Работа 36. Определение кислотности желудочного сока диагностическим набором «Ацидотест»

Реактивы. 25% соляная кислота, набор «Ацидотест».

Оборудование. Штатив с пробирками (диаметр 11-13 мм), пипетки на 5 мл, мерные колбы на 200 мл.

Материал. Контрольная и опытная моча.

Метод основан на освобождении из принятого тест-драже красящего вещества, количество которого зависит от кислотности желудочного сока.

Ход определения. После опорожнения мочевого пузыря обследуемый принимает 1-2 таблетки кофеина, который повышает диурез и усиливает желудочную секрецию. Через 1 час проводится опорожнение мочевого пузыря и полученная моча обозначается как «контрольная». После этого с небольшим количеством воды, без разжевывания, принимается 3 тест-драже. Через 1,5 часа повторно следует опорожнение мочевого пузыря и моча обозначается как «1,5-часовая». Как контрольная моча, так и полученная через 1,5 часа, разбавляется водой до 200 мл. Разбавленную мочу (контрольная и опытная) вносят в количестве 5 мл, добавляют 5 мл 25% раствора соляной кислоты. В пробирке, содержащей 1,5-часовую мочу (опытная проба) в присутствии красящего вещества, появляется окрашивание алого цвета. Интенсивность окрашивания тут же сравнивают с цветной шкалой, т.к. при стоянии цвет изменяется.

Оценка результатов. Совпадение развившегося окрашивания разделению, обозначенному буквой «А» на цветной шкале указывает на наличие свободной соляной кислоты и нормальную кислотность желудочного сока, при более интенсивной окраске – гиперацидность, при окрашивании, соответствующему между разделениями «А» и «В» обозначает гипоацидность.

Оформление работы. Сопоставить развившееся окрашивание с цветной шкалой и сделать вывод о характере кислотности желудочного сока.

Работа 37. Гидролиз белка ферментами пищеварительного тракта

Переваривание белка происходит с участием протеолитических ферментов желудка (пепсин и гастриксин) и кишечника (трипсин, химотрипсин, карбоксипептидазы А и В, аминопептидаза, эластаза и др.). Каждый из ферментов специфически гидролизует пептидные связи, образуемые определенными аминокислотами в полипептидной цепи перевариваемого белка (см. учебник, с.178-181). Оптимум рН действия протеиназ желудка находится в кислой области и равен 1,5-2,0 для пепсина и 3,0-3,5 для гастриксина, в то время как протеолитическая активность ферментов кишечника максимальна при рН 7,6-8,5.

Исследование активности протеолитических ферментов проводится путем анализа скорости гидролиза добавленного белка или определения количества образующихся в ходе реакции пептидов и свободных аминокислот.

Реактивы. Фибрин^*; соляная кислота, 0,05 и 0,1 М растворы; гидроксид натрия, 0,4%-ный раствор; карбонат натрия, 0,4%-ный раствор; лакмусовая бумага.

Оборудование. Штатив с пробирками; пипетки вместимостью 1 и 2 мл; термостат, отрегулированный на 38˚С.

Материал.

1. Пепсин, свежеприготовленный 0,1%-ный раствор в 0,05 М соляной кислоте.

2. Трипсин, кристаллический препарат во флаконах, или панкреатин, порошок. Перед употреблением готовят 0,1%-ный раствор.

а. Демонстрация гидролиза белка под действием пепсина. Метод основан на визуальном наблюдении скорости гидролиза белка пепсином, определяемой по растворению кусочков фибрина.

Ход определения. Берут пять пробирок и вносят в первую 1 мл раствора пепсина, во вторую – предварительно прокипяченного раствора пепсина, в третью – раствора соляной кислоты (0,05 М), в четвертую и пятую – предварительно нейтрализованного гидроксидом натрия раствора пепсина.

Во все пробирки, кроме пятой, помещают одинаковые небольшие кусочки фибрина и ставят пробы на 20-30 мин в термостат при 38˚С, после чего отмечают изменения, произошедшие с волокнами фибрина в первых четырех пробирках.

Пятую пробирку охлаждают и нейтрализуют ее содержимое раствором соляной кислоты по лакмусовой бумажке. Затем приливают в пробирку 1 мл 0,1 М раствора соляной кислоты и добавляют небольшой кусочек фибрина. Пробу вновь помещают в термостат при 38˚С и через 20-30 мин отмечают изменения волокон фибрина.

б. Демонстрация гидролиза белка под действием трипсина. Основа метода та же, что и при изучении действия пепсина.

Ход определения. Берут три пробирки и наливают в одну из них 2 мл раствора карбоната натрия, в другую – дистиллированной воды и в третью – раствор соляной кислоты (0,1 моль/л). В первую и третью пробирки добавляют по 1 мл раствора трипсина (или панкреатина) и во вторую – 1 мл предварительно прокипяченного трипсина (или панкреатина). Перемешивают пробы встряхиванием.

В каждую пробирку помещают по одинаковому кусочку фибрина и ставят их в термостат при 38˚С на 10 мин, следя за растворением фибрина. Отмечают изменения, происходящие с фибриновыми волокнами в ходе инкубации.

Оформление работы. Результаты опытов оформить в виде таблицы.

№ пробы	Препарат фермента	Субстрат	Условия опыта			Изменения фибрина
			рН среды	кипячение

В выводах указать оптимальные условия для действия изученных протеолитических ферментов и практическое значение исследований.

Практическое значение работы. Переваривание белка в желудочно-кишечном тракте зависит не только от количества образующихся протеолитических ферментов, но и от условий среды, в которых они действуют. При гипохлоргидрии или анацидном гастрите имеются неблагоприятные условия (недостаток соляной кислоты) для гидролиза пищевого белка пепсином. Применение щелочных растворов (питьевая сода) при данных патологических состояниях приводит к разрушению выделяющегося клетками желудка пепсина. Напротив, гиперхлоргидрия обусловливает более медленную нейтрализацию кислого желудочного содержимого, поступающего в кишечник, и как следствие этого менее эффективную активацию проферментов и переваривающего их действия на белки и пептиды пищи.