Характеристика возбудителя
Заболевания лошадей вызывают герпесвирусы трех типов: Equine herpesvirus type 1 – вирус классической ринопневмонии лошадей (вирус Долла), шт. Kentucky D; Equine herpesvirus type 2 - возбудитель коитальной экзантемы (Equine coital exanthema) представлен шт. EHV-2, HKV-2, HBM-7, HKV-4; Equine herpesvirus type 3 - возбудитель цитомегалоподобной инфекции лошадей (Equine cytomegalolike virus) представлен шт. LK-Plummer-2.
Вирусы типов 2 и 3 клеточно связанные, вызывают ЦПД в культуре клеток почки эмбриона лошади, ягненка и кролика с образованием внутриядерных включений. Шт. EHV-2, HKV-2, HKV-4 образуют синцитий. Equvine herpesvirus type 1 впервые выделили Димок и Эдвардс. Вирус РПЛ (EHV-1) имеет 2 подтипа: ПТ-1 и ПТ-2. Вирус ПТ-1 выделяли из абортированных плодов и новорожденных жеребят, а ПТ-2 - при респираторном заболевании. ПТ-2 в отличие от ПТ-1 не репродуцируется в культуре клеток эмбриона кошек и морских свинок, почки кролика и теленка, не выявлялся в лейкоцитах крови лошадей, слабо размножается и не выделяется из носоглотки, не вызывал аборта у жеребых кобыл после интраназального введения.
Морфология и химический состав. Вирион содержит центральное ядро размером 60 нм, светлую зону и пограничную мембрану; диаметр вириона около 100 нм. В культуре клеток почки хомяка через 15-18 ч после заражения обнаруживаются вирусные частицы 3-х типов: мелкие (40 нм), средние (до 100 нм), крупные (до 160 нм); в цитоплазме и вне клеток бывают частицы до 220 нм.
Вирионы могут быть с оболочкой и без оболочки. Используя «мягкие» детергенты или обрабатывая ультразвуком, удавалось отделить оболочку вириона. Вирионы, лишенные оболочки, отличаются от частиц с оболочками размерами и плавучей плотностью. Крупные вирусные частицы с оболочкой встречаются в ядре единично, в цитоплазме чаще, а вне клеток в большом количестве.
С помощью электрофореза изучен полипептидный состав оболочечных и безоболочечных вирионов, а также их оболочек. В вирионах с оболочками идентифицировано 20 полипептидов с мол.м. от 115 до 13000 Д. Безоболочечные вирионы содержали 14 полипептидов, а сами оболочки 3 полипептида. При электрофорезе полных вирионов обнаружено 3 зоны, содержащие липопротеид, и 4 зоны - гликопротеин. По-видимому, все они имеют оболочечное происхождение, так как в безоболочечных вирионах не выявлялись.
Устойчивость. Вирус чувствителен к изменению концентрации водородных ионов. Однако инфекционность его сохраняется при сравнительно широких колебаниях рН. Оптимальный для его хранения рН 6-6,7; при рН ниже 4 и выше 10 вирус быстро инактивируется. Он лучше сохраняется при 4-6°С, хуже - при 20°С. В культуральной жидкости остается вирулентным при 56°С до 10 мин, при 50°С - 20-30 мин, при 37°С - от 1,5 до 7 сут, при 4°С – 7-8 мес, при -10-18°С - 12-14 мес. В инфицированной ткани, замороженной при -18-20°С, сохраняет активность до 2 лет. В тканевых суспензиях, приготовленных на солевых р-рах (рН 7-7,4) с 20% нормальной лошадиной сыворотки, он активен при 4˚С не менее 2 нед.; в буферном р-ре без добавления сыворотки вирус быстро инактивируется.
Вирус хорошо консервируется 50%-ным р-ром глицерина, оставаясь активным при 4°С 5 мес. Дезоксихолат натрия в разведениях 1:100 и 1:1000 при 22-24°С инактивирует его в течение 45-60 мин; 1%-ный этанол, метиловый спирт, гепарин или ЕДТА не влияют на инфекционность культурального вируса. Он чувствителен к действию трипсина, эфира и хлороформа.
АГ структура детально не изучена. КС АГ можно разделить на S (растворимый) и V (вирусный).
Спектр патогенности в естественных условиях. Болеют лошади всех возрастов и пород независимо от пола, а также ослы, мулы и пони. Человек, КРС, мелкий рогатый скот и свиньи к вирусу не восприимчивы.
Локализация вируса. Вирус проникает в организм главным образом через органы дыхания и локализуется в верхних дыхательных путях и легких, вызывая симптомы ринита или ринопневмонии. Из первичного места размножения (слизистых оболочек дыхательных путей и конъюнктивы) после фазы вирусемии, соответствующей периоду лихорадки и лейкопении, вирус попадает в матку, плод и околоплодные оболочки, где размножается, вызывая патологический процесс, приводящий к аборту. Заражение плода происходит медлен, поскольку аборт наступает через 1-4 мес. после респираторной формы болезни. Вирус оладает тропизмом к эпителиальной и эндотелиальной тканям.
Переболевшие ринопневмонией животные могут выделять вирус во внешнюю среду с истечениями из носа и половых органов до 2 мес. ГВЛ типа 1 экскретируется с выделениями из носа, являясь источником заражения для других лошадей (8).
АГ активность. Вирус обладает выраженной АГ активностью. У реконвалесцентов обнаруживают КСА и ВНА. У переболевших кобыл через 10-14 дн после заболевания индекс нейтрализации сывороток колебался от 3 до 5 lg. У экспериментально зараженных лошадей ВНА образовывались медленнее, но сохранялись дольше, чем КСА.
Экспериментальная инфекция. Может быть воспроизведена на молодых жеребятах, жеребых кобылах, беременных крольчихах и морских свинках.
Культивирование. Для культивирования и пассирования вируса используют мышат-сосунков и хомячков (внутрибрюшинное заражение), КЭ 8-12-дн возраста (в желточный мешок, аллантоисную полость или амнион), а также культуры клеток почечной ткани различных животных (лошади, теленка, поросенка, собаки, овцы), тестикулов бычков или их эмбрионов. Наиболее чувствительна культура клеток почки лошади, особенно молодого жеребенка. Вирус размножается также в культурах некоторых перевиваемых линий клеток.
ГА и ГАд свойства. Вирус агглютинирует эритроциты лошади и морской свинки при 4 и 37˚С. Активность ГА не связана с липидами, он является интегральной частью вирусной оболочки, а не растворимым АГ, как предполагалось раньше. Он не инактивируется при 56°C, сохраняется при 4 и 37°С, а также при воздействии нейраминидазы холерного вириона, не нейтрализуется сыворотками лошадей-реконвалесцентов, но нейтрализуется гипериммунными сыворотками крови кроликов. ГА-активность, обусловленная участи сульфидных групп, разрушается протеолитическими ферментами, резистентна к действию растворителей липидов и фосфолипазе С.