методика микроскопии в проходящем поле (метод светлого поля)

Метод светлого поля является основным методом исследования объекта в проходящем свете. Для осуществления этого метода необходим микроскоп проходящего света, объективы светлого поля (×4, ×10, ×20, ×40), конденсор, осветитель. Световой поток от источника света направляется в конденсор, затем пучок света равномерно направляется на плоскость препарата. Конденсор создает световой конус, обеспечивающий заполнение светом входного отверстия (апертуру) объектива. Устройство микроскопа и порядок ухода за ним приведены в приложении 1.

Порядок работы:

1.Установить препарат на предметный столик и зафиксировать его положение.

2.Поворотомревольвернойголовкиустановитьобъектив(×4или×10).

3.С помощью макро- и микровинтов получить четкое изображение объекта.

4.Раскрыть апертурную диафрагму конденсора.

5.Поднять конденсор до положения наибольшей яркости освещения в плоскости объекта.

6.Яркость освещения объекта регулировать только диафрагмой конденсора.

Возможныепроблемымикроскопиииихрешение(см.Приложение2).

Смена объективов при проведении микроскопии.

Методы микроскопического исследования имеют целью идентификацию микроорганизмов и подсчет клеток. Эти задачи достигаются просмотром препарата при различных увеличениях с использованием объктивов разной мощности. Смена объектива начинается от маломощного увеличения к высокому, сужая видимую часть поверхности мазка. Это означает, что можно видеть сотни клеток в поле зрения, но ни одного микроорганизма при увеличении ×4, и только несколько клеток, но сотни микроорганизмов при увеличении ×100. Таким образом, очевидно, что каждое следующее увеличение дает возможность определять некоторые мелкие детали и в то же самое время«прячетконтекст»илиокружающиедетали.Чтобынепотерять информацию,поступающуюприкаждомувеличении,исследователь должен удерживать в памяти все увеличения и воссоздавать в воображении весь мазок в мельчайших подробностях. Для этого можно попытаться представить себе процесс проведения микроскопической оценки, поделенный на несколько уровней. Каждый уровень — это разное увеличение. На каждом уровне могут быть сделаны не-

Порядок проведения микроскопического исследования мазков из урогенитального тракта

17

которые заключения (о микроскопических объектах, которые мы можем четко видеть) и некоторые предположения (о микроскопических объектах, которые мы не можем видеть отчетливо). Каждый следующий уровень (или увеличение) подтвердит или опровергнет предположение, возникшее от предыдущего увеличения, поскольку большее увеличение дает четкое изображение предыдущего мелкого объекта, позволяя предположению стать заключением.

Порядок проведения микроскопического исследования:

•Порядок исследования мазков должен быть выбран самим исследователем. Можно начать с нативного влажного мазка, дожидаясь подсыханиямазка,окрашенногометиленовымсинимилипоГраму. И наоборот, можно начать с окрашенного препарата, дожидаясь, пока движение жидкости под покровным стеклом не прекратится. Делая этот выбор, следует учитывать два момента: выбранный порядокисследованиямазковдолженэкономитьвремяибытьнаиболее удобным для получения информации о пациенте.

•Исследование влажного мазка. Поместите стекло на предметный столикмазкомвверх.Следуетвыбиратьдиафрагму,позволяющую полностью провести микроскопию влажного мазка. Если Ваш микроскоп не оснащен диафрагмой, подобного эффекта можно достичь, опуская конденсор. Не забывайте открывать диафрагму после завершения микроскопии влажного мазка.

•Выбор объектива. Микроскопия должна начинаться с наименьшего увеличения. Общая ошибка начинающих — приступать к микроскопии не при малом увеличении или пользоваться малым и средним в течение очень короткого времени. На самом деле, обычно наибольшая часть всей информации поступает при самом малом увеличении. С накоплением опыта становится ясно, что большое увеличение нужно только для подтверждения того, что уже очевидно при малом увеличении. Обычно влажный мазок из влагалища покрывает большую поверхность стекла по сравнению с уретральным или цервикальным мазками, так что удобно начинать микроскопию нативных препаратов, применяя сканирующее увеличение (объектив ×4). Если Ваш микроскоп не оборудован такой револьверной оправой, тогда применяйте объектив ×10. Уретральные и цервикальные мазки обычно занимают меньшую часть поверхности стекла, так что их можно просматривать с применением объектива ×10.

•Под визуальным контролем сбоку устанавливается наименьшее расстояние между предметным стеклом и объективом при помощи макрометрического винта. Затем через окуляр наблюдается

18	А. М. Савичева, Е. В. Соколовский, М. Домейка

появление изображения при поворачивании этого винта в обратном направлении. При помощи микрометрического винта настраивается максимально четкое изображение.

•Настройкасилысвета.Припроведениимикроскопиивлажногомазка можно повысить резкость изображения, настраивая силу света. Если имеется возможность менять силу света на вашем микроскопе, это может быть достигнуто изменением апертуры диафрагмы. Также удобно изменять силу света при смене объектива во время микроскопии мазков, окрашенных метиленовым синим. Маломощныйобъективимеетбольшуюапертуру,такчтодостаточноподавать меньше света и, наоборот, для получения четкого изображения высокомощная револьверная оправа требует больше света.

•Сканированиевсеговлажногомазкапроводитсяспомощьюобъектива ×4. Полезно просмотреть клинический материал, обнаруживая места равномерного распределения клеток и в то же время, отмечая места, где встречаются скопления или некоторые изменения плотности. Если клинический материал распределился равномерно и никаких скоплений не найдено, можно изменить увеличение, рассматривая каждый участок мазка. Если отмечается изменение плотности или появление скоплений, следует попытаться подвинуть край скопления к центру поля зрения и затем изменить увеличение. Это позволит исследователю этот участок увидеть более четко. Следует помнить, что более высокое увеличение «минимизирует» область поля зрения предыдущего увеличения и дает увеличенный вид центральной части. Если определенная область мазка, которую вы хотели бы увеличить, не появляется в поле зрения при большом увеличении, вернитесь к малому увеличению ипопытайтесьподвинутьисследуемыйучастокпрепаратавсамый центр поля зрения, а затем поменяйте объектив.

•Нужно изучать, по меньшей мере, 10 полей зрения, применяя объектив ×10. Это увеличение позволяет идентифицировать эпителиальные клетки и полиморфноядерные лейкоциты.

•Весь клинический материал из одной и той же анатомической области должен рассматриваться вначале при малом увеличении.

•При замене обычно нет необходимости пользоваться макрометрическим винтом.

•Помните, что вы должны применять иммерсионное масло, используя только объективы ×90 или ×100. Если будет нужно перейти от масляной иммерсии к более низкому увеличению, необходимо опустить предметный столик для предохранения других объективов от замасливания.