Mikrobiologia_praktika
.pdf
Темнопольная микроскопия
С помощью темнопольнои микроскопии изучают препараты типа раздавленная «капля». Предметные стекла должны быть не толще 1,1-1,2 мм, покровные 0,17 мм, без царапин и загрязнений. При приготовлении препарата следует избегать наличия пузырьков и крупных частиц (эти дефекты будут видны ярко святящимися и не позволят наблюдать препарат).
Для темнопольной применяют более мощные осветители и максимальный накал лампы.
Настройка темнопольного освещения в основном заключается в следующем:
1)устанавливают свет по Келеру;
2)заменяют светлопольный конденсор темнопольным;
3)на верхнюю линзу конденсора наносят иммерсионное масло или дистиллированную воду; 4) поднимают конденсор до соприкосновения с нижней поверхностью предметного стекла; 5) объектив малого увеличения фокусируют на препарат; 6)с помощью центрировочных винтов переводят в центр поля зрения светлое пятно (иногда имеющее затемненный центральный участок);
7)поднимая и опуская конденсор, добиваются исчезновения затемненного центрального участка и получения равномерно освещенного светлого пятна. Если этого сделать не удается, то надо проверить толщину предметного стекла (обычно такое явление наблюдается при использовании слишком толстых предметных стекол - конус света фокусируется в толще стекла). После правильной настройки света устанавливают объектив нужного увеличения и исследуют препарат. На темном фоне видны светящиеся и подвижные микробы.
Жгутики Proteus vulgaris.
Темнопольная микроскопия.
Укол в полужидкий агар
Культуру бактерий засевают уколом в столбик 0,3 % питательной среды в пробирке. Пробирки помещают в термостат для инкубирования. Результаты учитывают через 24 – 48 часов.
Подвижные бактерии растут по всей толще агара, вызывая диффузное помутнение среды,
неподвижные – только по линии укола.
6. Бактериологический метод
Это совокупность методик искусственного культивирования микроорганизмов на питательных средах в целях их идентификации при установлении диагноза инфекционного заболевания или иного вызванного микробами процесса и определения ряда физиологических свойств культуры с другими целями, например, при выборе химиотерапевтического препарата.
Этапы бактериологического анализа
•Посев материала
•Учёт первичных результатов
•Выделение чистой культуры
•Идентификация чистой культуры
Посев материала
Исследуемый материал бактериальной петлёй или шпателем просеивается на поверхность плотной питательной среды (искл. кровь), чтобы получить рост изолированных колоний.
Кровь засевается на жидкую питательную среду – среду обогащения, с которой затем будет сделан пересев на плотную питательную среду.
Инкубация в термостате 18-24 часа при температуре 37 градусов.
Учёт первичных результатов (изучение посева)
Проводят тщательное изучение подозрительных колоний, обращая внимания на следующие признаки:
•Культуральные особенности (форма, величина, цвет, прозрачность)
•Морфологические и тинкториальные свойства (форма, величина, расположение, окраска по Граму)
•Определение подвижности
•Ориентировочная реакция агглютинации на стекле (позволяет определить род по антигенной структуре)
Выделение чистой культуры
Высеивают микробов, подозрительных как возбудители заболевания, на скошенный агар для выделения чистой культуры.
Инкубация в термостате 18-24 часа при температуре 37 градусов.
Затем проверяют культуру «на чистоту» бактериоскопическим методом.
Бактериоскопия
С исследуемого материала делают мазок, окрашивают его по Граму, оценивают цвет, форму, расположение клеток.
Для идентификации чистой культуры производят повторный мазок после её посева. Одна форма, цвет и размер всех клеток в мазке говорит о том, что это чистая культура.
Мазок, окраска по Граму. Грамотрицательные диплококки (род Neisseria) внутри фагоцитов.
Мазок чистой культуры. Грамотрицательные палочки
(Pseudomonas aeruginosa)
Идентификация чистой культуры
Тщательное изучение свойств чистой культуры:
1)Биохимические свойства (сахаро- и протеолитические)
2)Определение факторов патогенности и вирулентности
3)Постановка серологических реакций
4)Антигенные свойства
5)Чувствительность к антибиотикам
6)Фаготипирование
7. Биохимическая идентификация
Оцениваются сахаролитические и протеолитические свойства, а также активность некоторых ферментов.