Реакция связывания комплемента

Реакция связывания комплемента заключается в том, что при соединении

антигена с антителом образуется иммунный комплекс, к которому через Fc-

фрагмент антител присоединяется комплемент.

Если комплекс антигена с антителом не образуется, то комплемент остается свободным. Свободный комплемент выявляется добавлением к смеси гемолитической системы, состоящей из

эритроцитов барана и антител против них.

Положительная реакция – отсутствие гемолиза в результате связывания комплемента с комплексом антиген+антитело.

Отрицательная реакция – наличие гемолиза в результате связывания комплемента с

комплексом эритроцит+антиэритроцитарное антитело.

Компоненты реакции:

• - сыворотка крови здорового донора;

• - сыворотка крови больного гонореей (в разведении 1:5);

• - лизат гонококков (антигенный компонент реакции - инактивированный

• возбудитель гонореи);

• - комплемент в разведении, соответствующем рабочей дозе. Комплемент

• получают из сыворотки крови морской свинки. Титром комплемента является его

• минимальная доза, которая в присутствии гемолитической сыворотки вызывает4

• полный гемолиз эритроцитов. Рабочая доза комплемента, используемая при

• постановке РСК, на 30% больше его титра;

• - гемолитическая система - взвесь эритроцитов барана, обработанных

• кроличьими антителами к эритроцитам барана.

• - промывочный раствор.

РСК ставят в двух пробирках – опытной и контрольной. В опытную пробирку

внести 0,5 мл сыворотки крови больного гонореей, в контрольную внести 0,5 мл

сыворотки крови здорового донора, в обе пробирки внести по 0,5 мл лизата

гонококков, а также по 0,5 мл комплемента. После каждой операции необходимо

промывать пипетку в промывочном растворе. Пробирки поместить в термостат при

температуре 37°С на 30 минут. После инкубации в обе пробирки внести по 1,0 мл

гемолитической системы. Пробирки встряхнуть и поместить в термостат при

температуре 37°С на 30 минут.

При положительной реакции в опытной пробирке

отмечают задержку гемолиза (жидкость бесцветная и осадок эритроцитов), в

контрольной пробирке – гемолиз эритроцитов.

25. Взаимодействие антигена с антителом in vitro. Серологические реакции. Реакция нейтрализации токсина антитоксином.

Реакции антиген-антитело, происходящие in vivo – это важнейший защитный

механизм устранения чужеродных антигенов из организма путем образования

иммунных комплексов. Серологическими реакциями называются реакции

антиген-антитело, происходящие in vitro (в пробирке). Они используются для

количественного и качественного определения антигенов и антител в исследуемом

материале.

При постановке серологических реакций учитывают следующие условия:

наличие изотонического раствора (электролита), реакция рН (близкая к

нейтральной) и температура среды (от 20 до 37°С).

Серологические реакции применяются с целью решения следующих задач:

- для выявления неизвестного антигена (микроорганизма, белка и т.д.);

при этом используют диагностические иммунные антисыворотки, которые

получают путем многократной иммунизации лабораторных животных

соответствующими антигенами;

- для определения наличия и титра антител в сыворотке крови;

обнаружение антител проводят с использованием специальных антигенных диагностикумов (взвеси эталонных инактивированных микроорганизмов).

Таким образом, в серологических реакциях один из двух основных

компонентов (антигены или антитела) всегда должен быть известным.

В прямых серологических реакциях результат взаимодействия антигенов с

антителами наблюдается непосредственно по изменению оптических свойств

раствора (образование хлопьев, помутнение, опалесценция). К прямым

серологическим реакциям относятся реакции агглютинации, преципитации и

флоккуляции.

В непрямых серологических реакциях для визуализации результата

взаимодействия антигенов и антител используются индикаторные системы5

(эритроциты, комплемент, лабораторные животные). К непрямым серологическим

реакциям относятся реакция связывания комплемента, реакция непрямой

гемагглютинации, реакция нейтрализации токсина антитоксической сывороткой, и

др.