30) Классификация питательных сред и требования к ним

. Питательные среды должны обязательно отвечать следующим требованиям: а) они должны содержать все необходимые питательные вещества, витамины и соли; б) иметь оптимальную рН; в) иметь дос¬таточную влажность (особенно плотные среды). Кроме того, они должны быть стерильными и прозрачными.

Питательные среды, применяемые для выращивания бактерий.

Универсальные среды-(мясопептонный агар - МПА, мясопептонный бульон - МПБ)- растут многие вида бактерий.

Специальные среды - (кровяные, сахарные, сывороточные) - для культивирования бактерий, плохо растущих на универсальных средах.

Избирательные ( элективные) среды -(желчь, желчный бульон, пептонная вода, свернутая сыворотка)-хорошо растут (избирательно) лишь определенные виды бактерий.

Дифференциально-диагностические среда -(Эндо, Левина, Плоскирева и др) - различные виды бактерий растут в виде окрашенных или неокрашенных колоний (дифференциация по внешнему виду колоний). Среды "пестрого ряда".

31) ЧТО ТАКОЕ МИКРОАЭРОФИЛЫ

Микроаэрофилы - группа микроорганизмов, к-рые растут при сниженном по сравнению с аэробами парциальном давлении кислорода, но не растут в анаэробных условиях.

Микроаэрофильный организм — микроорганизм, требующий, в отличие от строгих анаэробов, для своего роста присутствия кислорода в атмосфере или питательной среде, но в пониженных концентрациях по сравнению с содержанием кислорода в обычном воздухе или в нормальных тканях организма хозяина

32)ПРИЧИНЫ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ АНАЭРОБОВ К МОЛЕКУЛЯРНОМУ КИСЛОРОДУ ВОЗДУХА

Губительное воздействие кислорода на облигатные анаэробы обусловлено тем, что в живой клетке в присутствии кислорода образуется пероксид водорода, который в больших концентрациях ядовит для бактериальной клетки. Облигатные анаэробы погибают при концентрации Н2О2 0,0003%, тогда как аэробы выдерживают до 0,015%, т.е. в 50 раз больше. Для обезвреживания пероксида водорода клетки аэробных бактерий вырабатывают фермент каталазу, разлагающую Н2О2 на воду и молекулярный кислород. Благодаря наличию каталазы Н2О2 не накапливается в клетках. У анаэробов и факультативных анаэробов каталаза отсутствует, что и является одной из причин их неспособности жить в аэробных условиях.

33)СОСТАВ СРЕДЫ КИТА-ТАРОЦЦИ

Среда Китта — Тароцци состоит из мясопептонного бульона, 0,5% глюкозы и кусочков печени или мясного фарша для поглощения кислорода из среды. Перед посевом среду прогревают на кипящей водяной бане в течение 20 — 30 минут для удаления воздуха из среды. После посева питательную среду сразу заливают слоем парафина или вазелинового масла для изоляции от доступа кислорода.

34)СОСТАВ И ХИМИЗМ СРЕДЫ ВИЛЬСОНА-БЛЕРА

Для общей среды Вильсона — Блера базой является агар-агар с добавлением глюкозы, сульфита натрия и двуххлористого железа. Клостридии образуют на этой среде колонии чёрного цвета за счет восстановления сульфита до сульфид — аниона, который соединяясь с катионами железа (II) дает соль чёрного цвета. Как правило, черные на этой среде образования колонии, появляются в глубине агарового столбика.[8]

35) ЭТАПЫ ВЫДЕЛЕНИЯ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ ВОЗБУДИТЕЛЯ

1)рассев смеси бактерий(исследуемый материал кровь моча гной и тд) на плотные пит.среды с целью получения изолированных колоний (методом истончающегося штриха).Инкубация в термостате.

2)Отбор подозрительных по внешнему виду колоний ,микроскопия части бактерий и пересев оставшейся части колоний на подходящую свежую пит.среду.Инкубация в термостате.

3)проверка чистоты культуры (макро и микроскопически)

36)КАК ИЗУЧАЮТ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА БАКТЕРИЙ

Протеолитические свойства проявляются выделением во внешнюю среду протеолитических ферментов, которые расщепляют белки до промежуточных продуктов (пептоны, полипептиды, аминокислоты) или до продуктов конечного распада (индол, сероводород, аммиак и др.)

Для выявления протеолитических ферментов исследуемую культуру засевают в питательную среду, содержащую тот или иной белок (МПЖ, молоко и др.)

37)КАК ИЗУЧАЮТ САХАРОЛИТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА БАКТЕРИЙ

Сахаролитические свойства изучаются на средах Гисса. Среда Гисса представляет собой столбик полужидкого агара (засевается уколом), в состав которого входит определенный углевод и индикатор.

Ряд Гисса: лактоза, глюкоза, манит, мальтоза и сахароза. Эти углеводы расщепляются бактериями.

38) МЕТОДЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ АНАЭРОБОВ

Для культивирования анаэробных микроорганизмов необходимо создание бескислородных условий, достигаемое различными методами.

Физические методы основаны на создании вакуума в специальных аппаратах — анаэростатах. Иногда воздух в них заменяют каким-либо другим газом, например СО2.

Химические методы заключаются в том, что при культивировании исследуемого материала на плотных средах в эксикатор помещают химические вещества, например пирогаллол и щелочь, реакция между которыми идет с поглощением кислорода.

Биологический метод основан на одновременном культивировании аэробов и анаэробов на плотных питательных средах в чашках Петри, герметически закупоренных.

Рост изолированных колоний анаэробов можно получить при рассеве исследуемого материала по поверхности кровяно-сахарного агара, разлитого в чашки Петри. После посева чашки помещают в анаэростат. Исследуемый материал в убывающей концентрации можно засевать в высокий столбик агара.

39) ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОДВИЖНОСТИ БАКТЕРИЙ ПО ПЕШКОВУ

Пешкова среда - дифференциально-диагностическая полужидкая питательная среда для определения у микроорганизмов подвижности и способности сбраживать глюкозу; содержит агар, глюкозу и индикатор бромтимоловый синий.

Среда Пешкова: мазок фиксируют, окрашивают метиленовой синью с подогревом, смывают водой, докрашивают р-ром нейтрального Красного 10 сек, смывают водой, высушивают фильтровальной бумагой. Споры синие, кл — красная.

40)КАК У БАКТЕРИЙ ОПРЕДЕЛЯЮТ СПОСОБНОСТЬ ВЫДЕЛЯТЬ ИНДОЛ

Индол — ароматическое соединение — выделяют гнилостные бактерии. При добавлении к колонии, которая выделяет индол, щавелевой кислоты колония приобретает розовый цвет, а про добавлении лакмуса — синий (индикатор на кислоту).

41)КАК У БАКТЕРИЙ ОПРЕДЕЛЯЮТ СПОСОБНОСТЬ ВЫДЕЛЯТЬ СЕРОВОДОРОД

Колонии, выделяющие сероводород, имеют характерный запах и черный цвет.

42) СОСТАВ СРЕДЫ ЭНДО

Эндо среда (S. Endo) — дифференциально-диагностическая среда для выделения и идентификации кишечных бактерий при бактериологических исследованиях пищевых продуктов, сточных вод и пр.

Состав среды Эндо: пептона — 1%, лактозы — 1 %, двузамещенного фосфорнокислого калия (К2НРO4) — 0,35%, агар-агара — 1,5%.Свежеприготовленная среда бесцветна или имеет бледно-розовую окраску. При росте лактозоположительных бактерий их колонии окрашиваются в темно-красный цвет с металлическим блеском; лактозоотрицательные кишечные палочки образуют бесцветные колонии.

43.КАК ИЗУЧАЮТ РАЗВЕРНУТЫЕ БИОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА БАКТЕРИЙ

По характеру связи с цитоплазменными структурами и по месту проявления своего действия ферменты делятся на внутри - и внеклеточные. Каждый вид микроорганизмов продуцирует постоянный для него набор ферментов, одни из которых расщепляют в разной степени белки и углеводы, а другие вызывают окисление и восстановление различных субстратов. Стабильность ферментативных систем бактерий позволяет использовать биохимические свойства бактерий в сочетании с их морфологическими, культуральным и и другими постоянными признаками для определения видов и типов бактерий.

Для обнаружения ферментов исследуемую культуру микробов засевают на специальные дифференциально-диагностические питательные среды.

Сахаролитические ферменты микробов. Для обнаружения сахаролитических ферментов исследуемую культуру бактерий засевают в питательные среды Гисса, называемые также «пестрым» рядом. «Пестрый» ряд Гисса содержит обычно 5 пробирок: с глюкозой, лактозой, маннитом, мальтозой и сахарозой.

При некоторых исследованиях для более углубленного изучения биохимических свойств выделенного микроба ряд Гисса дополняют дульцитом, сорбитом, ксилозой, арабинозой и некоторыми другими сахарами. Название «пестрый» ряд обусловлено тем, что под действием ферментов микроба одни углеводы остаются неизменными и, следовательно, цвет питательной среды не меняется, в то время как другие сахара расщепляются, образуя кислые продукты распада, которые изменяют цвет индикатора и соответственно цвет питательной среды.