- •1. Иммунитет. Иммунологическая память.
- •2.Виды иммунитета
- •3.Цитокины и интерлейкины
- •22.Фагоцитоз.
- •12.Иммуноглобулины
- •8.Антигены (аг)
- •10.Неинфекционные антигены
- •9.Инфекционные антигены
- •11.Система hlа-онтигенов
- •27.Динамика иммунного ответа
- •28.Специфический иммунный ответ на т-независимые антигены
- •29.Специфический иммунный ответ на т-зависимые аг
- •32.Первичном и вторичном иммунном ответе
- •26.Реакция связывания комплемента (рск).
- •21.Система мононуклеарных фагоцитов
- •23.Система гранулоцитов
- •25.Система комплемента
- •15.Серологические реакции для выявления антигенов и антител
- •16.Реакции преципитации
- •34.Реакции агглютинации
- •35.Рпга
- •37.Иммунный статус. Иммунодиагностика.
- •38Характеристика т-в-лимфоцитов. Рбтл, рпмл
- •39.Характеристика системы гранулоцитов и моноцитов
- •47.Аллергия
- •45.Иммунопатология
- •46.Иммунодефицитная болезнь
- •49. Цитотоксические реакции.
- •49. Иммунокомплексные реакции.
- •49. Антирецепторные реакции (V тип).
- •50 .Реакции повышенной чувствительности замедленного типа
- •50.Аллергические заболевания
- •48.Анафилактические реакции (реагиновые, IgE- зависимые).
- •51.Аутоаллергические (аутоиммунные) заболевания
- •53.Противоопухолевый иммунитет
- •52.Кожные пробы и другие провокационные тесты
- •43.Вакцины
- •19.Toll-like рецепторы и сходные с ними молекулы
37.Иммунный статус. Иммунодиагностика.
Иммунодиагностика – это применение иммунологических реакций и методов с целью оценки иммунного статуса, лабораторной диагностики заболеваний, а также для идентификации антигенов.
Все методы иммунодиагностики делятся на 2 группы:
-
Общие неспецифические методы, характеризующие состояние различных звеньев системы иммунитета: лимфоцитов, гранулоцитов, макрофагов, комплемента. Обычно их применяют для выявления дефекта в СИ, т.е. при иммунодефицитах.
-
Специфические методы, позволяющие выявить антитела, иммунные Т-лимфоциты, антигены в организме человека или антигены возбудителя во внешней среде. Эти методы используют для диагностики инфекций, аллергии, аутоиммунных заболеваний.
Иммунный статус – это состояние СИ здорового или больного в определенный момент онтогенеза при конкретных условиях окружающей среды.
В частности, иммунный статус ребенка отличается от такового у взрослого человека. Также он изменяется под влиянием неблагоприятных воздействий.
Для оценки иммунного статуса применяют определение неспецифических и специфических показателей. Оценка иммунного статуса – это процесс получения комплекса количественных и функциональных показателей, отражающих состояние СИ. Она проводится с целью выявления природы иммунопатологии – иммунодефицитных и аллергических заболеваний.
Для этого сначала у больного собирают анамнез и проводят общеклиническое обследование. В нем важным является формула крови – количество лейкоцитов разных типов: нейтрофилов, эозинофилов, базофилов, моноцитов, лимфоцитов. Лейкоцитоз – увеличение общего количества лейкоцитов (более 9х109/л) часто наблюдается при инфекциях; лейкопении – снижение их количества (менее 4 х109/л) – при аутоаллергии; эозинофилия – увеличение количества (более 3%) эозинофилов при экзогенной аллергии и т.д. Однако этих данных обычно недостаточно и необходимо более детальное определение популяций, субпопуляций лейкоцитов и гуморальных факторов иммунитета.
38Характеристика т-в-лимфоцитов. Рбтл, рпмл
Т-лимфоциты:
1. Определяют общее количество лейкоцитов, формулу крови и количество лимфоцитов. В норме лимфоцитов 20-36% среди других лейкоцитов (около 2000 клеток в 1 мм3 крови).
2. Подсчитывают процент и количество Т-лимфоцитов. В норме среди лимфоцитов крови их 50-70% (1000-1400 клеток в 1 мм3 крови).
3. Определяют содержание Т-хелперов и Т-супрессоров с помощью моноклональных антител к СD4 (Тx) и СD8 (Тc) антигенам.
У человека в норме в крови обнаруживается 33-46% Тx, 17-25% Тc, соотношение Тx/Тc=1,4-2.0 – иммунорегуляторный индекс. При заболеваниях этот индекс изменяется. Например, при СПИДе он уменьшается (0,04), т.к. угнетаются Тx (рецептором для вируса СПИДа является антиген Тx СD4). При аутоиммунных и аллергических заболеваниях индекс больше 2.0.
4. Для выявления активированных Т-клеток определяют рецепторы к ИЛ-2 (CD25), HLA-DR антигены и CD71 (рецептор для трансферрина).
5. Определяют уровень различных цитокинов в крови (обычно с помощью иммуноферментного анализа).
Исследуют также функциональные показатели Т-лимфоцитов: пролиферативную активность (см. РБТЛ, РПМЛ), цитотоксическую и цитокиновую активность. Показатели Т-лимфоцитов снижаются при Т-клеточных иммунодефицитах.
Характеристика В-лимфоцитов
1. Общее количество В-лимфоцитов можно определить с помощью моноклональных антител к антигенам СD19-СD22, СD72. Применяют также антитела к иммуноглобулинам, которые находятся на поверхности В-лимфоцитов. В-лимфоциты составляют 17-25% всех лимфоцитов (600-800 клеток в 1 мм3 крови). Иногда определяют В-лимфоциты, имеющие рецепторы к эритроцитам мыши (10-15%), составляющие лишь часть В-субпопуляции.
2. Продукты В-лимфоцитов – иммуноглобулины G, М, A классов в сыворотке крови и различных биологических жидкостях определяют с помощью радиальной иммунодиффузии в агаре – реакции преципитации по Манчини.
Для этого на одну стеклянную пластинку (или чашку Петри) наливают 2% агар, смешанный с антителами против IgG; на вторую пластинку – с антителами против IgМ, на 3-ю – против IgА. После застывания в агаре делают лунки диаметром 2 мм. В один ряд лунок каждой пластины вносят стандартную сыворотку с известной концентрацией IgG, IgМ, IgА. В другие лунки добавляют исследуемые сыворотки крови больных.
Реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ).
Переход малых лимфоцитов в бластные формы, способные к пролиферации и дальнейшей дифференцировке называется бласттрансформацией и сопровождается морфологическими изменениями лимфоцитов. Бласты – крупные, округлой формы клетки имеют большое ядро, занимающее большую часть цитоплазмы. В ядре содержится несколько крупных базофильных ядрышек, цитоплазма бластов зернистая. Одна бластная клетка может дать клон из 16-32 и даже 64 клеток, обладающих более высокой иммунокомпетентностью, чем исходный лимфоцит. Бласттрансформация лимфоцитов может быть вызвана специфическими антигенами и неспецифическими стимуляторами (митогенами). К бактериальным митогенам относятся полисахариды грамотрицательных бактерий, туберкулин микобактерий и др.
Способностью вызывать бласттрансформацию лимфоцитов обладают отдельные продукты животного (иммуноглобулин, выделенный из гетерологичной иммунной сыворотки) и растительного (фитогемагглютинин – ФГА) происхождения.
При постановке РБТЛ кровь или выделенные из нее лейкоциты вносят в среду RPMI или Игла, затем добавляют антиген или митоген. Учет реакции после внесения митогенов проводят через 2-4 суток, а после стимуляции антигенами через 3-5 суток. Неспецифический митоген ФГА трансформирует в бласты 30-50%, а ЛПС – до 30% лимфоцитов крови человека. Под влиянием специфических антигенов в бласты трансформируются не более 5-10% малых лимфоцитов.
Результаты РБТЛ можно учитывать морфологически – прямым подсчетом бластов на окрашенных препаратах под микроскопом или радиометрическим методом, измеряя уровень включения в ДНК лимфоцитов тимидина, меченного тритием.
Реакция подавления миграции лейкоцитов (РПМЛ).
Сущность ее в том, что в присутствии антигенов лимфоциты выделяют цитокины (лимфокины), в частности, фактор, подавляющий миграцию нейтрофилов и макрофагов. К взвеси лейкоцитов добавляют антиген и заполняют ею капиллярные трубочки (контроль – без антигена или посторонний антиген). Эти капилляры помещают в камеры или лунки, заполненные питательной средой. После инкубации при 370С 18 часов измеряют зону миграции клеток из капилляров или подсчитывают их количество в лунке. Если есть иммунные клетки (т.е. организм сенсибилизирован к антигену), то миграция лейкоцитов подавляется.