Занятие № 11

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ АУДИТОРНАЯ РАБОТА

ПО ТЕМЕ «БИОСИНТЕЗ БЕЛКОВ»

Задания для самостоятельной работы:

1. Написать реакции образования и строение валил-тРНК.

2. Составить схему биосинтеза дипептида метионилглутамата (стадии инициации и элонгации трансляции).

3. Рассмотреть роль генной инженерии в получении белков человека. Записать схему процесса.

4. Рассмотреть роль полимеразной цепной реакции (ПЦР) в диагностике. Записать схему ПЦР.

5. Выполнить индивидуальные задания по теме.

Дата: _______________

ЗАНЯТИЕ № 12

РАБОТА № 1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ СУКЦИНАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ

ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ. СДГ один из ключевых ферментов цикла трикарбоновых кислот, прочно связанный с внутренней мембраной митохондрий. Роль кофермента выполняет ФАД, соединенный с белком ковалентной связью. Фермент in vivo окисляет янтарную кислоту (сукцинат):

ФАД ФАДН₂

СООН СООН

СН2 СН

СН2 сукцинатдегидрогеназа СН

(СДГ)

СООН СООН

Сукцинат Фумарат

Работа дает представление о дегидрогеназных реакциях в ЦТК.

ПРИНЦИП МЕТОДА.

Субстрат – янтарная кислота. Конечный акцептор водорода – 2,6-дихлорфенолиндофенол (синий цвет), который при восстановлении превращается в бесцветную лейкоформу. Источником фермента является отмытая мышечная ткань. В опыте (in vitro) ход реакций следующий:

Малонат является конкурентным ингибитором фермента СДГ.

ХОД РАБОТЫ:

А. Получение ферментного препарата.

2 г свежих мышц измельчают ножницами, гомогенизируют с небольшим количеством воды. Мышечную кашицу переносят на двойной слой марли (воронка) и промывают 25 мл воды. Отжатую мышечную массу переносят в пробирку, добавляют 4 мл воды, размешивают стеклянной палочкой и суспензию равномерно разливают в 4 пробирки.

Б. Определение активности фермента.

Взять четыре пробирки и приготовить инкубационные смеси в соответствии со схемой:

№пробирки отмерить	1	2	3	4
Ферментный препарат (гомогенат ткани) Н2О Малонат Сукцинат 2,6-дихлорфенолиндофенол	1,0 мл кипячение 2 минуты 0,5 мл - 1,0 мл 2 капли	1,0 мл - 0,5 мл - 1,0 мл 2 капли	1,0 мл - 1,5 мл - - 2 капли	1,0 мл - - 0,5 мл 1,0 мл 2 капли
Перемешать. Инкубация 15 минут при 37^о С. в термостате

РЕЗУЛЬТАТ:

ВЫВОД: