44.Индикация вирусов при использовании куриных эмбрионов.

Не учит-т погибш. в теч. 24 ч эмбрионы – травматизм; если не выявлено никаких признаков -2-3 слепых пассажа. Индикация: 1.Макроскопический метод - визуальная оценка видимых изменений в К/Э: 1)зародыш –гибель(не в первые 24 ч); недоразвитость; непропорциональное развитие отдельн. чатей тела; перекруч. шея, сам эмбрион; кровоизлияния на теле (чаще в затылочн. облпсти) – одиночные, множетсвенные, сливные; изменения во внутр. органах (увеличение, переполнение кровью, кровоизлияния, анемия, дистрофия в почках, печени, сердце, желчн. пузыре); 2)ХАО – оспины, кровоизлияния, запустение или переполнение сосудов; 3)жидкости – увелич. объем аллантоисн. жидкости или уменьш. объем амниотической, измен. цвет, консистенция, примеси); 2.Микроскопический метод – световая микроскопия – тельца-включения, ЦПД, симпласты; 3) по гемагглютинир. дей-е вируса – капельная РГА (шпора№55).

45.Культивирование вирусов в клеточных культурах.

1.Подбор: К/К должны быть чувствительны к вирусу, из клеток органа-мишени естествен восприимч. животного без признаков дегенерации; 2.Получение вируссод. материала (шпора№39); 4.Заражение К/К: 1)контактный метод: ротовую пит.среду смывают р-ром Хенкса, в пробирку вносят вируссод. материал (0,1-0,2 мл), распределяют покачиванием, в термостат (t=37, на 1-2ч), вируссод. материал удаляютпромывают р-ром Хенкса, наливают поддерж. пит. среду; 2)диффузный: заражают точечно, вирус из одной зараженной клетки дифундирует в другую; 5.Культивирование вируса в клетках: закрытые пробирки ставят в термостат (t=37) под углом в 5град (матрасы –горизонтально) в роллерах (вращаются).Для каждой пробы – 4-10 пробирок + 4-6 контрольные. При длит.культивировании среду меняют каждые 7 дней. Пробирки проверяют под микроскопом каждый день. 6.Индикация:ЦПД(округление, фрагментация, гибель), РГАд, цветная проба(если индикатор в поддерж. среде меняет цвет, то вируса в К/К нет – клетки продолжают жить, выделяя продукты обмена, смещающие рН в кисл. сторону), бляшкообразование (появляются обесцвеченные зоны погибших от вируса клеток), тельца-включения (свет. микроскопия), РИФ.

24.Синтез вирусных белков. Способы их формирования.

Субстратом для синтеза вирусных белков являются аминокислоты, тождественные аминокислотам белков клетки. Матрицей при синтезе белков у ДНК содержащих вирусов является информационная РНК, которая формируется на вирусной ДНК. Информационные РНК синтезируются из субстратов зараженной клетки. Синтез матричной иРНК осуществляется ДНК зависимой РНК полимеразой, которая присутствует в зараженной клетке или приносится извне с вирусной частицей. Процесс синтеза белков у РНК содержащих вирусов происходит без участия ДНК. Функцию вирусно формационной РНК выполняет вирусоспецифическая РНК.Важнейшим компонентом системы синтеза белка являются рибосомы. При заражении клеток вирусом приостанавливается процесс синтеза новых рибосом при этом высвобождаются старые рибосомы, имеющиеся в клетках, и на них осуществляется синтез белка.Синтез белков у большинства вирусов происходит в цитоплазме. Формирование (морфогенез) зрелых вирусных частиц и их выход из клетки. Зрелая вирусная частица (вирион) формируется из молекул нуклеиновой кислоты и белковых субъединиц. В состав вируса могут входить липопротеидные мембраны и другие компоненты. Синтез вирусспецифического белка зависит от синтеза вирусной иРНК и влияет на него: если синтез белка нарушен, происходит затоваривание вновь образующейся иРНК в местах ее синтеза и тормозится дальнейший ее синтез. Вирусные белки в процессе инфекции синтезируются в избыточном количестве, чем требуется для образования инфекционного вируса. Вирусные белки могут синтезироваться в одних структурах, а накапливаться— в других. На разных стадиях инфекционного цикла могут преимущественно образовываться то одни, то другие группы белков. В зараженной клетке непропорционально накапливаются иРНК с разных вирусных генов. Этот же механизм определяет разную эффективность образования различых белков. Стандартная вирусная частица содержит одну молекулу РНК и до 10 тыс. молекул белков. Помимо структурных белков, в зараженной клетке могут синтезироваться и не-структурные (но кодируемые вирусной РНК) белки.