- •На правах рукописи
- •Глава 2. Материалы и методы исследования………………………………….58
- •Глава 3. Результаты исследования……………………………………………...62
- •Глава 4. Обсуждение результатов……………………………………………….88
- •Список сокращений
- •Введение
- •Глава 1. Обзор литературы
- •1.1. Изменения поведения как проявление старения мозга
- •1.1.1. Изменения поведения в онтогенезе
- •1.1.2. Изменения поведения при физиологическом старении и нейродегенеративных расстройствах
- •1.2. Возможные механизмы возрастных изменений
- •1.3. Окислительный стресс и старение мозга
- •1.3.1.Роль активных форм кислорода в физиологических процессах
- •1.3.2. Окислительный стресс в механизмах старения и патогенезе связанных с ним нейродегенеративных заболеваний
- •1.4. Антиоксиданты как геропротекторы
- •1.4.1. Адресованные в митохондрии антиоксиданты -
- •1.5. Крысы oxys – модель преждевременного старения и
- •Заключение
- •Глава 2. Материалы и методы исследования
- •2.1.Животные и методы воздействия на них
- •2.1.1. Оценка возрастных изменений поведения крыс oxys и Вистар
- •2.1.2. Магнитно-резонансная томография
- •2.1.3. Офтальмологические осмотры
- •2.1.4. Влияние антиоксидантов на поведение
- •2.2. Статистический анализ
- •Глава 3. Результаты исследования
- •3.1. Изменения поведения крыс oxys и Вистар с возрастом
- •3.1.1. Тест «открытое поле»
- •3.1.2. Приподнятый крестообразный лабиринт
- •3.1.3. Водный лабиринт Морриса
- •3.2. Поведение крыс oxys и развитие катаракты и ретинопатии
- •3.3. Магнитно-резонансная томография мозга
- •3.4. Влияние антиоксидантов на поведение крыс oxys и Вистар
- •3.4.1. Влияние антиоксидантов на поведение
- •3.4.2. Влияние длительного приёма SkQ1 на поведение крыс oxys и Вистар
- •3.4.3. Влияние SkQ1 на поведение годовалых крыс oxys и Вистар
- •Глава 4. Обсуждение результатов
- •Список литературы
Заключение
В условиях прогрессирующего увеличения продолжительности жизни и связанного с ним роста количества людей, страдающих возрастными нейродегенеративными расстройствами, выяснение механизмов преждевременного старения и разработка способов его коррекции приобрели особую актуальность. Общепризнанно, что окислительный стресс – один из основных механизмов старения, в том числе возрастных изменений мозга и развития возрастных нейродегенеративных заболеваний. Закономерно, антиоксиданты широко используются как геропротекторы: количество обладающих антиоксидантными свойствами фармакологических препаратов и биологически активных добавок стремительно растет. Зачастую основным критерием эффективности новых антиоксидантов становится их антирадикальная или антиоксидантная активность, установленная в опытах in vitro. В то же время появились убедительные доказательства того, что избыточный приём антиоксидантов, в том числе незаменимых и достаточно глубоко исследованных, может принести больше вреда, чем пользы. Вопрос о целесообразности дополнительного приёма антиоксидантов молодыми здоровыми приобрел особую актуальность в связи с существенным расширением представлений об участии АФК в физиологических процессах, в том числе – в процессах нейрональной пластичности. В такой ситуации необходимым условием объективной оценки эффективности антиоксидантов остается проведение всесторонних фундаментальных исследований, для которых необходимы биологические модели. В связи с этим цель настоящего исследования – характеристика линии крыс OXYS как модели преждевременного старения мозга и оценка влияния на него различных антиоксидантов представляется вполне актуальной.
Глава 2. Материалы и методы исследования
2.1.Животные и методы воздействия на них
Эксперименты выполнены на 698 крысах-самцах линий OXYS и Вистар на базе Центра коллективного пользования «Генофонды лабораторных животных» ИЦиГ СО РАН. Животных содержали при естественном освещении и свободном доступе к воде и пище группами по 5 особей в клетках размером 57×36×20 см при температуре 22±20С.
2.1.1. Оценка возрастных изменений поведения крыс oxys и Вистар
Исследование поведения проведено на животных в возрасте 1, 3 и 12 мес. в тестах «открытого поля» (n=152), приподнятого крестообразного лабиринта (n=158) и в водном лабиринте Морриса (n=90).
Тест приподнятый крестообразный лабиринт основан на страхе животного перед падением с высоты [Redrobe J.P. et al., 2003]. Установка состояла из двух открытых и двух закрытых рукавов, расположенных крестообразно на высоте 50 см от пола. Крыс помещали на центральную площадку лабиринта и в течение 5 мин. оценивали латентный период начала движения, время нахождения в открытом пространстве – центре и открытых рукавах, в закрытых рукавах, количество выходов в открытые и закрытые рукава, в центр, а также вертикальных стоек, выглядываний, реакций груминга и дефекаций.
Тест «открытое поле» используется для оценки двигательной и исследовательской активности и тревожности в условиях эмоционального стресса [Prut L., Belzung C., 2003]. Крыс помещали в угол установки - квадратной камеры (100 100 см, 100 квадратов, высота 40 см, освещение 100 вт) - и в течение 5 мин. регистрировали количество пересеченных квадратов, вертикальных стоек, латентный период выхода в центр, реакций груминга и дефекаций.
Тест водный лабиринт Морриса [Morris R., 1984] используется для исследования обучения, долговременной пространственной памяти. Лабиринт Морриса (круглый бассейн диаметром 2 м и высотой стенок 0,6 м, высота над уровнем пола 0,7 м) условно делился на 4 сектора при помощи различных меток, нанесенных на его стенки изнутри. Тестирование проводили в вариации с невидимой платформой при ее постоянном положении (4 попытки: в день по 1-й из каждого сектора×5 дней). Для нахождения платформы животному предоставляли 70 сек. и 20 сек. – для пребывания на ней, затем помещали в отдельную клетку до следующей попытки (на 12 мин.).