2.3 Определение содержания растворимых фенольных соединений

Для экстракции взвешивали по 200 мг механически измельченного сырья (листья). Помещали навеску в фарфоровую ступку, добавляли на кончике скальпеля мел для нейтрализации кислотности вакуолярного сока и столько же кварцевого песка в качестве абразива, приливали 2 мл спирта и тщательно растерли. Затем к смеси добавили 8 мл 70% этилового спирта. После чего содержимое ступки профильтровали через фильтр Шотта.

В градуированную пробирку объемом 10 мл приливали 0,5 мл полученного экстракта, 8 мл дистиллированной воды и 0,5 мл реактива Фолина-Дениса, через 2 мин добавили 1 мл 10% раствора углекислого натрия. Полученную смесь оставляли на 40 мин до появления окраски. Затем измеряли оптическую плотность с помощью спектрофотометра Cary Vin (Германия) при длине волны 720 нм. В качестве контрольного раствора использовали спирт. Расчет содержания фенольных соединений произвели с использованием калибровочного коэффициента (а=0,0058) по формуле:

С=( Р× V₁)÷(а× V₂× В), где

С-содержание фенольных соединений (мкг/г);

Р - оптическая плотность раствора;

а - калибровочного коэффициента (0,0058);

V₁-объем экстракта (мл);

V_2-общий объем пробы (мл);

В-навеска биологического материала для анализа (г).

2.4 Определение содержания гидроксикоричных кислот

Для определения содержания гидроксикоричных кислот использовали спиртовой экстракт из листьев тритикале, способ его получения описан выше.

В градуированную пробирку объемом 10 мл приливали 0,5 мл экстракта и 4,5 мл дистиллированной воды. Затем измеряли оптическую плотность с помощью спектрофотометра Cary Vin (Германия) при длине волны 330 нм.

Содержание гидроксикоричных кислот (в мг/мл) рассчитывали по уравнению калибровочной кривой, построенной для кофейной кислоты (рисунок 2.1).

Рисунок 2.1 – Зависимость оптической плотности от концентрации кофейной кислоты.

Пересчет на единицу сырого веса листьев (в мг/г) производили следующим образом: С=С мг/мл× 1000÷0,2, где С – содержание ГКК (мг/г).

2.5 Статистическая обработка

Статистическая обработка результатов опыта позволяет определить границы случайных колебаний полученных данных, то есть установить точность опыта, а также достоверность различий по средним значениям между вариантами опыта.

Представленные экспериментальные данные проводились в 3-кратной биологической повторности. Для обработки полученных результатов были использованы стандартные методы вариационной статистики. Основными статистическими характеристиками служили средняя арифметическая величина (х¯), среднее квадратное отклонение (δ) и ошибка средней величины (Sх).

Средняя арифметическая величина определяется по формуле:

где ∑xj – сумма всех повторностей измерения,

n – число повторностей.

Для определения среднего квадратичного отклонения использовалось выражение:

где ∑(xj-x)² - сумма квадратов отклонений от средней арифметической величины.

Ошибка средней величины определяется по формуле:

Данные величины рассчитывали с помощью пакета статистического анализа данных программы Microsoft Excel.