- •Основы регуляции метаболизма у микроорганизмов (специальность "Микробиология")
- •Занятие 1
- •1. Подготовка бактериальных клеток к анализу
- •1.1 Интактные клетки
- •1.1.1 Растущие клетки
- •1.1.2 Покоящиеся клетки
- •1.1.3 Голодающие покоящиеся клетки
- •1.2 Проницаемость клеток
- •1.2.1 Обработка растворителями
- •1.2.2 Обработка хелатообразующими агентами
- •1.3 Препараты дезинтегрированных клеток
- •1.3.1 Разрушение клеток под действием осмотических сил
- •1.3.2 Дезинтеграция
- •2. Методы изучения метаболической активности микроорганизмов
- •2.1 Экспериментальные условия
- •2.1.1 Изменяющиеся условия эксперимента
- •2.1.2 Подавление активности
- •2.1.3 Конкурентные побочные реакции и сопряженный анализ
- •2.1.4 Общие замечания
- •2.2. Общие меры по стандартизации
- •2.3 Общие методики
- •3. Решение расчётных задач
- •1. Методы изучения регуляции метаболизма микроорганизмов. Регуляция активности ферментов
- •1.1 Методы изучения аллостерической регуляции метаболизма микроорганизмов.
- •1.1.1 Простое ингибирование конечным продуктом
- •1.2 Методы изучения регуляции метаболизма микроорганизмов с помощью ковалентной модификации ферментов
- •1.2.1 Аденилирование
- •2. Методы изучения регуляции метаболизма микроорганизмов. Регуляция синтеза ферментов
- •2.1 Индукция синтеза бактериальных ферментов
- •2.2 Репрессия бактериальных ферментов конечным продуктом реакции (орнитин - карбамоилтрансфераза)
- •2.4 Индукция плюс репрессия (lac-оперон)
- •3. Решение расчётных задач
- •1 Анализ путей метаболизма
- •1.1 Общие методы
- •1.1.1 Идентификация промежуточных продуктов
- •1.1.2 Использование ингибиторов метаболизма
- •1.1.3 Использование аналогов субстрата
- •1.1.4 Одновременная адаптация
- •1.1.5 Использование клеточных экстрактов
- •1.1.6 Использование радиоизотопов
- •1.1.7 Использование индуцированных ауксотрофов
- •1.2 Баланс изотопного углерода
- •1.2.1 Общие замечания
- •1.2.2 Определение неиспользованного субстрата
- •1.2.3 Определение ассимилированного 14с
- •1.2.4 Определение негазообразных конечных продуктов
- •1.2.5 Расчет и определение баланса
- •1.3 Наличие ключевых ферментов
- •2.1 Проницаемость бактерий
- •2.1.1 Методика измерения
- •2.1.1.1 Отмывание клеток
- •2.1.1.2 Центрифугирование клеток
- •2.1.1.3 Измерение веса и объема осадка
- •2.1.1.4 Смешивание клеток с раствором и инкубирование
- •2.1.1.5 Повторное центрифугирование
- •2.1.1.6 Определение концентраций растворенного вещества
- •2.1.2 Определение межклеточного пространства
- •2.2. Транспорт веществ в клетки бактерий
- •2.2.1 Методика анализа
- •2.2.1.1 Подготовка клеток
- •2.2.1.2 Смешивание клеток с раствором и инкубирование
- •2.2.1.3 Отбор проб и разделение
- •2.2.1.4 Отмывка клеток
- •2.2.1.5. Удаление клеток и их анализ на содержание исследуемого вещества
- •2.2.2. Общие замечания
- •2.3. Специальные методы изучения регуляции метаболизма
- •2.3.1. Определение протонодвижущей силы
- •2,3Rt/f[log(с1ввешн)/(с1внутр)],
- •2.3.2 Осмотически чувствительные клетки
- •2.3.3 Применение неметаболизируемых аналогов субстратов для раздельного изучения транспорта и метаболизма у бактерий
- •2.3.5 Мембранные везикулы
- •3. Решение расчётных задач
- •2,3Rt/f[log(с1ввешн)/(с1внутр)],
- •Библиографический список
Библиографический список
Основная литература
1. Гусев М.В., Минеева Л.А. Микробиология. 4-е изд., стер. - М.: Академия, 2003. - 464c.
2. Глик Б., Пастернак Д. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. - М.: Мир, 2002. - 589c.
3. Плакунов В.К. Основы энзимологии: Учеб. пособие. - М.: Логос, 2002. - 128c.
4. Ньюсхолм Э., Старт К. Регуляция метаболизма: пер. с англ./ под. ред. Э. Г. Ларского.-М.:Мир,1977.- 402.
5. Николайчик Е. А. Регуляция метаболизма: курс лекций.-Минск.:2002.-88 с.
6. Кольман Я., Рём К-Г. Наглядная биохимия: пер. с немец./ под ред. П. Д. Решетова.-М.: Мир, 2000.- 460 с.
7. Патрушев Л.И. Экспрессия генов. – М.: Наука, 2000. – 830 с.
8. Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия: Учебник.– 3-е изд., перераб. и доп.– М.: Медицина, 1998.– 704 с.
Дополнительная литература
9. Страйер Л. С 83 Биохимия: В 3-х т. Т.3 Пер. с англ.- М.: Мир, 1985.-400 с.
10. Биохимия мембран: учеб. Пособие/ под ред. А. А. Болдырева. Кн. 1. А. А. Болдырев Введение в биохимию мембраню.-М.: Высш. шк., 1986.-112 с.
11. Введение в теорию рецепторов/ С. Г. Галактионов [и др. ] .-Мн.: Наука, 1986.- 199 с.
12. Генетика / Б. Гуттман,. - Пер. с англ. О. Перфильева. — М.: ФАИР-ПРЕСС, 2004. – 448 с.
13. Готтшалк Г. Метаболизм бактерий: пер. с англ./ под ред. Е. Н. Кондратьевой.- М.: Мир, 1982.- 310 с.
14. Жимулев И.Ф. Общая и молекулярная генетика: Учеб. пос. / СО РАН. - Новосибирск: Изд-во Новосибирского ун-та: Сиб. унив. изд-во, 2002. – 459 c.
15. Корниш-Боуден Э. Основы ферментативной кинетики: пер. с англ. Б. И. Курганова .-М.: Мир, 1979.- 282 с.
16. Коэн Ф. Регуляция ферментативной активности: пер. с англ. Л. М. Гинодмана.-М.: Мир, 1986.-144 с.
17. А. С. Хохлов, Ю. А. Овчинников Химические регуляторы биологических процессов.-М.:Знание, 1969.- 142 с.
Методическая литература
18. Биологическая химия с упражнениями и задачами : учебник / под ред. чл._корр. РАМН С.Е. Северина. — М. : ГЭОТАР_Медиа, 2010. – 624 с.
19. Стручкова И.В. Брилкина А.А., Веселов А.П. Регуляция биосинтеза белка: Учебно-методическое пособие. – Нижний Новгород: Нижегородский госуниверситет, 2010. – 100 с.
20. Регуляция метаболизма клетки: Метод, указания / Авт.-Р32 сост. Е. В. Доброжинецкая, Н. П. Максимова. - Мн.: БГУ, 2001. -14 с.
21. Чеботарёв Е.В. Методические указания к практическим занятиям по курсу "Основы регуляции метаболизма микроорганизмов" Спец. 012400, ВятГУ, БФ, каф. биологии. - Киров, 2005. - 17c.
Список литературы составил:
Янов Сергей Николаевич, д.б.н., профессор
КИРОВ - 2012