12

73. Варианты РИФ:

-Прямая (одноэтапная) реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

-Непрямая (двухэтапная) реакция иммунофлюоресценции

-Непрямая (трехэтапная) реакция иммунофлюоресценции

-Прямая реакция иммунофлюоресценции

Назначение - экспресс-диагностика заболеваний.

Диагностический препарат - люминесцирующая сыворотка против антигенов искомого возбудителя

Достоинства - быстрое получение результата

Недостатки - свечение может быть связано с неспецифическим связыванием.

Доказательства специфичности свечения:

-Характерная морфология

-Краевое свечение (светится ободок, а не все тело микробной клетки)

-Интенсивное свечение

-Зеленый цвет свечения (при использовании ФИТЦ. Другие красители могут иметь другой цвет флюоресценции)

Примеры использования:

-Диагностика бактериальных инфекций - в первую очередь особоопасных - холеры, чумы, сибирской язвы, туляремии...

-Диагностика вирусных инфекций - свечение вирусных специфических включений (бешенство) или мембан клеток, пораженных вирусом (грипп)

Непрямой двухэтапный метод РИФ

Назначение: экспресс-диагностика, серодиагностика инфекционных заболеваний.

Для экспресс-диагностики необходимо иметь сыворотку против АГ искомого в-ля и люминесцирующую сыворотку против Ig животного, от которого получена первая сыворотка.

Достоинство метода - сокращение числа люминесцирующих сывороток в лаборатории - снижение затрат.

Недостаток - увеличение времени проведения реакции и увеличение вероятности ложноположительных реакций

Для серодиагностики необходимо иметь мазок, содержащий эталонный штамм в-ля, к которому ищем АТ, и люминесцирующую сыворотку против Ig человека.

Механизм. На предметном стекле готовят мазок из исследуемого материала, фиксируют на пламени и обрабатывают иммунной кроличьей сывороткой, содержащей АТ против АГ в-ля. Для образования комплекса АГ+АТ препарат помещают во влажную камеру и инкубируют при 37 °С 15 мин, промывают изотоническим р-ром хлорида натрия. Наносят флюоресцирующую антиглобулиновую сыворотку против глобулинов кролика, выдерживают 15 мин при 37 °С, промывают. Образуются светящиеся комплексы АГ+АТ, которые обнаруживаются при люминесцентной микроскопии.

74. В основе этой реакции лежит способность специфической антитоксической сыворотки нейтрализовать экзотоксин. Антитела иммунной сыворотки способны нейтрализовать повреждающее действие микробов или их токсинов на чувст-вительные клетки и ткани, что связано с блокадой микробных антигенов антителами, т. е. их нейтрализацией. Реакцию нейтрализации (РН) проводят путем введения смеси антиген—антитело животным или в чувствительные тест-объекты (культуру клеток, эмбрионы). При отсутствии у животных и тест-объектов повреждающего действия микроорганизмов или их антигенов, токсинов говорят о нейтрализующем действии иммунной сыворотки и, следовательно, о специфичности взаимодействия комплекса антиген—антитело. Для проведения реакции исследуемый материал, в котором предполагается наличие экзотоксина, смешивают с антитоксической сывороткой, выдерживают в термостате и вводят животным (морским свинкам, мышам). Контрольным животным вводят фильтрат исследуемого материала, не обработанный сывороткой. В том случае, если произойдет нейтрализация экзотоксина антитоксической сывороткой, животные опытной группы останутся живыми. Контрольные животные погибнут в результате действия экзотоксина.

75. Реакция преципитации - осаждение антителами растворимого антигена с образованием преципитата. Он образуется при смешивании антигенов и антител в эквивалентных количес-твах; избыток одного из них снижает уровень образования иммунного комплекса. РП ставят в пробирках (реакция кольцепреципитации), в гелях, питательных средах и др. Широкое распространение получили разновидности РП в полужидком геле агара или агарозы: двойная иммунодиффузия по Оухтерлони, радиальная иммунодиффузия, иммуноэлектрофорез и др. Механизм. Проводится с прозрачными коллоидными растворимыми антигенами, экстрагированными из патологического материала, объектов внешней среды или чистых культур бактерий. В реакции используют прозрачные диагностические преципитирующие сыворотки с высокими титрами антител. За титр преципитирующей сыворотки принимают то наибольшее разведение антигена, которое при взаимодействии с иммунной сывороткой вызывает образование видимого преципитата — помутнение. Реакция кольцепреципитации ставится в узких пробирках (диаметр 0,5 см), в которые вносят по 0,2—0,3 мл преципити-рующей сыворотки. Затем пастеровской пипеткой медленно наслаивают 0,1—0,2 мл раствора антигена. Пробирки осторожно переводят в'вертикальное положение. Учет реакции производят через 1—2 мин. В случае положительной реакции на границе между сывороткой и исследуемым антигеном появляется преципитат в виде белого кольца. В контрольных пробирках преци-питат не образуется.

76. Серодиагностика - метод диагностики инфекционных заболеваний, основанный на поиске в сыворотке крови обследуемого антител к антигенам возбудителя.

Сущность в определении титра АТ в сыворотке крови больного в динамике болезни по отношению к известному АГ, вводимому в серологическую реакцию( (РА) Видаля, РНГА, РСК и ИФА, РИА, ЛИФА)

Серодиагностика, основанная на реакции АГ+АТ,используется для определения как тех, так и других, и играет роль в определении этиологии вирусной .Успех зависит от специфичности реакции и соблюдения условий взятия крови.ЧАще используют парные сыворотки крови, взятые с интервалом в 2–3 нед. Рез-т + при 4-кратном нарастании титра АТ(IgM –ранниетесты для ранней диагностики (достаточно исследовать одну сыворотку). IgG синтезируются позже и длительно сохраняются.

Для типирования вирусов РН, при группоспецифической диагностике-РСК.РТГА-для диагностики заболеваний, вызванных гемагглютинирующими вирусами. Основана на связывании АТми сыворотки больного добавленного вируса. Индикатор-эритроциты, агглютинирующиеся вирусом (формирование"зонтика") при отсутствии специфических АТ и оседающие на дно неагглютинированными при их наличии.

РСК- для диагностики многих вирусных инфекций. Участники: АТ сыворотки больного + вирус и эритроциты барана + АТ к ним, также оттитрованный комплемент. При соответствии АТ и вируса этот комплекс связывает комплемент и лизиса эритроцитов не происходит(+ реакция).При р-ции «-» комплемент способствует лизису эритроцитов. Недостаток: невысокая чувствительность и трудность стандартизации реагентов.Для учетаРСК и РТГА необходимо титрование парных сывороток.

РПГА – агглютинация сенсибилизированных вирусными АГ в присутствии АТ. На эритроцитах могут быть сорбированы любые вирусы, независимо от наличия или отсутствия у них гемагглютинирующей активности. Из-зая наличия неспецифических р-й сыворотки исследуются в разведении 1:10 и более.

РНГА(ку-лихорадка, сыпной тиф) -агглютинация эритроцитов, сенсибилизированных специфическими АТ в присутствии вирусных АГ. РОПГА - выявление HBs-АГ у больных, у доноров крови.

Для постановки РНГА АГ(или АТ) нагружают на бараньи эритроциты, обработанные танином или формалином.

Эритроциты + АГ → эритроцитарный диагностикум

Эритроциты + АТ → антительный эритроцитарный диагностикум (иммунодиагностум)

ИФ(и ИФА-для определения АТ в сыворотке. На твердую фазу (дно лунок)сорбируется вирусный АГ. При добавлении АТ сыворотки- их связывание с сорбированными АГ. Наличие искомых АТ обнаруживается с пом анти-антител (человеческих), конъюгированных с ф-том (пероксидазой). Добавление S и реакция S-F дают окраску. ИФА для определения АГ- на твердую фазу сорбируются АТ

Забор крови для самотеком, а не шприцом, иглой с более широким просветом-3—5 мл крови. (эритр меньше травмируются и сыворотка без гемолиза.)

77. Серологические реакции применяются.

1. Обнаружение с диагностической целью АТ в сыворотке крови обследуемого.Из 2х компонентов реакции (АТ,АГ) неизвестный -сыворотка. Постановка реакции с АГми (диагностикумами). Результат + -наличие в крови АТ к АГ; «-»- отсутствие. Достоверные результаты-при исследовании “парных” сывороток крови больного, взятой в первые дни болезни и через разные промежутки времени от начала заболевания.Набл.динамику нарастания АТ.

2. Установление родовой, видовой и типовой принадлежности микроба. Неизвестный компонент-АГ. Используются диагностические иммунные сыворотки животных после вакцинации АГми( серологическая идентификация м/о).

Серологические реакции in vitro в две фазы:

1.специфическая - фаза взаимодействия( комплементарное соединение активных центров АТ и эпитопов АГ)- несколько секунд или минут; 2.неспецифическая - фаза проявления(образование иммунных комплексов)-неск минут до нескольких часов.

РА - принимают участие АГ в виде частиц,которые склеиваются АТми и выпадают в осадок. В зависимости от используемого иммунодиагностикума: реакция микробной агглютинации, гемагглютинации, латексагглютинации, коаглютинации.Для диагностики инфекционных заболеваний реакцию агглютинации проводят в двух направлениях: определяют вид выделенного от больного микроба-возбудителя с помощью диагностической агглютинирующей сыворотки (серологическая идентификация микроба) и обнаруживают специфические антитела в сыворотке больного, используя стандартный микробный диагностикум (серодиагностика заболевания, постановка серологического диагноза). Различают прямую и непрямую реакции агглютинации.

Реакция прямой агглютинации микробов. В этой реакции антитела (агглютинины) непосредственно агглютинируют корпускулярные антигены (агглютиногены). Обычно используется взвесь инактивированных микроорганизмов. Для определения вида микроорганизмов используют специальные диагностические агглютинирующие сыворотки, полученные путем гипериммунизации лабораторных животных взвесью бактерий. Титром такой сыворотки является ее наибольшее разведение, при котором наблюдается отчетливая агглютинация соответствующего антигена. Развернутую РА проводят в пробирках или лунках пластин. Диагностическую сыворотку разводят до титра и вносят одинаковые количества антигена. При положительной реакции на дне пробирки (лунки) образуется рыхлый осадок в виде «зонтика», при отрицательном - осадок в виде «пуговицы». Для определения антител в сыворотке больного (серологический диагноз) используют стандартный микробный диагностикум, содержащий взвесь известных микробов или их антигенов.

Реакция прямой агглютинации клеток. Используется для определения групп крови. Применяются стандартные сыворотки крови доноров, содержащие известные анти-А или анти-В антитела. Реакцию ставят на стекле или пластинах. При наличии на эритроцитах А (2-ая группа крови), В (3-я группа крови) антигенов или обоих антигенов А и В (4-ая группа крови) соответствующие сыворотки агглютинируют эритроциты (сыворотка анти-А агглютирует эритроциты 2-ой и 4-ой групп).

Реакция непрямой (пассивной) агглютинации. Для получения феномена агглютинации антиген предварительно адсорбируют на корпускулярном носителе, которым служат инертные частицы (латекс, целлюлоза, полистирол и др.) или клетки (эритроциты барана, 1(0)-группы крови человека). В реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) в качестве носителя используют эритроциты. Нагруженные антигеном эритроциты склеиваются в присутствии специфических антител к данному антигену и выпадают в осадок. Если нагрузить эритроциты антителами, то их можно применять для выявления антигенов. Реакция непрямой гемагглютинации используется для определения в сыворотке больного антител к сальмонеллам, шигеллам,Yersinia pseudotuberculosis, Aspergillus fumigatus, Candida albicans. РНГА применяется для выявления антител к Tr. pallidum при лабораторной диагностике сифилиса.

Реакция связывания комплемента (РСК). В РСК помимо антигена и антител принимает участие третий компонент - комплемент, который способен связываться с комплексом антиген-антитело. Образование комплексов антиген-антитело и фиксация комплемента не сопровождаются видимыми изменениями. Для обнаружения связывания комплемента используют дополнительную индикаторную гемолитичесчкую систему (эритроциты барана, обработанные гемолитической антисывороткой). В присутствии комплемента (сыворотки морской свинки) происходит лизис эритроцитов. Если в опытной системе образовались комплексы антиген-антитело, которые связывают комплемент, то лизис эритроцитов в индикаторной системе не произойдет (реакция положительная). РСК используется при определении антител к вирусу Коксаки, при лабораторной диагностике сифилиса - реакция Вассермана.

Иммуноферментный анализ (ИФА). В методах иммуноферментного анализа используют иммунореагенты, меченные ферментами. Наиболее широко используется твердофазный ИФА. В качестве твердой фазы используют полистироловые или поливиниловые планшеты или шарики, на которых адсорбированы антигены или антитела. Для выявления антител известный антиген адсорбируют в лунках полистироловой пластины. Затем вносят исследуемую сыворотку, в которой хотят обнаружить антитела к данному антигену. После инкубации лунки промывают для удаления несвязавшихся белков и вносят в них антииммуноглобулиновые антитела, меченые ферментом. После инкубации и отмывания в лунки добавляют специфичный для фермента субстрат и хромоген для регистрации конечных продуктов расщепления субстрата. О наличии и количестве антител судят по изменению цвета и интенсивности окраски раствора. Методы ИФА обладают высокой чувствительностью и специфичностью и получили наиболее широкое распространение среди иммунологических методов клинико-лабораторной диагностики.

78. Серотерапия и серопрофилактика - использование препаратов сыворотки крови с целью лечения или профилактики заболеваний (создания искусственного пассивного иммунитета). Иммунные сыворотки и иммуноглобулины применяют при многих инфекциях как с целью экстренной иммунопрофилактики (при непосредственной угрозе заболевания), так и с целью иммунотерапии.

Иммунные сыворотки получают путем гипериммунизации лошадей, от которых можно получить достаточно много крови. Существуют антимикробные и антитоксические сыворотки. С целью иммунотерапии антитоксические сыворотки применяются наиболее часто. Их получают путем многократной иммунизации лошадей соответствующим анатоксином. Затем сыворотки концентрируют и очищают от балластных веществ методом ферментирования и диализа (" Диаферм"). Силу антитоксических сывороток измеряют в международных единицах (ME) по способности нейтрализовать определенную дозу токсина. К антитоксическим относятся противодифтерийная, противостолбнячная, противогангренозная, противоботулиническая сыворотки.

Антитоксические сыворотки необходимо вводить как можно раньше от начала заболевания, так как антитела способны нейтрализовать токсин только до его адсорбции на клетках-мишенях. Вводят сыворотки после обязательного предварительного контроля на чувствительность к лошадиному белку, поскольку они могут вызывать аллергические реакции, особенно при повторном введении. Контроль проводят путем постановки внугрикожной пробы с лошадиной сывороткой в разведении 1:100 в объеме 0,1 мл. Результат учитывают через 20-30 минут. При отсутствии выраженной кожной реакции вводят необходимую дозу сыворотки.

Кроме гетерологических (ксеногенных) лошадиных сывороток используются аллогенные, полученные из донорской или плацентарной крови. Из иммунных сывороток получают очищенные и концентрированные иммуноглобулины.

Препараты иммуноглобулинов, полученные из нормальной или иммунной сыворотки в настоящее время широко применяются в медицинской практике. Их вводят внутримышечно, а специальные, дезагрегированные иммуноглобулины - внутривенно.

Нормальный донорский или плацентарный иммуноглобулин содержит много антител различной специфичности, направленных против всех инфекций, перенесенных донором, или антител, образовавшихся в результате вакцинации. Как правило, такие иммуноглобулины используются для иммунотерапии затяжных, вялотекущих инфекций.

Из сыворотки крови специально иммунизированных доноров получают гипериммунные иммуноглобулины целенаправленного действия. Эти препараты содержат высокий титр антител к соответствующим возбудителям. Такие специфические иммуноглобулины направленного действия используют для экстренной иммунотерапии (ИТ) и иммунопрофилактики (ИП) столбняка, гриппа, клещевого энцефалита, стафилококковой инфекции. Например, противостолбнячный донорский иммуноглобулин используют для экстренной профилактики столбняка у людей с повышенной чувствительностью к лошадиному белку.

Введение сыворотки, полученной из крови животных, может вызвать сывороточную болезнь (см.) и такое грозное осложнение, как анафилактический шок (см. Анафилаксия). Для предупреждения сывороточной болезни во всех случаях сыворотку вводят по Безредке в два этапа: сначала 1,5— 2 мл, а через 1,5—2 часа всю дозу или, лучше, в первый раз — 0,1 мл, через 30 мин.—0,2 мл и через 1 час всю дозу.

Анафилактический шок — клиническое проявление гиперчувствительности 1 типа. протекает остро с развитием коллапса, отеков, спазма гладкой мускулатуры; часто заканчивается смертью.Анафилаксия представляет собой реакцию немедленного типа, возникающую при парентеральном повторном введении антигена в ответ на повреждающее действие комплекса антиген — антитело и характеризующуюся стереотипно протекающей клинической и морфологической картиной.Анафилактическая реакция протекает в три фазы: в 1-й фазе происходит сама реакция антиген — антитело; во 2-й фазе выделяются медиаторы анафилактической реакции; в 3-й фазе проявляются функциональные изменения.

Сывороточной болезнью называют реакцию, возникающую при разовом парентеральном введении больших доз сывороточных и других белковых препаратов. Обычно реакция возникает спустя 10—15 сут. Механизм сывороточной болезни связан с образованием антител против введенного чужеродного белка (антигена) и повреждающим действием на клетки комплексов антиген — антитело. Клинически сывороточная болезнь проявляется отеком кожи и слизистых оболочек, повышением температуры тела, при-пуханием суставов, сыпью и зудом кожи; наблюдаются изменения в крови (увеличение СОЭ, лейкоцитоз и др.). Сроки проявления и тяжесть

сывороточной болезни зависят от содержания циркулирующих антител и дозы препарата. Это объясняется тем, что ко 2-й неделе после введения белков сыворотки вырабатываются антитела к белкам сыворотки и образуется комплекс антиген — антитело. Профилактика сывороточной болезни осуществляется по способу Безредки.

79. Сывороточной болезнью называют реакцию, возникающую при разовом парентеральном введении больших доз сывороточных и других белковых препаратов. Обычно реакция возникает спустя 10—15 сут. Механизм сывороточной болезни связан с образованием антител против введенного чужеродного белка (антигена) и повреждающим действием на клетки комплексов антиген — антитело. Клинически сывороточная болезнь проявляется отеком кожи и слизистых оболочек, повышением температуры тела, при-пуханием суставов, сыпью и зудом кожи; наблюдаются изменения в крови (увеличение СОЭ, лейкоцитоз и др.). Сроки проявления и тяжесть

сывороточной болезни зависят от содержания циркулирующих антител и дозы препарата. Это объясняется тем, что ко 2-й неделе после введения белков сыворотки вырабатываются антитела к белкам сыворотки и образуется комплекс антиген — антитело. Профилактика сывороточной болезни осуществляется по способу Безредки. № 70 Особенности

80. Важную роль в развитии инфекционного процесса играют токсины. По биологическим свойствам бактериальные токсины делятся на экзотоксины и эндотоксины. Экзотоксины продуцируют как грамположительные, так и грамотрицательные бактерии. По своей химической структуре это белки. По механизму действия экзотоксина на клетку различают несколько типов: цитотоксины, мембранотоксины, функциональные блокаторы, эксфолианты и эритрогемины. Механизм действия белковых токсинов сводится к повреждению жизненно важных процессов в клетке: повышение проницаемости мембран, блокады синтеза белка и других биохимических процессов в клетке или нарушении взаимодействия и взаимокоординации между клетками. Экзотоксины являются сильными антигенами, которые и продуцируют образование в организме антитоксинов. По молекулярной организации экзотоксины делятся на две группы: • экзотоксины состоящие из двух фрагментов; • экзотоксины, составляющие единую полипептидную цепь. По степени связи с бактериальной клетки экзотоксины делятся условно на три класса. • Класс А - токсины, секретируемые во внешнюю среду; • Класс В - токсины частично секретируемые и частично связанные с микробной клеткой; • Класс С - токсины, связанные и с микробной клеткой и попадающие в окружающую среду при разрушении клетки. Экзотоксины обладают высокой токсичностью. Под воздействием формалина и температуры экзотоксины утрачивают свою токсичность, но сохраняют иммуногенное свойство. Такие токсины получили название анатоксины и применяются для профилактики заболевания столбняка, гангрены, ботулизма, дифтерии, а также используются в виде антигенов для иммунизации животных с целью получения анатоксических сывороток. Эндотоксины по своей химической структуре являются липополисахаридами, которые содержатся в клеточной стенке грамотрицательных бактерий и выделяются в окружающую среду при лизисе бактерий. Эндотоксины не обладают специфичностью, термостабильны, менее токсичны, обладают слабой иммуногенностью. При поступлении в организм больших доз эндотоксины угнетают фагоцитоз, гранулоцитоз, моноцитоз, увеличивают проницаемость капилляров, оказывают разрушающее действие на клетки. Микробные липополисахариды разрушают лейкоциты крови, вызывают дегрануляцию тучных клеток с выделением вазодилататоров, активируют фактор Хагемана, что приводит к лейкопении, гипертермии, гипотонии, ацидозу, дессиминированной внутрисосудистой коагуляции (ДВК). Эндотоксины стимулируют синтез интерферонов, активируют систему комплемента по классическому пути, обладают аллергическими свойствами. При введении небольших доз эндотоксина повышается резистентность организма, усиливается фагоцитоз, стимулируются В-лимфоциты. Сыворотка животного иммунизированного эндотоксином обладает слабой антитоксической активностью и не нейтрализует эндотоксин. Патогенность бактерий контролируется тремя типами генов: гены - собственной хромосомами, гены привнесенные плазмидами умеренными фагами.

81.Грибы рода Candida (кандида) вызывают поверхностный, инвазивный и другие формы кандидоза (кандидомикоза). Насчитывается около 200 видов грибов рода Candida. Часть представителей рода являются дейтеромицетами; половое размножение которых не установлено. Выявлены также телеоморфные роды, включающие представителей с половым способом размножения: Clavispora. Клинически значимыми видами являются Candida albicans, С. tropicalis и др.

Морфология и физиология кандид

Грибы рода Candida состоят из овальных почкующихся дрожжевых клеток (4-8 мкм) псевдогиф и септированных гиф. Для Candida albicans характерно образование ростовой трубки из бластоспоры (почки) при помещении их в сыворотку. Кроме этого Candida albicans образует хламидоспоры - толстостенные двухконтурные крупные овальные споры. На простых питательных средах при 25-27 °С они образуют дрожжевые и псевдогифальные клетки. Колонии выпуклые, блестящие, сметанообразные, непрозрачные с различными опенками. В тканях кандиды растут в виде дрожжей и псевдогиф.

Эпидемиология кандидоза

Кандиды являются частью нормальной микрофлоры млекопитающих и человека. Они обитают на растениях, плодах, являясь частью нормальной микрофлоры, они могут вторгаться в ткань (эндогенная инфекция) и вызывать кандидоз у нацистов с ослабленной иммунной зашитой. Реже возбудитель передается детям при рождении, при кормлении грудью. При передаче половым путем возможно развитие урогенитального кандидоза.

Патогенез и симптомы кандидоза

Развитию кандидоза способствуют неправильное назначение антибиотиков, обменные и гормональные нарушения, иммунодефициты, повышенная влажность кожи, повреждения кожи и слизистых оболочек. Чаще кандидоз вызывается Candida albicans, которая продуцирует протеазы и ингегриноподобные молекулы для адгезии к экстрацеллюлярным белкам и другие факторы вирулентности. Кандиды могут вызывать висцеральный кандидоз различных органов, системный (диссеминированный или кандиласептицемия) кандидоз, поверхностный кандидоз слизистых оболочек, кожи и ногтей, хронический (гранулематозный) кандидоз, аллергию на антигены кандид. Висцеральный кандидоз сопровождается воспалительным поражением определенных органов и тканей (кандидоз пищевода, кандидный гастрит, кандидоз органов дыхания, кандидоз мочевыделительной системы). Важным признаком диссеминированного кандидоза является грибковый энлофтальмит (эксудативное изменение желто-белого цвета сосудистой оболочки глаза).

При кандидозе рта на слизистых оболочках развивается острая форма болезни (так называемая молочница) с появлением белого творожистого налета, возможно развитие атрофия или гипертрофии, гиперкератоза сосочков языка. При кандидозе влагалища (вульвовагинит) появляются белые творожистые выделения, отек и эритема слизистых оболочек. Поражение кожи чаше развивается у новорожденных; на туловище и ягодицах наблюдаются мелкие узелки, папулы и пустулы. Возможны кандидная аллергия ЖКТ, аллергическое поражение органов зрения с развитием зуда век, блефароконьюнктивита.

Иммунитет

Преобладает клеточный иммунитет. В защите организма от кандид участвуют фагоциты-мононуклеары, нейтрофилы, захватывающие элементы грибов. Развивается ГЗТ, формируются гранулемы с эпитедиоидными и гигантскими клетками.

Микробиологическая диагностика кандидоза

В мазках из клинического материала выявляют псевдомицелий (клетки соединены перетяжками), мицелий с перегородками и почкующиеся бластоспоры. Посевы от больного проводят на агар Сабуро, сусло-агар и др. Колонии С. albicans беловато-кремовые, выпуклые, круглые. Грибы дифференцируют по морфологическим, биохимическим и физиологическим свойствам. Виды кандид отличаются при росте на глюкозокартофельном агаре по типу филаментации: расположению гломерул - скоплений мелких округлых дрожжеподобных клеток вокруг псевдомицелия. Для бластоспор Candida albicans характерно образование ростковых трубок при культивировании на жидких средах с сывороткой или плазмой (2-3 ч при 37 °С). Кроме этого у Candida albicans выявляют хламидоспоры: участок посева на рисовом агаре покрывают стерильным покровным стеклом и после инкубации (при 25 °С в течение 2-5 дней) микроскопируют. Сахаромицеты, в отличие от Candida spp., являются настоящими дрожжами и образуют аскоспоры, расположенные внутри клеток, окрашиваемые модифицированным методом по Цилю-Нильсену; сахаромицеты обычно не образуют псевдомицелия. Наличие кандидемии устанавливают при положительной гемокультуре с выделением из крови Candida spp. Кандидозная уроинфекция устанавливается при обнаружении более 105 колоний Candida spp. в 1 мл мочи. Можно также проводить серологическую диагностику (реакция агглютинации, РСК, РП, ИФА), антитела к Candida albicans в крови и постановку кожно-аллергической пробы с кандида-алергеном. Применяют также обнаружение антигена Candida albicans