Клубеньковые бактерии.

Клубеньковые бактерии, находясь в симбиозе с бобовыми растениями, способны фиксировать молекулярный азот атмосферы.

Клубеньковые бактерии относятся к роду Rizobium. Форма и величина клубеньковых бактерий изменяются в зависимости от стадии их развития. В молодой культуре они представлены короткими подвижными палочками, со временем они утрачивают подвижность и переходят в стадию так называемых опоясанных палочек. При окраске анилиновыми красителями ярко окрашенные участки цитоплазмы чередуются со светлыми полями, в которых концентрируются жировые включения, не воспринимающие окраску. При старении культуры клетки начинают ветвиться и тогда их называют бактероиды. Стадия опоясанных клеток и бактероидов обычно совпадает со стадией бутонизации и цветения бобовых растений и характеризуется максимальной интенсивностью фиксации азота.

Клубеньковые бактерии специфичны для определенных родов бобовых. Клубеньковые бактерии внедряются в растения через кончик корневого волоска и образуют инфекционную нить. Она представляет собой слизистый тяж, несущий массу бактериальных клеток. Инфекционная нить проходит по корневому волоску в клетки коры корня до эндодермы. Клетки коры корня, инфицированные клубеньковыми бактериями, и соседние, прилегающие к ним клетки активно делятся, образуя клубеньки.

Материалы и оборудование: зафиксированные корневые системы бобовых растений, фиксированные клубеньки, ботаническая бритва, водный раствор фуксина, метиленовый синий, предметные, покровные стекла, пинцет, препаровальные иглы, микроскоп.

Ход работы:

1. На фиксированных корневых системах рассмотреть клубеньки и зарисовать.

2. Лезвием сделать тонкий срез через клубенек. Срез поместить в каплю воды на предметное стекло. Подкрасить фуксином или метиленовым синим и микроскопировать. На препарате хорошо видна бактериодная ткань клубенька, а в ней просматривается масса клубеньковых бактерий.

3. Для более точного изучения клубеньковых бактерий приготовить фиксированный препарат.

4. Разрезать клубенек и отжать каплю сока в каплю воды на предметное стекло. Если клубеньки маленькие, их разрушают препаровальными иглами и полученный материал хорошо размазать по стеклу.

5. Мазок фиксировать и окрасить. На препарате видны клубеньковые бактерии разных форм и размеров, мелкие палочки, более крупные опоясанные и ветвистые (бактероиды).

Результаты работы занести в лабораторную тетрадь. Сделать рисунки и обозначения.

Лабораторно-практическое занятие №3

ОПЫТ № 3

Анализ микрофлоры воздуха помещений.

Цель работы: освоить методику анализа микрофлоры воздуха помещений и ознакомиться с основными представителями микрофлоры воздуха помещений.

В окружающей нас атмосфере содержатся как сапротрофные микроорганизмы, так и микроорганизмы, обитающие на слизистых оболочках дыхательных путей человека. Среди последних могут быть как сапротрофные таки патогенные формы. Поэтому с микробиологическим материалом, высеянном из воздуха закрытых помещений, следует обращаться с осторожностью, учитывая возможность высева патогенных форм.

Материал и оборудование: стерильные чашки Петри, стерильный мясопептонный агар в пробирках или голый агар-агар, водяная баня, электроплитка, спички, спиртовка, стеклограф, микроскопы, предметные стекла с углублениями и без них, покровные стекла, химический стакан на 500 мл или 250 мл, стеклянная палочка, дистиллированная вода.

Ход работы:

I этап. Приготовление питательной среды агар-агар.

Отвесить 5 г порошка сухого агар-агара и тщательно растворить в 250 мл холодной дистиллированной воды. Нагреть до кипения и кипятить 2-3 мин. до полного расплавления. Стерилизовать автоклавированием при 120⁰С в течении 15 мин. Среду охладить до 45-50⁰С и разлить в чашки Петри слоем 4-6 мм. При разливе крышку чашки открывают не полностью, а настолько, чтобы под нее вошла струйка. Разлив производится на строго горизонтальной поверхности, чтобы среда распределилась равномерно. После полного застывания среды чашки готовы к употреблению.

II этап. Посев микрофлоры воздуха.

В избранном для анализа микрофлоры воздуха помещении чашки ставят на горизонтальную поверхность и держат открытыми 10-15 мин. Закрыть и поставить в термостат на 7-10 суток при 25⁰С.

III этап. Анализ полученных результатов. Работа выполняется в лабораторной тетради.

Произвести подсчет выросших на агаре колоний бактерий и грибов. Для подсчета при большом количестве колоний чашку Петри делят иглой на секторы. Подсчитывают колонии отдельно в каждом секторе, затем суммируют.

Произвести описание отдельных колоний по следующим признакам:

• Форма колонии (округлая, овальная, чечевицеобразная, сплющенная);

• Цвет колонии;

• Характер края (ровный, волнистый, лучистый, зубчатый и пр.);

• Блеск (блестящая, матовая, просвечивающая);

• Центр колонии (имеется или отсутствует);

• Поверхность (плоская, выпуклая, выгнутая, складчатая, зернистая).

Из колонии, которую описали приготовить микропрепарат в «раздавленной» и «висячей капле» и окрашенный мазок. Сделать рисунок. При микроскопировании отметить форму клеток, подвижность, наличие или отсутствие спор. Если колония грибная, отметить тип мицелия (септированный или несептированный).

Все данные занести в тетрадь. Сделать выводы по полученным результатам.

Контрольные вопросы:

1. Отчего зависит количество микроорганизмов в воздухе помещения?

2. Какие группы микроорганизмов представлены в микрофлоре воздуха?

3. Какие формы бактерий преобладают в микрофлоре воздуха?

4. Какие грибы могут быть в составе микрофлоры воздуха?

7