Методы диагностики:

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД:

Материал для исследования:раневой экссудат, моча, истеч. из влагалища, фекалии, содержимое кишечника, паренхиматозные органы, аборт. плод. Пищевые продукты – при исследовании на свежесть. Корма. Смывы с поверхностей.

Морфология: Полиформные (разной длины) палочки, Гр.-, располагаются в мазке беспорядочно, одиночно, иногда образуют нити. Споры -, капсула -, подвижность ++ (перитрих)- протей феноменально подвижен!!

Культивирование и культуральные свойства: Хорошо растет на простых питательных средах.. На МПБ–интенсивное помутнение, хлопьевидный осадок, на поверхности пленка,запах тухлого мяса.МПА–рост ползучий, вуалеобразный, в виде тонкой, блестящей бело-серой плёнки, покрывающей всю поверхность среды. Для получения чистой культуры делают посев по Щукевичу в конденсационную жидкость на дне скошенного агара – на следующий день протей «поднимается» по скосу, образуя плёнку.

Биохимические свойства. Обладает ярко выраженными протеолитическими свойствами: Выделяет Н₂S, индол, разжижает желатину; расщепляет мочевину, пептонизирует молоко. Расщепляет аминокислотуфенилаланин, что важно для диагностики. Расщепляет многие сахара на средах Гисса, ноне изменяет лактозу и маннит.

Для ограничения ползучего роста протея поверхность питательных сред обрабатывают этиловым спиртом, подсушивают, а также используют элективные среды с желчью и желчными солями (среда Плоскирева).

ДИФФЕРЕНЦИРУЮЩИЕ ТЕСТЫ:

• Посев по Щукевичу в конденсационную воду скошенного агара (ползучий рост)

• Рост на трёхсахарном агаре Олькеницкого (скос малиновый, столбик чёрный)

• Расщепление фенилаланина; зелёное окрашивание при нанесении реактива хлорида железа на агар с фенилаланином.

БИОПРОБА: Б.мышам п/кож или в/брюшинно 0,5 мл бульонной культуры–гибель.

СЕРОДИАГНОСТИКА – РСК; РА со специфическими сыворотками

БИОПРЕПАРАТЫ Диагностические сыворотки. Аг-диагностикумы для РА. Потейные лечебные бактериофаги. Пиобактериофаг.

ООИ СИБИРСКАЯ ЯЗВА

СИБИРСКАЯ ЯЗВА – АНТРАКС - острая инфекционная болезнь животных и людей. Заражение при контакте, при ранениях, укусах насекомых, алиментарно, аэрогенно. Характеризуется признаками септицемии, интоксикации. Условно различают 3 формы с.я.: кожная – образование отёков и карбункулов (нарывов с чёрным центром), кишечная и лёгочная (в этих случаях очаги воспаления образуются в кишечнике или лёгких, быстро возникает септицемия, что ведёт к гибели.) Наиболее восприимчивы к с.язве к.р.с., м.р.с., верблюды, дикие травоядные, лошади. У свиней чаще атипичная форма в виде ангины, плотоядные малочувствит.

КЛАССИФИКАЦИЯ: семействоBacillaceae,родBacillus,

• вид Bacillus anthracis

Факторы вирулентности: образование капсулы и экзотоксина.

Методы диагностики:

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД.

Материал для исследования:Вскрывать трупы при подозрении на сибирскую язву запрещено: опасность распространения спорообразующего возбудителя во внешней среде!!

1.При жизни у больного животного–берут капли крови из уха в виде 10-12 толстых мазков на предм.стёклах;высушить,сложить мазками внутрь между спичек,уложить в банку,укупорить,сделать надпись«Мазок нефиксирован!»

2. От трупа – ухо, отрезанное с той стороны, на которой лежит труп; пред-варительно его туго перевязывают у основания в 2-х местах, подкладывают снизу поддон, отрезают между лигатурами, место отреза прижигают; ухо заворачивают в слегка увлажнённую дезинфектантом ткань и помещают в герметичную тару. + мазки крови из надреза уха.

3. От трупов и туш свиней – участки отёчной соединительной ткани гортани, миндалин, заглоточные и подчелюстные лимфоузлы.

4. При подозрении на с.я. в ходе вскрытия трупа – вскрытие прекращают, берут для исслед. кусочки селезёнки, печени, изменённые лимфоузлы, кровь.

Посуду с материалом помещ. во влагонепрониц. тару, опечатывают, отпр. в лабораторию с нарочным с сопроводительным документом. + звонок. В лаборатории такой материал исследуют вне очереди, любой степени свежести.

Микроскопия: Окраска по Граму,на капсулу по Ребигеру и на спору. МорфологияBacillusanthracis зависит от материала, из которого деланы мазки.

1. В мазках из крови и свежего пат.материала – крупные Гр+ палочки в виде коротких цепочек, по 2-3. Концы клеток, обращенные в цепочке друг к другу как бы «обрублены», а снаружи – закруглены. Имеется КАПСУЛА, общая для всей цепочки. Неподвижные.

2. В пат.мат. от свиней или несвежем – форма клеток часто атипичная: Гр+ палочки, толстые, изогнутые, зернистые, со вздутиями, +«тени микробов».

3. В молодой к-ре с МПА или МПБ–длинные, переплетающиеся цепочки из крупных Гр+ палочек, иногда утолщен. на концах и напомин. «бамбуковую трость».

4. В старых культурах при доступе О₂образуются округлые эндоспоры, затем вегетативные части микробных клеток отмирают, остаются споры.

Культуральные свойства: B.anthracis–факультативный анаэроб,tоптимум 35-36^оС, неприхотливый к питательн.средам, время роста 18-24 ч.

На МПБ – среда прозрачная, на дне осадок в виде «комочка ваты».

На МПА – крупные,матовые серо-белые колонии в R-форме с локонообразным, бахромчатым краем; под малым увелич. микроскопа характеризуются как«голова Медузы»,«львиная грива». На кровяном агарегемолиза нет.

Для выявления способности образовывать капсулы– посев на специальныекровяные среды типа среды ГКИ. На них образ. гладкие колонии вS-форме + капсула.

Биохимические свойства. Арабиноза+, ксилоза+, гидролиз желатина (рост в виде«перевёрнутой ёлочки»),лецитиназа-, уреаза+;

Тест «феномен жемчужного ожерелья» (+). Для этого - посевна пенициллиновый агар. На вырезанные кусочки такого агара, помещенные на предметные стёкла в чашках Петри, делают посев 3-х часовой испытуемой бульонной культуры. Через 1-3 часа прямо на поверхность агаровой пластинки с посевом помещают покровное стекло и препарат изучают под микроскопом.Чувствит. к пенициллину клеткиB.anthracisпринимают форму шара (образуя сферопласты), цепочки имеют вид «ожерелья».

Фосфатазная активность (-). Тест на фосфатазную активность: посев на среду с фенолфталеин-фосфатом (ФФФ-агар).После получения колоний на этой среде под крышку вносят каплю нашатырногоcпирта. Фосфатазаположительные колонии розовеют, а колонииB.anthracisостаются белыми.

БИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД (B.anthracisвирулентна, антракоиды–нет)

Одновременно с посевом материала на пит.среды суспензию исслед. материала в физ. растворе вводят 2-м белым мышам п/к в спину(0,2-0,5 мл)или морским свинкам п/к в живот(0,5-1,0 мл),гибель через 1-3 суток от септицемии. Наблюдение за живыми до10 сут. Так же проводят заражение выделенной культурой возбудителя.

Фагодиагностика:используются фагиК-ВИЭВ, Гамма МВА. При нанесении специфического фага на зону посева культуры–отсутствие роста.

СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД:

1. Прямой МФАиИФА для исследования материала из очага поражения.

2. РДискПс полученной чистой культурой для её идентификации.

3. РП по Асколидля исследования кож.сырья и пат.материала (ухо).

Если материал несвежий, культуру возбудителя сибирской язвы бывает выделить невозможно из-за произошедшего лизиса микроорганизмов. В этом случае также применяют РП по Асколи.

МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ МЕТОД:ПЦР– обнаружение генов, кодирующих синтез токсина и капсулы.

АЛЛЕРГИЧЕСКИЙ МЕТОД: Применяется только у людей: аллерген –антраксинп/к в предплечье (как реакция Манту). У больных, переболевших и привитых – зона воспаления > 15 мм.

БИОПРЕПАРАТЫ:

1. Живая вакцина из бескапсульного эталонного штамма СТИ.

2. Живая вакцина из штамма 55.

3. Вакцина ГНКИ.

4. Ассоциированная живая жидкая вакцина против сибирской язвы и эмкара КРС.

Гипериммунная лечебно-профилактическая сыворотка и гамма-глобулин.

Диагностические биопрепараты:преципитирующая сыворотка и стандартный Аг для РП, люминесцирующие сыворотки для МФА, диагностические бактериофаги.