2. Клинический метод диагностики инфекционных болезней животных

К клиническим методам диагностики инфекционных болезней животных относятся: туберкулинизация, бруцеллинизация и маллеинизация.

Туберкулинизацией определяют скрытые формы туберкулеза у крупного и мелкого рогатого скота, свиней и кур. Для этого используют биологический препарат – туберкулин (убитую культуру туберкулезных бацилл).

Готовят его путем выращивания туберкулезных микробов на мясном бульоне с добавлением глицерина. Бульон, содержащий громадное количество туберкулезных бацилл, выпаривают до 1/10 объема, стерилизуют при температуре 100⁰, фильтруют и разливают в специальные ампулы. Полученный таким образом препарат представляет собой прозрачную, слегка коричневую жидкость.

Качество туберкулина проверяют на здоровых и туберкулезных животных.

Существует три метода туберкулинизации: глазной, внутрикожный и подкожный. Однако подкожный метод применяется в исключительных случаях, так как требует больших затрат труда при контроле за ходом реакции.

Глазная проба (офтальмопроба): вводят 3 – 4 капли туберкулина стерильной пипеткой в конъюнктивальный мешок под нижнее веко здорового глаза.

У животных, больных туберкулезом, спустя 3 – 6 часов наблюдается конъюнктивит с обильным выделением из глаза слизисто-гнойного экссудата, который, вытекая из внутреннего глаза, подсыхает и образует вид шнура.

Положительная реакция длится до 15 – 20 часов. Если после введения туберкулина наблюдается слабо выраженный конъюнктивит с незначительным выделением слизистого или слизисто-гнойного экссудата, реакция считается сомнительной. В этом случае ее повторяют через 3 – 5 дней (туберкулин вводят в тот же глаз) и результат считают окончательным.

Отсутствие изменений конъюнктивы после введения туберкулина рассматривают как отрицательную реакцию.

За ходом реакции наблюдают через каждые 2 час в течение суток, а последний раз – через 48 часов.

Чтобы не было ошибок в реакции, ее проводят в чистом помещении, избегая загрязнения глаза пылью. Животных следует держать на привязи.

Внутрикожная проба: туберкулин вводят внутрь кожи крупному рогатому скоту в области средней трети шеи или в одну из подхвостных складок, телятам и козам – в область лопатки, свиньям и овцам – в кожу основания уха с наружной стороны, курам – в кожу одной из бородок (вторая служит контролем). При этом следует строго соблюдать правила асептики и антисептики. Кроме того, необходимо придерживаться точности введения иглы в толщу кожи, избегая попадания туберкулина под кожу. Признак правильного инъецирования туберкулина в кожу – образование небольшого бугорка.

Перед введением препарата измеряют толщину кожной складки штангенциркулем, а затем это место выстригают и дезинфицируют. После этого двумя пальцами левой руки захватывают складку кожи и по ее длине вводят туберкулин: взрослым животным - 0,2 — 0,25 мл, молодняку до одного года — 0,15; телятам до 3-х месячного возраста — 0,1; курам — 0,1 мл. реакция проявляется через 48 — 72 часа в виде утолщения кожи на месте инъекции препарата. Если утолщение складки кожи 8 мм и больше с болезненной припухлостью — реакция считается положительной, утолщение на 5 — 6 мм — сомнительной, а меньше — отрицательной. Животным с сомнительной или отрицательной реакцией туберкулин вводят повторно через 72 часа в то же самое место и реакцию читают, спустя 24 — 48 часов после введения препарата. Усиление или ослабление наблюдавшихся признаков указывает на положительную или отрицательную реакцию.

Подкожная проба заключается в введении 1 мл туберкулина под кожу. Препарат вводят с таким расчетом, чтобы через 8 часов после его введения можно было измерить температуру. Измеряют ее через каждые 2 часа до 22 часов, считая с момента введения препарата.

Аллергическое исследование на бруцеллез.

Для этой цели применяют биопрепараты абортин и бруцеллизат.

• Абортин представляет собой суспензию бруцелл в стерильном физиологическом растворе, убитых кипячением, с содержанием 2-ух миллиардов микробных тел (по оптическому стандарту). Этот препарат используют для аллергической диагностики бруцеллеза у молодняка крупного рогатого скота в возрасте до 1 года в порядке, предусмотренном Инструкцией по борьбе с бруцеллезом сельскохозяйственных животных. Абортин вводят внутрикожно с внутренней стороны одной из подхвостных складок в дозе 0,2 мл. место инъекции дезинфицируют денатурированным спиртом или 2% раствором карболовой кислоты. При правильном введении препарата в кожу образуется бугорок с горошину.

У животных, больных бруцеллезом, реакция может наступить уже в первые сутки после введения, а явно выраженной она становиться через 48 — 72 часа.

При положительной реакции кожная складка по сравнению с контрольной сильно утолщается с уплотнением в центре. Слабо выраженный отек считают за сомнительную реакцию. При отрицательной реакции никаких изменений нет. Всех животных, давших сомнительную реакцию, выделяют в особую группу и через месяц повторно исследуют, но абортин вводят в хвостовую складку с другой стороны. Животных, давших дважды сомнительную реакцию, выделяют в группу положительно реагирующих.

• Бруцеллизат представляет собой бесцветный прозрачный раствор специфических веществ, извлеченных из бруцеллезных микробов. Его применяют для аллергической диагностики бруцеллеза у овец и коз в соответствии с инструкцией по борьбе с бруцеллезом сельскохозяйственных животных.

Бруцеллизат вводят внутрикожно как и Абортин, в дозе 0,2 мл с соблюдением правил асептики и антисептики. Учет реакции проводят через 42 — 48 часов путем осмотра и прощупывания места инъекции. У животных, больных бруцеллезом, наблюдается воспалительная реакция (краснота, припухлость, отечность), чего не бывает у здоровых животных. Положительная реакция характеризуется появлением на месте введения препарата хорошо выраженной отечности, ясно видной при осмотре.

Слабо выраженная отечность, которая обнаруживается лишь при прощупывании и путем сравнения со складкой кожи на другой стороне, говорит о сомнительной реакции. При отрицательной реакции никаких изменений не наблюдается. Животных, положительно реагирующих на бруцеллизат, из отары изолируют, а всем остальным овцам, давшим сомнительную и отрицательную реакцию, препарат инъецируют повторно в той же дозе и в то же место. После вторичного введения бруцеллизата реакцию учитывают через 24 часа.

Овец, давших сомнительную реакцию, выделяют в отдельную группу и повторно исследуют через 30 дней.

Аллергические исследования на сап.

Для этой цели применяют маллеиновые пробы — глазную, подкожную и интрапальпебральную (в кожу века). Самой простой из всех проб, но в то же время и весьма ценной является глазная. Она легко выполнима в практических условиях и улавливает как активные (свежие), так и скрытые (латентные) формы сапа. В связи с этим ее используют для массовых исследований лошадей на сап.

Маллеин готовят путем выращивания возбудителя сапа на мясопептонном бульоне с добавлением 4 — 5% глицерина при температуре 37⁰ в течение четырех месяцев. Затем микробную культуру убивают (нагреванием в автоклаве), осаждают и пропускают через бактериальные фильтры, после чего фильтрат разливают в специальные ампулы. Полученный таким образом биопрепарат представляет собой стерильную прозрачную жидкость, содержащую только продукты жизнедеятельности сапных микробов, которые при введении сапной лошади и вызывают специфическую реакцию.

• Глазная проба: маллеин глазной пипеткой вводится в конъюнктиву здорового глаза в количестве 3 — 4 капель. Если лошадь больна сапом, то через 6 — 9 - 12 часов появляется местная реакция в виде покраснения, опухания, образования на краю нижнего века гнойного шнурка. Интенсивность реакции может быть различной, но для положительной реакции необходимо наличие конъюнктивита и гнойного экссудата. При сомнительной реакции появляется также конъюнктивит, но вместо гнойного экссудата отмечают слезотечение и выделение слизи.

При массовой маллеинизации на сборных пунктах наблюдают за реакцией в течение 12 часов через каждые 3 часа после введения в глаз маллеина, а в хозяйствах, кроме того, еще через 24 часа , так как возможны случаи запоздалой реакции.

• Подкожная проба. Перед введением маллина у лошади в течение двух дней измеряют температуру и выводят среднюю. Препарат инъецируют под кожу в области шеи в количестве 1 мл. при этом наблюдается местная и общая термическая реакция, поэтому через 6 — 8 часов после инъекции каждые 2 часа измеряют температуру. Местная реакция сопровождается появлением припухлости и болезненности на месте введения препарата, а общая — повышением температуры тела животного. При общей термической реакции температура поднимается через 6 — 8 часов после инъекции; через 12 — 16 часов она достигает 40⁰ и выше, а через следующие 6 — 8 часов начинает снижаться. Бывают случаи, когда через 30 — 36 часов температура незначительно повышается. Кроме подъема температуры, при положительной реакции наблюдается угнетенное состояние лошади, потеря аппетита, учащение дыхания и пульса. Положительной реакцией считается, если:

• если температура поднимается до 40⁰ и выше, но ниже 39,6⁰;

• температура не достигает 39,6⁰, но выше 39⁰, при одновременно слабо выраженной местной реакции.

Полное отсутствие местных признаков (даже при подъеме общей температуры выше 40⁰) считается сомнительной реакцией.

Подъем температуры ниже 39⁰ считается за отрицательную реакцию. Подкожная туберкулинизация применяется редко, так как требует больших затрат времени.

• Интрапальпебральная проба применяется очень редко.