Приложения
Приложение 1. Устройство микроскопа и уход за ним
Прямая световая микроскопия позволяет рассматривать окрашенный или неокрашенный объект путем транслюминесцентного просвечивания, т.е. свет фокусируется на объекте, который виден на ярком фоне.
Микроскоп имеет два основных компонента: система линз и механическая часть. Система линз включает конденсор под предметным столиком, объективы и окуляры.
Конденсор не увеличивает изображение, а концентрирует луч света на проекции образца и, в конечном счете, влияет на качество изображения. Диафрагма, расположенная под самим конденсором, контролирует диаметр пучка света, проецируемого на объект. Контрастность изображения может быть усилена уменьшением диафрагмы конденсора, т.к. тем самым уменьшается количество рассеянного света, достигающего объекта. Особенно это используется для влажных и равномерно окрашенных препаратов, но это приводит к сужению поля зрения. Конденсор не следует двигать с целью настройки интенсивности света, за исключением случаев, когда толщина стекол различна.
Объективы — это второй важный компонент сложной системы линз микроскопа. Единственное назначение объектива — это собирать свет, отражаемый объектом, и давать увеличенное изображение на некотором расстоянии выше линзы. Объективы, применяемые при микроскопии препаратов, обычно включают 4-кратную сканирующую линзу, 10-кратную промежуточную линзу, 40-кратную линзу большого увеличения и линзу со 100-кратным увеличением с использованием иммерсионного масла.
Третья система линз — окуляры, которые увеличивают изображение в 10–15 раз.
Общее увеличение системами линз в микроскопе определяется умножением увеличения объективом у револьверной оправы микроскопа на увеличение окулярным объективом.
Правильноеиспользованиемикроскопаиправильныйуходзаним являетсяважнымфактором,определяющимкачествомикроскопиии интерпретацию результатов. Микроскоп должен храниться выключенным и накрытым. Перед началом работы следует убедиться, что все объективы чистые и расстояние между окулярами соответствует расстоянию глаз исследователя. Для очистки оптических частей не используйте грубые материалы, лучше для этой цели применять специальные салфетки. Некоторые изогнутые оптические поверхности
52 |
А. М. Савичева, Е. В. Соколовский, М. Домейка |
могут быть почищены тампоном из ткани. Остатки иммерсионного масла следует удалять после каждой микроскопии. Для лучшего удаления иммерсионного масла следует использовать смесь эфира с этиловым спиртом в соотношении 85:15 или петролейный эфир. Ни в коем случае нельзя пользоваться чистым спиртом или ацетоном. Эти жидкости растворяют цементирующий материал, которым закреплены линзы.
Приложение 2. Возможные проблемы микроскопии
иих решение
1.Никакого изображения не появляется во время установки расстояниямеждуобъективомипредметнымстекломприпроведениимикроскопии влажного мазка — диафрагма конденсора не закрыта.
2.Появление кристаллов во влажном мазке — влажный мазок стал слишком сухим. Необходимо просматривать препарат сразу после взятия материала.
3.Слишком резкое появление очертаний клеток и слишком мало света при настройке максимального света — диафрагма конденсора закрыта.
4.Объект нечеткий и не удается его сфокусировать:
—предметное стекло перевернуто мазком вниз;
—на препарате осталось высохшее иммерсионное масло после предыдущего исследования;
—иммерсионное масло нанесено на влажное предметное стекло;
—мазок приготовлен неправильно — слишком толстый;
—иммерсионное масло могло попасть на линзу конденсора;
—иммерсионное масло могло попасть на линзу объектива;
—грязное покровное стекло;
—толстое покровное стекло.
5.Появляются движущиеся пузыри, что мешает фокусированию:
—при микроскопии используются разные порции иммерсионного масло;
—иммерсионное масло нанесено на влажное предметное стекло;
—воздушные пузырьки в иммерсионном масло.
6.Неравномерное освещение (яркая часть с одной стороны):
—конденсор не отцентрован;
—объективы не зафиксированы в правильном положении.
7.Слишком яркое изображение:
—необходимо уменьшить яркость освещения реостатом или фильтром; не следует использовать для этого диафрагму.
Порядок проведения микроскопического исследования мазков из урогенитального тракта |
53 |
8.Наличие посторонних частиц:
—пыль на окуляре, объективе, предметном стекле или конденсоре. Необходимо подвигать окулярами или конденсором. Если частицы двигаются, очистите окуляр или конденсор.
Приложение 3. Оборудование и материалы
Инструменты, приборы и оборудование
Световой микроскоп с набором окуляров ×4, ×7, ×10 и объекти-
вов ×10, ×20, ×40, ×100.
Материалы
Бактериологические петли 1 и 10 мкл для взятия материала. Зонды-пробоотборники или специальные щеточки для взятия материала.
Ватные или дакроновые тампоны для взятия материала. Ватные тампоны для удаления слизи.
Зеркала гинекологические.
Специальные предметные стекла, пипетки на 30 мкл. Стеклянный стакан на 200 мл, покровные стекла 24×24. Иммерсионное масло.
Спирт медицинский. Петролейный эфир. Физиологический раствор.
Краситель метиленовый синий по Леффлеру. Фильтровальная бумага.
Таймер.
Объективы ×10, ×20, ×40, ×100. Окуляры ×4, ×7, ×10.
Перчатки резиновые. Дезинфицирующие растворы.
Приложение 4. Реактивы для окрашивания
Реактивы для окрашивания метиленовым синим по Леффлеру
1.Насыщенный спиртовой раствор метиленового синего 30 мл.
2.Вода дистиллированная 100 мл.
3.1 % водный раствор гидроксида калия (КОН) 1 мл.
Приложение 5. Безопасность персонала
Со всеми тестируемыми образцами, а также оборудованием и материалами, находящимися с ними в контакте, следует обращаться как с потенциально зараженными объектами:
54 |
А. М. Савичева, Е. В. Соколовский, М. Домейка |
—работать в медицинской одежде и хирургических перчатках;
—при попадании исследуемого материала на кожу и слизистые, немедленно промыть водой с мылом и обработать антисептиком;
—все твердые отходы замачивать в 3 % растворе хлорамина или
в6 % растворе перекиси водорода при комнатной температуре
втечении 3-х часов;
—инструменты и оборудование до и после работы протирать 70 % спиртом.
Приложение 6. Форма бланка заключения по результатам микроскопического исследования
Приложение 6
Направление на исследование микроскопическим методом материалов, взятых у мужчин
«____»_____________200 г.
Ф.И.О.0000000000000000000000 |
||||||
Направившее учреждение_____________________№ ист._________ |
||||||
Материал_____________________ Диагноз_____________________ |
||||||
Вид исследования: |
|
|
Рег.№ |
|||
(отметить |
n) |
|
|
|||
n |
Микробиоценоз, gN, трихомонады |
|
|
|
||
|
|
Врач: |
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
|
|
Результат исследования: |
||||
|
|
|
|
|
|
|
УРЕТРА |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
Лейкоциты |
|
|
□ < 5 |
□ > 5 |
||
Микроорганизмы |
|
□ есть |
□ нет |
|||
Внутриклеточные и внеклеточные |
|
□ обнаружены |
||||
Гр.(-) диплококки |
|
□ не обнаружены |
||||
Трихомонады |
|
|
□ обнаружены |
|||
ПРЯМАЯ КИШКА |
|
|
|
|||
Внутриклеточные и внеклеточные Гр.(-) |
|
□ обнаружены |
||||
диплококки |
|
|
□ не обнаружены |
|||
Исследование выполнил: |
Подпись: |
_______________________ |
«_____»____________200 г. |
Приложение 6
Направление на исследование микроскопическим методом материалов, взятых у женщин
«____»_____________200 г.
Ф.И.О.0000000000000000000000 |
||||||||
Направившее учреждение_____________________№ ист._________ |
||||||||
Материал_____________________ Диагноз_____________________ |
||||||||
Вид исследования: |
|
|
|
Рег.№ |
||||
(отметить |
n) |
|
|
|
||||
n |
|
Микробиоценоз, gN, трихомонады |
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Врач: |
|
|
|
|
|
|
|
|
Результат исследования: |
|
||||
ВАГИНА |
|
|
|
|
|
|
||
Соотношение лейкоцитов Л) |
|
□ Л < Э |
|
□ Л >Э |
||||
к клеткам плоского эпителия (Э) |
|
Л : Э равно |
___:1 |
|||||
Лактобациллы и другие |
|
□ только лактобациллы |
||||||
микроорганизмы |
|
□ лактобациллы превалируют |
||||||
|
|
|
|
|
□ лактобациллы в меньшинстве |
|||
|
|
|
|
|
□ преобладают др. микроорганизмы |
|||
|
|
|
|
|
□ микроорганизмов нет |
|||
«Ключевые» клетки |
|
□ обнаружены □ не обнаружены |
||||||
Дрожжеподобные грибы |
|
□ дрож. клетки |
□ псевдомицелий |
|||||
|
|
|
|
|
□ не обнаружены |
|||
Трихомонады |
|
|
□ обнаружены □ не обнаружены |
|||||
ЦЕРВИКАЛЬНЫЙ КАНАЛ |
|
|
|
|
||||
Клетки цилиндрического эпителия |
|
□ есть |
□ нет |
|||||
Клетки плоского эпителия (вагины) |
|
□ есть |
□ нет |
|||||
Лейкоциты (Л) |
|
□ < 10 |
□10-20 |
□ >20 |
||||
Слизь |
|
|
|
□ есть |
□ нет |
|||
Внутриклеточные и внеклеточные |
|
□ обнаружены |
|
|||||
Гр.(-) диплококки |
|
□ не обнаружены |
||||||
УРЕТРА |
|
|
|
|
|
|
||
Лейкоциты (Л) |
|
□ < 10 |
□ >10 |
|||||
Микроорганизмы |
|
□ есть |
□ нет |
|
||||
Внутриклеточные и внеклеточные |
|
□ обнаружены |
|
|||||
Гр.(-) диплококки |
|
□ не обнаружены |
||||||
ПРЯМАЯ КИШКА |
|
|
|
|
||||
Внутриклеточные и внеклеточные Гр.(-) |
|
□ обнаружены |
|
|||||
диплококки |
|
|
□ не обнаружены |
|||||