Лабораторная работа «Осмотическая устойчивость эритроцитов»
Концентрация электролитов в плазме крови человека составляет около 0,9%. Эритроциты обладают избирательно проницаемой мембраной, которая пропускает воду, сахар, анионы и малопроницаема для катионов. Давление, внутри эритроцитов обусловлено электролитами, главным образом KCl. Давление плазмы и внутри эритроцитов взаимно уравновешены, их величина поддерживается постоянной и равняется 7,8 атм.
Растворы солей, осмотическое давление которых равно давление внутри эритроцитов, называют изотоническими. Растворы, осмотическое давление которых больше давление внутри клетки, называются гипертоническими. В таких растворах часть воды из эритроцитов выходит наружу, и эритроциты сжимаются — плазмолиз.
Растворы с осмотическим давлением меньшим, чем в эритроцитах, называются гипотоническими. Эритроциты, помещенные в них, разрушаются (лопаются), и их содержимое – гемоглобин вытекает в раствор, т.е. происходит осмотический гемолиз.
Концентрация раствора NaCl, при которой начинается гемолиз, характеризует минимальную резистентность эритроцитов. Концентрация раствора NaCl, вызывающая полный гемолиз, соответствует максимальной резистентности эритроцитов.
Цель работы. Определить верхнюю и нижнюю границы осмотической стойкости эритроцитов.
Оборудование, материалы и объект исследования. 50 мл дефибринированной крови, штатив для пробирок, 8 пробирок, 500 мл 1%-ный раствора NaCl, пипетка, дистиллированная вода.
Ход работы.
Готовят растворы NaCl различной концентрации. Для этого – в каждую из пронумерованных пробирок наливают дистиллированную воду и 1%-ный раствор NaCl, причем, сначала наливают в пробирки воду, а затем раствор соли согласно нижеприведенной таблице.
Номер пробирки |
1%-ный раствор NaCl (мл) |
Дист. вода (мл) |
Полученная концентрация раствора (%) |
1 |
4,5 |
0,5 |
0,9 |
2 |
4,0 |
1,0 |
0,8 |
3 |
3,5 |
1,5 |
0,7 |
4 |
3,0 |
2,0 |
0,6 |
5 |
2,5 |
2,5 |
0,5 |
6 |
2,0 |
3,0 |
0,4 |
7 |
1,5 |
3,5 |
0,3 |
8 |
1,0 |
4,0 |
0,2 |
В каждую пробирку пипеткой добавляют по 3-4 капли (во все пробирки одинаковое количество) крови. Полученные растворы осторожно взбалтывают и оставляют пробирки в штативе на 1 ч.
Делают выводы о границах осмотической устойчивости эритроцитов, исходя из нижеследующего:
частичный гемолиз характеризуется окрашиванием раствора и появлением осадка неразрушенных эритроцитов;
полный гемолиз определяется по интенсивной алой окраске раствора и отсутствию осадка;
бесцветный раствор и большое количество осадка свидетельствуют об отсутствии гемолиза.
Определяют, при какой концентрации раствора NaCl наступает каждое явление, и, соответственно, устанавливают границы устойчивости эритроцитов (максимальную и минимальную резистентность).
Оформление работы. По результатам эксперимента заполняют таблицу.
Концентрация раствора (%) |
Окраска раствора |
Наличие осадка |
Границы устойчивости |
0,9 |
|
|
|
0,8 |
|
|
|
0,7 |
|
|
|
0,6 |
|
|
|
0,5 |
|
|
|
0,4 |
|
|
|
0,3 |
|
|
|
0,2 |
|
|
|