого бога Протея, способного принимать различные обличия.

Грамотрицательные палочки размером 0,4—0,6x1—3 мкм, располагающиеся попарно или цепочками, не образуют капсулу, подвижны.

Протеи обитают в почве, воде, гниющих органических остатках, входят в состав факультативной микрофлоры толстой кишки и влагалища.

Культуральные свойства. Хорошо растут на обычных питательных средах. На плотных средах образуют два типа колоний. В Н-форме (от нем. Hauch — дыхание) колонии роятся, образуя дочерние отростки и сливаясь. Это типичная форма роста. При неблагоприятных условиях, в частности при росте на средах с добавлением желчи, образуют О-формы (от нем. ohne Hauch — без дыхания) колоний: крупные, с ровными краями.

Резистентность. Устойчивы к воздействию факторов окружающей среды. Переносят нагревание до 60 °С в течение 1 ч. Длительно сохраняется жизнеспособность в слабых растворах фенола и других дезинфицирующих веществ.

Обладают выраженной биохимической активностью. Являются гнилостными микроорганизмами, способными окислять белки до а-кетокислот и аммиака. Основными биохимическими признаками, отличающими от других представителей семейства Enterobacteriaceae, являются:

•продукция фенилаланиндезаминазы;

•расщепление мочевины;

•продукция сероводорода;

•отсутствие расщепления лактозы;

•разжижение желатины.

Подразделяются на виды на основе биохимических свойств. Так P. mirabilis, в отличие от P. vulgaris, утилизирует цитрат, не продуцирует индол и обладает орнитиндекарбоксилазой.

Обладают О- и Н-антигенами.

Вызывают кишечные инфекции, гнойно-септические инфекции, инфекции мочевыводящих путей, внутрибольничные инфекции. Наиболее часто протей вызывает инфекцию мочевыводящей системы. В патогенезе, вызванных протеем, важную роль играет продуцируемая им уреаза, которая, расщепляя мочевину, вызывает высвобождение аммиака, что повышает рН. Защелачивание мочи снижает растворимость кальция и магния, создавая благоприятные условия для отложения кальциевых и магниевых солей и образования почечных камней. Помимо уреазы в развитии инфекционной патологии принимают участие гемолизин, гиалуронидаза, фимбрии. Перитрихиальные фимбрии протея, которых насчитывается 6 типов, вызывают колонизацию мочевого тракта, приводящую к развитию пиелонефрита, а также колонизацию с образованием биопленки мочевыводящих катетеров.

Используют бактериологический метод исследования. Посев материала производят на лактозодержащие дифференциальные среды и на скошенный агар по методу Щукевича (в конденсационную воду, в месте скоса агара). На среде Эндо наблюдается сливной рост (H-форма, роение), на среде Плоскирева, содержащей желчь образуют отдельные (О-форма) бесцветные колонии с красным центром. Посеянные в конденсат, скошенного в пробирке агара, они способны активно подниматься по скошенной поверхности (метод Шукевича). Выделенную культуру идентифицируют по биохимическим свойствам.

Протективный иммунитет не формируется.

Специфическая профилактика не разработана. Для лечения используют колипротейный бактериофаг и проводят этиотропную антибиотикотерапию.

22

Гомельский государственный медицинский университет, кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА

Среда Клиглера содержит:

1.МПА (Мясо-пептонный агар -

мясопептонный бульон +агарагар)

2.Глюкозу 1г/л

3.Лактозу 10 г/л

4.Индикатор рНфеноловый красный (в кислой среде желтеет)

5.Индикатор на Н2S (при выделении чернеет)

Г–;	Г–Кг;	Г–К;	Г–Кг;
Л-;	Л-Кг;	Л -;	Л -;
Н2S-	Н2S-	Н2S-	Н2S+

Исходная Эшерихия Шигелла Сальмонелла

Принцип действия среды: ферментация глюкозы происходит только в анаэробных условиях в глубине среды (столбика) из-за ее малой концентрации. Ферментация лактозы происходит в аэробных условиях на поверхности среды (скоса). При этом цвет индикатора меняется на желтый (закисление среды). О продукции сероводорода узнаем по почернению среды.

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ЭШЕРИХИОЗОВ Бактериологический метод Исследуемый материал: при кишечных эшерихиозах испражнения, при парентеральных — материал из соответствующего инфекционного очага (моча, отделяемое раны, кровь, ликвор)

1 день посев испражнений на ДДС: 2 день Учет характера роста на средах

на среде Эндо (бледно-розовая)	на среде Левина (фиолетовая)	на среде Плоскирева (оранжевая)
Лактоза +красные с металлическим	Лактоза +фиолетовые с	Лактоза +красные
блеском	металлическим блеском

Отбор колоний малиново-красного цвета цвета для реакции агглютинации с адсорбированной поливалентной ОК-сывороткой (смесью ОК-сывороток). Постановка РА с

целью отбора колоний энтеропатогенных кишечных палочек Название реакции Реакция агглютинации на стекле

		Исследуемый материал 3-5 лак+ колоний со среды Эндо
ОКВ	Физ.р-р
		Диагностический препарат поливалентная эшерихиозная сыворотка
		ОКВ( содержит антитела к антигенам E.coli О20:К84, О26:К60,
		О55:К59, О111ab:К58)
		Результат реакции: положительная, предварительно выделена
		патогенная E.coli

Колония, культура из которой дает положительную реакцию агглютинации, откалывается на скошенный МПА и/или среду Клиглера.

3 день Серотипирование выделенной культуры: Реакция агглютинации на стекле с моновалентными

адсорбированными сыворотками, входящими в состав поливалентной сыворотки E.coli

Исследуемый материал чистая культура со среды Клиглера или косяка МПА Диагностический препарат моновалентные эшерихиозные сыворотки входящие в поливалентную ОКВ: О20:К84; О26:К60; О55:К59; О111ab:К58.

23

Гомельский государственный медицинский университет, кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии

О20:К84 О26:К60 О55:К59 О111ab:К58 Физ.р-р	Результат реакции:
	положительная, предварительно
	выделена патогенная E.coli О20:К84

Постановка: 1) биохимических тестов для серотипованной культуры Е. соIi ("пестрый" ряд Гисса или планшеты); 2) теста определения чувствительности диско-диффузионым методом на среде Мюллера-Хинтона

4 день

Учет биохимических свойств Е. соIi в "пестром" ряду Гисса или на планшетах результат должен соответствовать биохимическим свойствам E.coli О20:К84

Определение спектра антибиотикорезистентности выделенной культуры дискодиффузионым методом на среде Мюллера-Хинтона

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ДИЗЕНТЕРИИ Бактериологический метод

1 день Исследуемый материал испражнения, ректальный мазок со слизистой прямой кишки посев на среды Эндо и Плоскирева или Левина и Плоскирева

	2 день		3) Откол
1) Учет характера роста на средах:		2) Приготовление
		мазков из	бесцветных
		лактозонегативных	колоний
)		(бесцветных)	колоний на
		колоний. Окраска по	среду
		Граму и микроскопия.
			Клиглера

Эндо (бледно-розовая Плоскирева (оранжевая)

3 день. Учет биохимических свойств на среде Клиглера

Результат: глюкоза ферментирована с образованием кислоты (К+), лактоза не фементирована, сероводород не образуется Вывод по первичным биохимическим признакам выделенная культура предварительно является шигеллой

Серотипирование выделенной культуры в реакции агглютинации на стекле Исследуемый материал чистая культура со среды Клиглера Диагностический препарат Поливалентная шигеллезная и видовые шигеллезные кроличьи сыворотки

Поливалентная	Видовые сыворотки к возбудителям				Физ. р-р
шигеллезная сыворотка	S.dysenteriae	S.flexneri	S.boydii	S.sonnei

24

Гомельский государственный медицинский университет, кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии

Результат положительная реакция агглютинации с поливалентной шигеллезной сывороткой и видовой шигеллезной сывороткой к шигелле Зоне; Вывод предварительно выделен возбудитель острой дизентерии S.sonnei (сообщение лечащему врачу)

Постановка тестов для определения антибиотикорезистентности, внутривидовое типирование по биохимическим свойствам и антигенной структуре

4 день. Учет результатов.

а) Определение антибиотикорезистентности диско-диффузионым методом на среде МюллераХинтона

б) Биохимическая активность шигелл ("пестрый" ряд Гисса или планшеты)

Вид		лактоза	глюкоза	маннит	мальтоза		сахароза	пептонная вода
								Н2S	индол
S.dysenteriae			К+	-	+ или-	-		-	- или +
S. flexneri			К+	К+	+ или-	-		-	- или +
S. boydii	-		К+	К+	-	-		-	- или +
S. sonnei		- или К+ 2сутки)	К+	К+	К+		- или К+( 2сут)	-	-

Заключение: выделенная культура по биохимическим свойствам идентифицирована, как шигелла Зонне

Выдача результатов.

Серодиагностика дизентерии

Название реакции развернутая реакция агглютинации Исследуемый материал сыворотка крови (антитела) Диагностический препарат диагностикум из убитых шигелл

	Диагностикумы			Разведения сыворотки больного
		1/100	1/200	1/400	1/800	1/1600	1/3200	КД	КС
	S.sonnei	Хлопья+	Хлопья+	Хлопья+	Хлопья+	Хлопья+	Осадок-	осадок	прозрачная
	S.flexneri	Осадок-	Осадок-	Осадок-	Осадок-	Осадок-	Осадок-	осадок	прозрачная
	S.flexneri var	Осадок-	Осадок-	Осадок-	Осадок-	Осадок-	Осадок-	осадок	прозрачная
	newcastle

Диагностический титр реакции равен 1/200

Заключение: титр антител 1/1600 к шигеллам Зонне, обследуемый болен (переболел) дизентерией Зонне

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА КЛЕБСИЕЛЛЕЗОВ

Возбудители К. pneumoniae , К. oxytica, К. granulomatis

Вызываемые заболевания К. pneumoniae подвид pneumoniae главный возбудитель внутрибольничных возбудитель различных органов и систем, инфекций дыхательных путей, органов мочевыводящей системы, пищевых токсикоинфекций. К. pneumoniae подвид ozaenae вызывает озену — атрофический зловонный ринит. Клебсиелла подвида rhinoscleromatis вызывает риносклерому — хроническое деструктивно-грануломатозное заболевание носоглотки. К. oxytica является возбудителем внутрибольничных инфекций в урологических клиниках.

К. granulomatis является возбудителем донованоза — венерической паховой гранулемы,

которая проявляется грануломатозными изъязвлениями на коже и в подкожной клетчатке. Заболевание передается половым, реже бытовым путем, для него характерна эндемичность распространения, в основном в странах тропического климата.

25

Гомельский государственный медицинский университет, кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии

Бактериоскопический		Исследуемый материал: мокрота при
метод		пневмонии, отделяемое зева и носа при
K.pneumoniae	subsp.	риносклероме и озене, моча и т.п.
rhinoscleromatis		Бактериологический метод
Окраска по	Бурри-
Гинсу		Посев на питательные среды:
Увеличение _630		Эндо, Левина, КА, ПА
капсула		Идентификация		выделенной	чистой
		культуры	по	морфологическим,

культуральным, биохимическим, антигенным свойствам (в РА или РП со специфическими К- сыворотками).

Микробиологическая диагностика заболеваний, вызываемых протеями

Возбудители P.vulgaris и P.mirabilisвызывают кишечные инфекции, гнойно-септические инфекции, инфекции мочевыводящих путей, внутрибольничные инфекции.

Исследуемый материал: Испражнения, моча, отделяемое ран

Питательные среды для культивирования протея: Эндо, Плоскирева, ПА, КА

Характер роста на среде Эндо наблюдается

сливной рост (H-форма, роение), на среде Плоскирева, содержащей желчь образуют отдельные (О-форма) бесцветные колонии с красным центром. Посеянные в конденсат, скошенного в пробирке агара, способны активно подниматься по скошенной поверхности (метод Шукевича).

Биохимические свойства: биохимическими признаками, отличающими протеев от других энтеробактерий, являются:

1.• продукция фенилаланиндезаминазы;

2.• расщепление мочевины; •

3.продукция сероводорода;

4.• отсутствие расщепления лактозы;

5.• разжижение желатины.

26

Гомельский государственный медицинский университет, кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии

УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫЕ ЭНТЕРОБАКТЕРИИ

	Классификация	Морфологические, культуральные	Роль в патологии человека
	( виды)	и антигенные свойства
	Род Morganella	Прямые палочки (0,6-0,7 х 1,0-1,7	Вызывают хронические и рецидивирующие
	вид M.morganii	мкм), Гр-, перитрихи.	урогенитальные инфекции Выделяю из крови,
			мочевы-водящих путей, ран.
	Род Citrobacter:	Прямые палочки (1,0х2,0-6,0 мкм),	Вызывают поражение желче- и мочевыводящих
	C. freundii,	Гр-,перитрихи, расположение	путей, отиты, остеомиелиты. Наблюдают
	C. amalonaticus,	одиночное или парами, аспорогенны,	бактериемии, эндокардиты, поражение
	C. diversus,	капсул не образуют.	дыхательных путей. C. diversusодин из
	C. intermedius	По антигенной структуре близки к	возбудителей менингита и абсцессов ЦНС.
	(всего более 10	сальмонеллам (О-Аг, H-Аг,Vi-Аг).	Основные факторы вирулентности: пили,
	видов)		поверхностные белки - адгезины, эндотоксин.
			Устойчивы ко многим антибиотикам.
	Род Edwardsiella:	Прямые палочки (1х2-3 мкм), Гр-,	Выделяют от больных с диареей.
	E. tardaтиповой	перитрихи. Идентифицировано 18
	вид.	сероваров.
	E. hoshinae,
	E. ictalur,
	Род Enterobacter:	Прямые Грпалочки (0,5-1,0х1,0-3,0	Вызывают кишечные, урогенитальные,
	E. cloaceae	мкм), располагаются одиночно,	респираторные, гнойно-воспалительные
	E. sakazakii	парами, короткими цепочками,	заболевания, иногда септицемию и менингит.
	E. agglomerans	перитрихи.	Отличаются множественной устойчивостью к
	E. gergoviae		антибиотикам.
	E. aerogenes
	Род Hafnia	Прямые Грпалочки (1,0х2,0-5,0	Выделяют при кишечных инфекциях,
		мкм). Перитрихи. Капсул не	уроинфекциях, пневмонии, сепсисе.
	вид H. alvei-	образуют. По О-Аг выделяют 29	Следует дифференцировать от шигелл и
	типовой и	серогрупп, по Н-Аг – 49 сероваров.	сальмонелл.
	единственный вид.	На средах Эндо, Левина дают
		бесцветные колонии (напоминают
		колонии шигелл).
	Род Providencia	Прямые палочки (0,6-0,8 х 1,5-2,5	Вызывают урогенитальные инфекции, диареи,
	виды	мкм), Гр-. Перитрихи. Спор не	гнойные инфекции ран, бактериемии.
	P. alcallifaciens-	образуют. Растут на среде с	Высокоустойчивы к антибиотикам.
	P. heimbachae,	цианистым калием. По структуре О-	Дифференцируют представителей родов Proteus
	P. rettgeri,	и Н-Аг выделяют 150 сероваров.	и Morganellа.
	P. rustigianii,
	P. stuartii.
	Род Serratia	Прямые палочки (0,5-0,8 х 0,9 -2,0	Вызывают бактериемию у стационарных
			пациентов и наркоманов. S. marcescens вызывает
	виды:	мкм), Гр-. Перитрихи. Спор не	до 10% госпитальных бактериемий и пневмоний,
	S.entomophila,	образуют. Некоторые штаммы	5% инфекций мочевыводящих путей,
	S. ficaria,	образуют капсулу.	хирургических ран и гнойничковых поражений
	S. fonticola,	На ПС образуют розово-красный	кожи. Способны к горизонтальной передаче
	S. grimesii,	пигмент продигиозин. Культура	(через руки медперсонала). Факторы
	S. marcescens- и др.	издает ароматный запах,	патогенности - фимбрии (подобные у клебсиелл
	(всего 11 видов).	напоминающий запах карамели.	и протеев), гемолизины, сидерофоры, протеазы,
		По О- Аг выделяют более 15с\в, по	термолобильный шигоподобный цитотоксин.
		Н-Аг- около 20 с\в.	Наиболее часто серрации проникают в организм
			через постоянные катетеры, инкубационные
			устройства, препараты для внутривенных
			инфузий.

27