Справочный материал для оформления протоколов

Принцип ПЦР

Первый этап амплификации системы ПЦР – это тепловая денатурация образца ДНК в результате повышения температуры в реакционной пробирке до 95°С. Кроме исходной ДНК, в реакционной пробирке содержится избыточное количество двух нуклеотидных праймеров, термостабильная ДНК-полимераза (TaqДНК-полимераза, выделенная из бактерийTermus aquticus) и четыре дезоксирибонуклеотида. Высокая температура поддерживается в течение 1 мин.

На втором этапе температура в смеси медленно понижается до 55°С. На этом этапе праймеры спариваются с комплементарными им последовательностями в исходной ДНК.

На третьем этапе температура поднимается до 75°С, являющейся оптимальной для каталитической активности TaqДНК-полимеразы. Синтез ДНК инициируется с 3-гидроксильного конца каждого праймера.

Продукты ПЦР выявляются с помощью электрофореза в агарозном геле.

_____________________________________________________________________________



занятие №9:	Микробный антагонизм. Антибиотики Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам Практическое использование бактериоциногении
УЧЕБНАЯ Цель:	1. Изучить действие антибиотиков на микроорганизмы. 2. Изучить методы практического использования микробного антагонизма.

Вопросы для подготовки

1. Микробный антагонизм, определение понятия, его формы, биологическое значение и методы выявления. Примеры.

2. Бактериоцины как факторы внутривидового антагонизма и защиты. Примеры.

3. Использование бактериоциночувствительности бактерий как эпидемиологического маркера для установления идентичности культур различного происхождения.

4. Антибиотики, определение понятия, способы получения. Требования, предъявляемые к антибиотикам. Примеры.

5. Классификация антибиотиков по происхождению, химическому составу, эффекту и спектру действия.

6. Молекулярные механизмы действия антибиотиков на микроорганизмы (по группам).

7. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам (диско-диффузионный метод, метод серийных разведений, экспресс-методы).

8. Методы определения концентрации антибиотика в биологических жидкостях (сыворотка крови, моча).

9. Устойчивость микроорганизмов к антибиотикам, молекулярные механизмы формирования устойчивости (по группам) и пути преодоления. Примеры.

10. Принципы рациональной антибиотикотерапии. Недостатки, осложнения и неудачи антибиотикотерапии.

задания для подготовки

1. Составить и заполнить таблицу: «Общая характеристика основных групп антимикробных химиотерапевтических препаратов»

Группа химиопрепаратов	Спектр действия (узкий/ широкий)	Тип действия (статический/цидный)	Механизм действия (мишень)	Пример
Сульфаниламиды Хинолоны/ фторхинолоны Нитрофураны Имидазолы Оксазолидоны -лактамы Гликопептиды Аминогликозиды Тетрациклины Макролиды Хлорамфеникол Полипептиды Полиены

2. Решить ситуационную задачу

В терапевтическом отделении среди больных, госпитализированных по поводу пневмонии, возникла вспышка острого кишечного заболевания. Лабораторная диагностика показала, что у всех больных заболевание вызвано кишечной палочкой одной серогруппы. Для проведения эпидемиологического анализа необходимо определить антибиотикочувствительность и колициночувствительность выделенных штаммов кишечных палочек.

Ответить на вопросы:

1. Какой метод и принцип диагностики применен?

2. Кто стал источником инфекции? Почему?

3. Какой антибиотик необходимо использовать для проведения рациональной антибиотикотерапии? Почему?

Таблица. Результаты исследования

Обследуемые	Антибиотики (dзоны подавления роста, мм)					Колицины**
	Амп	Ген	Цеф	Цип	Лев	А	В	С	D	Е
Больной А.	5	26	5	25	8	+	+	-	-	+
Сотрудник В.	24	20	23	40	5	+	+	+	-	+
Сотрудник С.	5	26	5	25	5	+	+	-	-	+
* Амп – ампициллин Ген – гентамицин Цеф – цефазолин Цип – ципрофлоксацин Лев – левомицетин						** «+» – чувствительна «–» – не чувствительна