Mikrobiologia_praktika

Гемолизин

Гемолизин вызывает лизис (разложение) эритроцитов, поэтому для его определения засевают культуру на кровяной агар, при наличии гемолизина будет просветление среды.

Возможны 3 варианта гемолиза:

•Альфа-гемолиз – частичный

•Бета-гемолиз – полный

•Гамма-гемолиз – отсутствие гемолиза

Фибринолизин

Взвесь культуры добавляют в сгусток крови («тромб») или плазмы с нитями фибрина и инкубируют в термостате или греют на водяной бане. При наличии фибринолизина будет наблюдаться разжижение сгустка.

Каталаза

Бактериальную массу снимают с поверхности агара бактериологической петлей и суспендируют в капле 3%-го раствора перекиси водорода на предметном стекле. Положительный результат — образование пузырьков газа.

Стафилококки каталазо-положительные, поэтому материал с культурой будет вспениваться при добавлении перекиси водорода.

Стрептококки каталазо-отрицательные, поэтому при добавлении перекиси видимых изменений не будет.

Общая фосфатаза

Исследуемую культуру микроорганизма засевают «штрихом» на поверхность питательного агара с натриевой солью дифосфата фенолфталеина, инкубируют 4...5 сут. Чашки переворачивают вниз крышкой, на внутреннюю поверхность которой наносят каплю 28...30%-го раствора нашатырного спирта. При наличии фосфатазы колонии приобретают красный цвет.

Уреаза

Исследуемую культуру микроорганизма засевают на среду Кристенсена (пептон — 1 г, хлорид натрия — 5 г, дигидрофосфат калия — 2 г, агар — 20 г, глюкоза — 1 г, 0,2%-й раствор фенолрота — 6 мл, 20%-й раствор мочевины — 100 мл, вода дистиллированная — 1000 мл) и выращивают 1...4сут. Положительный результат — покраснение среды в результате ее защелачивания.

Некротоксин

Ставится биологическая проба на лабораторных животных. Взвесь культуры вводится внутрикожно. Образование некроза говорит о наличии некротоксина.

Летальный токсин

Ставится биологическая проба на лабораторных животных. Взвесь культуры вводят внутривенно. Смерть животных говорит о наличии летального токсина.

Энтеротоксин

Культуру помещают в молоко и кормят им котятсосунков. Если культура вырабатывает энтеротоксин, то у котят будут наблюдаться диспептические явления (рвота, диарея.)

25. Биологический метод

•Заражение лабораторных животных исследуемым материалом с последующим выделением чистой культуры патогена либо установлением факта присутствия микробного токсина и его природы. Моделирование экспериментальных инфекций у чувствительных животных — важный инструмент изучения патогенеза заболевания и характера взаимодействий внутри системы микроорганизммакроорганизм. Для проведения биологических проб используют только здоровых животных определённых массы тела и возраста. Инфекционный материал вводят внутрь, в дыхательные пути, внутрибрюшинно, внутривенно, внутримышечно, внутрикожно и подкожно, в переднюю камеру глаза, через трепанационное отверстие черепа, субокципитально (в большую цистерну головного мозга). У животных прижизненно забирают кровь, экссудат из брюшины, после гибели — кровь, кусочки различных органов, СМЖ, экссудат из различных полостей.

26. Реакция агглютинации на стекле

На предметное стекло наносят разные диагностические сыворотки (против отдельных возбудителей или их антигенов), а затем в каждую каплю вносят стерильной петлей небольшое количество чистой культуры. За несколько минут наблюдают за феноменом агглютинации. Образование агглютината (хлопьев) свидетельствует о гомологичнисти антигенов возбудителя и антител диагностической сыворотки, что позволяет определить вид инфекционного агента.

При наличии позитивной ориентировочной реакции агглютинации ее ставят в развернутом варианте (реакция агглютинации Грубера).