Физиология крови

Лабораторная работа «Определение количества гемоглобина»

Дыхательным пигментом многих животных является гемоглобин (Нb), который содержится у теплокровных позвоночных в красных кровяных тельцах, составляя до 90% сухого веса последних. Важнейшая физиологическая роль гемоглобина - перенос кислорода. Гемоглобин относится к группе сложных белков, его молекула состоит из белковой части (глобин) и небелковой части - гема. Молекула гема содержит 1 атом двухвалентного железа. Структура гема у всех животных практически одинакова. Особенности гемоглобина животных разных видов определяются структурой глобина. Гемоглобин теплокровных имеет молекулярную массу 64000-68000 и через оболочку эритроцитов не проникает.

У некоторых беспозвоночных животных (кольчатые черви, моллюски отдельных видов) кислород также связывается и переносится с помощью гемоглобина. Однако у этих животных гемоглобин находится не в клетках, а растворен в гемолимфе.

Содержание гемоглобина у взрослого человека 13-18,5%, у женщин несколько меньше, чем у мужчин. Указанная величина означает, что каждые 100 мл крови содержат 13-18,5г Hb.

Определение количества Hb у человека имеет диагностическое значение для распознавания малокровия и других заболеваний. Количество Hb в крови может быть найдено, напри­мер, по количеству связываемого им кислорода, по интенсивно­сти окраски кровяного пигмента. Наиболее распространен по­следний способ (колориметрический). Обычно для определения гемоглобина этим способом пользуются простейшим колориме­тром - гемометром Сали.

Средняя норма количества Hb для лягушки 53 ед. по Сали, при отклонениях от 45 до 66 ед.

Цель работы. Знакомство с основными принципами подсчета содержания гемоглобина в крови.

Оборудование, материалы и объект исследования. Гемометр Сали, 0,1 N раствор HCl, дистиллированная вода, пипетка для взятия крови.

Ход работы.

Знакомятся с устройством гемометра Сали. Гемометр Сали представляет собой штатив, задняя стенка которого сделана из матового стекла, с тремя гнездами. В боковые гнезда помещены запаянные пробирки с 1%-ным раствором солянокислого гематина или стеклянные палочки стандартной окраски. В среднее гнездо вставлена открытая пустая градуированная пробирка для исследуемой крови, которая имеет 2 шкалы, нанесенные с обеих сторон пробирки. Первая шкала градуирована в единицах Сали (ед. Сали), вторая – в грамм-процентах (г -%). Шкалы соотносятся между собой следующим образом: 100 ед. Сали = 16.67 г -%.

В среднюю пробирку гемометра Сали до нижней метки наливают 0,1 N раствор HCl.

В капиллярную пипетку набирают 0,2 мл крови, излишний объем крови удаляют, прикладывая ватку к кончику капилляра.

Кровь из капилляра выдувают на дно средней пробирки, смешав её с кислотой. Кровь гемолизируется, и образовавшийся солянокислый гематин придает ей коричневый оттенок.

Через 5-10 мин к содержимому пробирки по капле добавляют дистиллированную воду до тех пор, пока при рассматривании в проходящем свете его окраска не сравняется с окраской стандартных пробирок. При добавлении воды содержимое пробирки размешивают стеклянной палочкой. При рассматривании раствора стеклянную палочку вынимают из него, но не из пробирки. Цифра, стоящая на уровне нижнего мениска жидкости, укажет количество гемоглобина в грамм-процентах или единицах Сали.

Оформление работы. Записывают результаты (по обеим шкалам) вычисленного процентного содержания гемоглобина в крови и сравнивают его с нормой.