Лабораторная работа №6

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ РУТИНА В ЧАЕ

Цель работы – приобрести навыки количественного определения витамина Р в чае.

В основе витамина Р лежит ядро флавона. Известно несколько соединений, обладающих Р-витаминным действием. Рутин (рутозид) – это гликозид флавона кверцитина и дисахарида рутинозы (глюкоза и рамноза).

флавон рутин

Рутин – кристаллическое вещество желто-оранжевой окраски. Содержится в тех же продуктах, что и витамин С. В чае содержится 30-50 мг% рутина, в зеленом чае – несколько больше.

Метод основан на способности рутина окисляться перманганатом калия. В качестве индикатора используется индигокармин, который вступает в реакцию с калия перманганатом после того, как окислится весь рутин.

Материал исследования: черный или зеленый чай.

Реактивы: 0,05 н. раствор перманганата калия; индикатор индигокармин.

Оборудование: весы с разновесом; конические колбочки на 50 мл; водяная баня; воронка с фильтром; пипетка на 10 мл; мерная колба на 50 мл; микробюретка для титрования.

Ход работы: В коническую колбу к 0,1 г чая приливают 40 мл горячей воды и проводят экстракцию при нагревании на водяной бане в течение 5 минут. Далее раствор фильтруют в мерную колбу на 50 мл и доводят водой до метки дистиллированной водой. Для титрования пипеткой отмеривают в колбу для титрования 10 мл экстракта, добавляют 10 мл дистиллированной воды и 5 капель индигокармина, при этом появляется синее окрашивание. Титруют из микробюретки раствором KMnO₄ до появления устойчивой желтой окраски.

Указания к составлению отчета: Расчет проводят по формуле:

Х = (0,0032 ∙ V ∙ 50 ∙ 1000)/(10 ∙ 0,1),

где Х – содержание рутина, мг/кг,

0,0032 – титр рутина по 0,05 р. раствору KMnO₄, мг/мл,

50 – разведение (объем мерной колбы), мл,

1000 – коэффициент пересчета на 1 кг сырья, г,

10 – объем жидкости взятый для титрования, мл,

V – объем KMnO₄, пошедший на титрование, мл,

а – навеска исследуемого материала, г.

Лабораторная работа №7

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИТАМИНА В₁

Цель работы: освоить метод количественного определения тиамина флюорометрическим методом по Вангу и Харрису.

Витамин В₁ в щелочной среде под действием гексоциано-Ш-феррата калия окисляется в тиохром — пигмент жел­того цвета, который в изобутиловом спирте дает интенсивно синюю флюоресценцию:

Определение основано на окислении тиамина в тиохром, экстракции тиохрома органическим растворителем и измерении интенсивности голубой флюо­ресценции. Для количественного определения тиамина сравнивают флюоресценцию окисленных стандартных и испытуемых растворов тиамина хлорида на флюорометре.

Исследуемый материал: раствор тиамина хлорида.

Реактивы: 10% раствор гексациано-(III)-феррата калия; 20% раствор гидроксида натрия; рабочий стандартный раствор тиамина (10 мкг в 1 мл); этанол; изобутанол.

Оборудование: флюорометр с фотокюветами из кварцевого стекла, штатив с пробирками, пипетки, пять де­лительных воронок.

Ход работы. В делительную воронку наливают 6—8 мл пробы_, прибавляют равный объем изобутанола и встряхивают в течение 2 мин. Промытую пробу (нижний слой) сливают в две сухие делитель­ные воронки (по 2 мл) и прибавляют по 1 мл раствора гидроксида натрия.

В опытную воронку по каплям вносят свежеприготовленный раствор гексациано-(Ш)-феррата калия до тех пор, пока окраска не сохранится в течение 30 с. В опытную и контрольную воронки прибавляют по 5 мл дистиллированной воды, по 10 мл изобутанола и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. Нижний слой пробы сли­вают, а верхний (изобутанол) собирают в две сухие пронумерован­ные пробирки.

В третью делительную воронку вносят 1 мл рабочего стандарт­ного раствора тиамина и 1 мл воды, в четвертую — 2 мл дистилли­рованной воды. В обе воронки прибавляют по 1 мл раствора гидро­ксида натрия, по 10 капель раствора гексациано-(Ш)-феррата ка­лия, встряхивают, доливают по 5 мл воды, и по 10 мл изобутанола, снова встряхивают в течение 2 мин. Нижний слой удаляют, а верх­ний собирают в две сухие пронумерованные пробирки.

Для просветления растворов во все четыре пробирки — опыт­ную, стандартную и две контрольные добавляют по 2 мл этанола. Проводят сравнение интенсивности флюоресценции исследуемой пробы и контроля. Содержание тиамина определяют на флюорометре по флюоресценции тиохрома.

Указание к составлению отчета.

Массовую концентрацию тиамина (мкг) в исследуемом материале находят по формуле:

X=С(Е_ОП-Е_к)V₀/Е_СТV_1,

где Х – массовая концентрация тиамина в пробе, мкг;

С – концентрация тиамина в 1 мл рабочего стандартного раствора (10 мкг);

V₁ – объем пробы, взятой для анализа (2 мл);

V₀ – общий объем пробы (мл);

Е_оп – интенсивность флюоросценции опытной пробы;

Е_к – интенсивность флюоресценции контрольной пробы;

Е_ст – интенсивность флюоресценции стандартной пробы.