Реакция нейтрализации токсина антитоксической сывороткой

Реакция нейтрализации (РН) используется для определения в исследуемом

материале наличия бактериальных токсинов.

Индикаторной системой служат лабораторные животные, которых заражают смесью токсина с антитоксической сывороткой.

Положительная реакция – отсутствие повреждающего действия токсина на животное (нейтрализация токсина).

Отрицательная реакция – гибель животного под действием токсина.

Постановка РН осуществляется в 2 этапа (первый этап – in vitro, второй этап -

in vivo). Смешивают исследуемый материал с антитоксической сывороткой,

инкубируют в течение часа. Смесь материала с сывороткой вводят в организм

лабораторных животных (опытная группа). Одновременно исследуемый материал

(без антисыворотки) вводят контрольной группе животных. Учет результатов РН

проводят после гибели животных контрольной группы.

Если при этом в опытной группе животные не погибают, реакцию считают положительной: антитела в этом случае нейтрализуют биологическое действие токсина.

26. Взаимодействие антигена с антителом in vitro. Серологические реакции. Реакция нейтрализации вирусов.

Реакции антиген-антитело, происходящие in vivo – это важнейший защитный

механизм устранения чужеродных антигенов из организма путем образования

иммунных комплексов. Серологическими реакциями называются реакции

антиген-антитело, происходящие in vitro (в пробирке). Они используются для

количественного и качественного определения антигенов и антител в исследуемом

материале.

При постановке серологических реакций учитывают следующие условия:

наличие изотонического раствора (электролита), реакция рН (близкая к

нейтральной) и температура среды (от 20 до 37°С).

Серологические реакции применяются с целью решения следующих задач:

- для выявления неизвестного антигена (микроорганизма, белка и т.д.);

при этом используют диагностические иммунные антисыворотки, которые

получают путем многократной иммунизации лабораторных животных

соответствующими антигенами;

- для определения наличия и титра антител в сыворотке крови;

обнаружение антител проводят с использованием специальных антигенных диагностикумов (взвеси эталонных инактивированных микроорганизмов).

Таким образом, в серологических реакциях один из двух основных

компонентов (антигены или антитела) всегда должен быть известным.

В прямых серологических реакциях результат взаимодействия антигенов с

антителами наблюдается непосредственно по изменению оптических свойств

раствора (образование хлопьев, помутнение, опалесценция). К прямым

серологическим реакциям относятся реакции агглютинации, преципитации и

флоккуляции.

В непрямых серологических реакциях для визуализации результата

взаимодействия антигенов и антител используются индикаторные системы5

(эритроциты, комплемент, лабораторные животные). К непрямым серологическим

реакциям относятся реакция связывания комплемента, реакция непрямой

гемагглютинации, реакция нейтрализации токсина антитоксической сывороткой, и

др.

Реакция нейтрализации вируса (рн)

Реакция нейтрализации вируса (РН) является одной из основных серологических реакций, широко используется для диагностики различных вирусных болезней, она наиболее специфична и высокочувствительна, служит эталоном при оценке других реакций в вирусологии.

Сущность РН заключается в том, что при вирусных болезнях в крови появляются вирусонейтрализующие антитела, которые при взаимодействии с вирусом (при смешивании вируса со специфической сывороткой), как в организме так и вне его (in vitro), способны обезвреживать его инфекционные свойства и способность вызывать заболевание у чувствительных лабораторных животных, куриных эмбрионов или вызывать цитопатогенные действия (ЦПД) в культурах ткани.

Ставят РН на лабораторных животных, куриных эмбрионах или культурах ткани в зависимости от того, какая из этих живых моделей является чувствительной для данного вируса.

Обычно используют ту модель, на которой выделяли вирус и к которой вирус уже адаптировался и проявляет четко выраженный инфекционный эффект. Механизм реакции до сих пор окончательно не выяснен. Некоторые авторы его рассматривают как явление, аналогичное воздействию антитоксина на токсин, другие же - как блокаду рецепторов вируса и восприимчивых клеток антителами сыворотки.

РН можно ставить в двух вариантах:

1)с постоянной дозой вируса и разными разведениями (дозами) сыворотки.

Этот вариант чаще используется для диагностики вирусных болезней;

2) с постоянной дозой разведенной или неразведенной сыворотки и разными дозами вируса (готовят разные разведения вируса).

Для постановки реакции в том и другом варианте в пробирки вносят в равных объемах вирус и специфическую сыворотку, смесь выдерживают в контакте 1-2 часа в условиях термостата (37-38° С) или 18 часов в холодильнике при температуре +2° +4° С. После контакта смесь вводят для заражения в избранную живую систему, чувствительную для данного вируса. В качестве контролей служат аналогичные живые системы, которым вводят вирус без сыворотки и смесь вируса с нормальной (неиммуной) сывороткой.

Результаты реакции учитываются через определенный срок (через 5-12 дней, в зависимости от вида вируса и живой системы) по отсутствию гибели животных или куриных эмбрионов и по отсутствию ЦПД в культурах ткани в случае введения смеси вируса со специфической сывороткой.

Преимуществом РН является то, что ее можно выполнять со всеми вирусами и на всех биологических моделях, использованных для выделения вируса.

47